细胞免疫功能检测平台的建立和应用演示文稿

细胞免疫功能检测平台的建立和应用演示文稿当前第1页\共有47页\编于星期四\7点细胞免疫功能检测平台的建立和应用当前第2页\共有47页\编于星期四\7点T细胞免疫功能与感染T细胞免疫功能的抗感染作用正常人的免疫功能T细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定T细胞亚群T细胞功能T细胞免疫功能测定的临床意义当前第3页\共有47页\编于星期四\7点当前第4页\共有47页\编于星期四\7点机体的免疫系统非特异免疫皮肤粘膜，吞噬细胞，NK细胞，补体，正常菌群特异性免疫细胞免疫：CD4+细胞，CD8+细胞体液免疫：B细胞当前第5页\共有47页\编于星期四\7点机体的免疫系统CD4细胞非特异性免疫特异性免疫NK细胞，吞噬细胞B细胞CD8细胞当前第6页\共有47页\编于星期四\7点CD4+细胞的免疫中枢指挥功能当前第7页\共有47页\编于星期四\7点CD4+细胞的免疫中枢指挥功能当前第8页\共有47页\编于星期四\7点CD4+细胞的产生和分群记忆CD4胸腺纯真CD4NetNaiveCD4#5x107/天抗原当前第9页\共有47页\编于星期四\7点纯真

纯真和记忆/效应ＣＤ4细胞亚群的产生

记忆效应凋亡胸腺效应效应效应当前第10页\共有47页\编于星期四\7点纯真CD4和记忆CD4细胞当前第11页\共有47页\编于星期四\7点纯真/记忆CD+细胞分泌不同的介素当前第12页\共有47页\编于星期四\7点细胞免疫功能的抗感染作用感染发生的两个基本要素：病原体和机体免疫功能免疫功能对疾病转归的影响：对免疫功能正常的人不起致病作用的病原体，在免疫功能低下的人身上可发生致命性的感染；免疫功能正常的人发生某种感染后可很快恢复，而在免疫功能紊乱的人则成为慢性状态；对同样的病原体所导致的感染，给予同样的抗感染治疗，转归完全不一样当前第13页\共有47页\编于星期四\7点细胞免疫功能的抗感染作用为什么？？？乙肝病毒感染：有人为乙肝病毒携带者,也有人成为慢性乙肝病人？HPV感染：多数人表现为无症状的HPV潜伏感染者，少数人表现为复发性HPV‘’

CMV感染:90%的正常人隐性感染终生带病毒，但免疫功能低下时可致死？当前第14页\共有47页\编于星期四\7点当前第15页\共有47页\编于星期四\7点

HIV感染的自然史

CD4细胞(cell/mm3）800400

急性感染期

无症状期

艾滋病前期和艾滋病期

CD4

病毒载量抗HIV的CTLHIV抗体当前第16页\共有47页\编于星期四\7点HIV感染者的三种临床转归VirusCD4CD8aHIVCD4CD4CD8CD8aHIVVirusVirusStandard8yFast:4-5y:(2%)(CCRgenes, HLAB35…Slow:>10y:(2%),CCRgenes,HLAB57…当前第17页\共有47页\编于星期四\7点免疫功能与机会性感染相关性years200CD4counts白念菌Zona卡波济肉瘤淋巴瘤PCP弓型体CMVMAIC48艾滋病期HIVload210当前第18页\共有47页\编于星期四\7点细胞免疫功能的抗感染作用

—不重视机体免疫功能的后果化疗药物的滥用耐药菌的产生二重感染的发生进一步损害免疫功能当前第19页\共有47页\编于星期四\7点细胞免疫功能与感染细胞免疫功能的抗感染作用

正常人的免疫功能细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定

T细胞亚群T细胞功能细胞免疫功能测定的临床意义当前第20页\共有47页\编于星期四\7点细胞免疫功能与感染

—免疫功能测定方法体内：PPD试验？体外：

体液免疫：B细胞数量，免疫球蛋白定量

细胞免疫：T细胞亚群的数量和功能（流式细胞仪，ELISA，ELISPOT）当前第21页\共有47页\编于星期四\7点T细胞免疫功能的测定T细胞功能（细胞介素，增殖反应）功能亚群（CD28）激活亚群（CD38、HLA-Dr）纯真亚群和记忆亚群凋亡亚群,Treg（T细胞、CD4、CD8、B、NK）当前第22页\共有47页\编于星期四\7点Acytometerlookslikeaneasy-to-usemachine……

butlookinside:It’sacomplexlasermachine!当前第23页\共有47页\编于星期四\7点PMTPMTPMTPMT4DichroicFiltersBandpassFiltersFlowCytometryPrincipleLaser1234Flowcell当前第24页\共有47页\编于星期四\7点T细胞免疫功能的测定T细胞功能（细胞介素，增殖反应）功能亚群（CD28）激活亚群（CD38、HLA-Dr）纯真亚群和记忆亚群凋亡亚群,Treg（T细胞、CD4、CD8、B、NK）当前第25页\共有47页\编于星期四\7点淋巴细胞免疫表型检测指标B淋巴细胞（CD19+）反映机体体液免疫功能状态自然杀伤细胞（CD3-CD16/56+）反映机体天然免疫功能状态辅助性及杀伤性T淋巴细胞（CD3+CD4+/CD8+）反映机体细胞免疫功能状态T淋巴细胞纯真和记忆亚群（CD4+CD45RA+62L+/CD45RO+）判断CD3+CD4+降低的重要指标T淋巴细胞的激活亚群（CD4+/CD8+CD38+/HLA-DR+）评价细胞的激活状态。T淋巴细胞的功能亚群（CD4+/CD8+CD28+）衡量T淋巴细胞功能的重要指标。当前第26页\共有47页\编于星期四\7点不同年龄组正常Ｔ细胞亚群的建立淋巴细胞表型青年(18-40y,N=57)中年(41-60,N=45)老年(大于61y,N=52)B淋巴细胞6.4~30.6104~5714.2~19.777~5662.4~24.339~544自然杀伤细胞4.2~35.696~8723.5~40.453~9854.1~49.871~1340辅助性T淋巴细胞25.1~64.0442~164519.8~54.0259~194619.6~55.2291~1730杀伤性T淋巴细胞16.7~47.2321~116615.9~42.3208~8258.2~44.4173~1114T淋巴细胞纯真亚群17.4~61.5117~5865.2~68.540~7162.2~62.725~688CD4/CD80.57~3.280.55~3.300.62~5.97当前第27页\共有47页\编于星期四\7点细胞免疫功能测定方法

—T细胞功能的测定T细胞增殖功能同位素H3掺入试验BrdU，Ki67CFSUT细胞毒试验（CTL）和细胞介素测定同位素Cr51四联体ELISA流式细胞仪ELISPOT当前第28页\共有47页\编于星期四\7点ELISPOT方法ELISPOT方法是目前国际上广泛应用的较新的体外测定特异性抗体分泌细胞和细胞因子分泌细胞的方法。该方法可在单细胞水平检测淋巴细胞对特异性抗原的反应能力及计数特异性抗原刺激下细胞因子分泌细胞的频数。优点：敏感---能检测产生细胞因子频率极低的细胞，灵敏度高达1/1000000。

特异

直观---可直接在显微镜下人工计数斑点或通过ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表1个特异性抗体分泌细胞或细胞因子分泌细胞。

当前第29页\共有47页\编于星期四\7点ELISPOT原理->PBMC->刺激原孵育16～18h或40～48hIFN抗体BSPA酶和底物斑点!!!当前第30页\共有47页\编于星期四\7点ELISpot结果阴性对照阳性对照样本孔样本孔图中的每个斑点代表一个能分泌IFN-的抗原特异性CD4+T细胞或CTL当前第31页\共有47页\编于星期四\7点T细胞免疫功能与感染T细胞免疫功能的抗感染作用正常人的免疫功能T细胞免疫的抗感染作用T细胞免疫功能的测定T细胞亚群T细胞功能T细胞免疫功能测定的临床意义当前第32页\共有47页\编于星期四\7点T细胞免疫功能与感染

—细胞免疫功能测定的临床意义HIV感染和艾滋病其它各种感染性疾病

--病毒感染：SARS,HBV，HCV，EBV，CMV，HFRS,HFMD --结核病，真菌感染。肿瘤和化疗病人的免疫功能监测器官移植病人的免疫监测自身免疫病和过敏性疾病当前第33页\共有47页\编于星期四\7点细胞免疫功能与感染

—细胞免疫功能测定的临床意义中国HIV/AIDS的免疫病理改变和免疫重建当前第34页\共有47页\编于星期四\7点艾滋病的主要免疫病理改变CD4+T细胞数的减少；CD4+T功能的减低;异常的细胞免疫激活。当前第35页\共有47页\编于星期四\7点

HIV感染的自然史

CD4细胞(cell/mm3）800400

急性感染期

无症状期

艾滋病前期和艾滋病期

CD4

病毒载量抗HIV的CTLHIV抗体当前第36页\共有47页\编于星期四\7点HIV/AIDS患者淋巴细胞亚群与正常对照比较HIV/AIDS患者n=263正常对照n=57B细胞计数109(159,71)*261(294,207)NK细胞计数110(195,61)*339(471,234)CD4+T计数205(348,63)*787(1058,615)纯真CD4+T计数29(86,6)*328(382,256)纯真CD4+T比例18.5(32.0,6.5)*35.4(45.5,30.0)记忆CD4+T计数136(232,44)*453(538,360)记忆CD4+T比例72.6(83.2,60.1)*56.0(66.3,47.7)CD4+CD28+功能亚群比例86.1(94.0,68.3)*95.7(97.6,91.0)CD8+T计数652(914,422)†538(642,480)CD8+CD38+激活亚群比例84.3(92.7,69.0)*42.6(50.6,36.1)（计数：个/mm3，比例：%，数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示）*与正常对照组相比存在显著差异P<0.001。†与正常对照组相比存在显著差异P=0.021。当前第37页\共有47页\编于星期四\7点早中晚3组ＨＩＶ患者淋巴细胞亚群的比较分组Ⅰ组n=131Ⅱ组n=66Ⅲ组n=66CD4+T细胞计数63(134,20)†279(317,246)†493(627,413)病毒载量4.88(5.41,4.46)†4.3(4.71,3.69)†3.49(4.22,2.73)B细胞计数84(118,51)*130(171,91)161(216,123)纯真CD4+T比例11.5(25.5,4.7)*26.3(37.4,15)25.4(40.2,14.1)记忆CD4+T比例77.8(88.3,66.7)*67.2(79.1,58)64.9(77.2,54.1)CD4+CD28+T/CD4+T72.7(89.3,52.8)*92.9(95.8,85.1)91.3(94.9,82.7)CD8+CD38+T/CD8+T90.2(94.7,80.1)*78.9(86.7,66.4)69(84.9,61.5)†Ⅰ组与Ⅱ、Ⅲ组相比P<0.001,Ⅱ组与Ⅲ组相比P<0.001。*Ⅰ组与Ⅱ、Ⅲ两组均存在显著差异P<0.001,Ⅱ、Ⅲ组两组无显著差异。（计数：个/mm3，比例：%，数值以中位数（上四分位数，下四分位数）表示）当前第38页\共有47页\编于星期四\7点HIV/AIDS的免疫病理改变

—选择性纯真T4细胞的减少正常人HIV感染者AIDS病人当前第39页\共有47页\编于星期四\7点HIV/AIDS的免疫病理改变

—T4细胞辅刺激信号受体的表达减少正常人HIV感染者AIDS病人当前第40页\共有47页\编于星期四\7点CD28—T细胞辅刺激信号受体当前第41页\共有47页\编于星期四\7点HIV/