第二章 基因工程习题 答案

基因工程课程习题选择题

001基因工程操作三大基本元件是【Ａ】

I供体II受体III载体IV抗体V配体

ＡI+II+III

ＢI+III+IV

ＣII+III+IV

ＤII+IV+V

ＥIII+IV+V002依照当今生命科学理论，基因工程用途是【E】

I分离纯化基因II大量生产生物分子III构建新型物种IV提升基因重组效率

ＡI+II+III

ＢI+II+IV

ＣI+III+IV

ＤII+III+IV

ＥI+II+III+IV003依照基因工程定义，以下各名词中不能代替基因工程是【A】

Ａ基因诱变

Ｂ分子克隆

ＣDNA重组

Ｄ遗传工程

Ｅ基因无性繁殖004基因工程单元操作次序是【B】

Ａ增，转，检，切，接

Ｂ切，接，转，增，检

Ｃ接，转，增，检，切

Ｄ检，切，接，增，转

Ｅ切，接，增，转，检005以下关于基因叙述，错误是【A】

Ａ蛋白质是基因表示唯一产物

Ｂ基因是DNA链上具备编码功效片段

Ｃ基因也能够是RNA

Ｄ基因突变不一定造成其表示产物改变结构

Ｅ基因具备方向性006限制性核酸内切酶是由细菌产生，其生理意义是【D】

Ａ修复本身遗传缺点

Ｂ促进本身基因重组

Ｃ强化本身核酸代谢

Ｄ提升本身防御能力

Ｅ补充本身核苷酸消耗007天然PstI限制性内切酶起源是【D】

ＡBacillusamyloliquefaciens

ＢEscherichiacoli

ＣHaemophilusinfluenzae

ＤProvidenciastuartii

ＥStreptomyceslividans008T4-DNA连接酶是经过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物关键基团是【D】

Ａ2'-OH和5'-P

Ｂ2'-OH和3'-P

Ｃ3'-OH和2'-P

Ｄ3'-OH和5'-P

Ｅ5'-OH和3'-P009若载体DNA用M酶切开，则以下五种带有N酶粘性末端外源DNA片段中，能直接与载体拼接是【D】

M

N

ＡA/AGCTTT/TCGAA

ＢC/CATGGACATG/T

ＣCCC/GGGG/GGCCC

ＤG/GATCCA/GATCT

ＥGAGCT/CG/AGCTC010以下关于质粒分子生物学叙述，错误是【B】

Ａ质粒是共价环状双链DNA分子

Ｂ天然质粒通常不含有限制性内切酶识别序列

Ｃ质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA自主复制

Ｄ松弛复制型质粒可用氯霉素扩增

Ｅ质粒并非其宿主细胞生长所必需011带有多个不一样种复制起始区质粒是【A】

Ａ穿梭质粒

Ｂ表示质粒

Ｃ探针质粒

Ｄ整合质粒

Ｅ多拷贝质粒012以下各惯用载体装载量排列次序，正确是【A】

ＡCosmid>λ-DNA>Plasmid

Ｂλ-DNA>Cosmid>Plasmid

ＣPlasmid>λ-DNA>Cosmid

ＤCosmid>Plasmid>λ-DNA

Ｅλ-DNA>Plasmid>Cosmid013现在在高等动物基因工程中广泛使用载体是【C】

Ａ质粒DNA

Ｂ噬菌体DNA

Ｃ病毒DNA

Ｄ线粒体DNA

Ｅ叶绿体DNA014若某质粒带有lacZ标识基因，那么与之相匹配筛选方法是在筛选培养基中加入【D】

Ａ半乳糖

Ｂ葡萄糖

Ｃ蔗糖

Ｄ5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal）

Ｅ异丙基巯基-b-半乳糖苷（IPTG）015质粒是基因工程中最惯用运载体，它主要特点是【C】

①能自主复制

②不能自主复制

③结构很小④蛋白质

⑤环状RNA

⑥环状DNA

⑦能“友好”地“借居”A①③⑤⑦

B②④⑥C①③⑥⑦

D②③⑥⑦016双脱氧末端终止法测定DNA序列是基于【A】

ＡDNA聚合反应

ＢDNA连接反应

ＣDNA降解反应

Ｄ特殊DNA连接酶

Ｅ聚合单体2'和5'位脱氧017以下三种方法中，能有效区分重组子与非重组子是【E】

I限制性酶切IIPCR扩增III抗药性筛选

ＡI

ＢI+II

ＣI+III

ＤII+III

ＥI+II+III018鸟枪法克隆目标基因战略适适用于【A】

Ａ原核细菌

Ｂ酵母菌

Ｃ丝状真菌

Ｄ植物

Ｅ人类019cDNA第一链合成所需引物是【D】

ＡPolyA

ＢPolyC

ＣPolyG

ＤPolyT

Ｅ发夹结构020TaqDNA聚合酶发觉使得PCR技术广泛利用成为可能，这是因为【D】

ＡTaqDNA聚合酶能有效地变性基因扩增产物

ＢTaqDNA聚合酶催化聚和反应不需要引物

ＣTaqDNA聚合酶具备极强聚和活性

ＤTaqDNA聚合酶能使多轮扩增反应连续化

ＥTaqDNA聚合酶能使扩增反应在DNA变性条件下进行021为了利用PCR技术扩增以下染色体DNA片段上虚线部分，应选取引物次序是【D】ＡI+II

ＢI+III

ＣI+IV

ＤII+III

ＥII+IV022构建基因文库通常使用载体是【E】

I质粒IIλ-DNAIIICosmid

ＡI

ＢII

ＣIII

ＤII+III

ＥI+II+III023强化基因转录元件是【C】

Ａ密码子

Ｂ复制子

Ｃ开启子

Ｄ内含子

Ｅ外显子024开启子特征之一是【B】

ＡGC富积区

ＢTATABox

Ｃ转录起始位点

Ｄ长度平均1kb

Ｅ含有一些稀有碱基025以下基因调控元件中属于反式调控元件是【A】

Ａ阻遏蛋白

Ｂ开启子

Ｃ操作子

Ｄ终止子

Ｅ增强子026包涵体是一个【E】

Ａ受体细胞中难溶于水蛋白颗粒

Ｂ大肠杆菌亚细胞结构

Ｃ噬菌体或病毒DNA体外包装颗粒

Ｄ用于转化动物细胞脂质体

Ｅ外源基因表示产物混合物027外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白形式表示优点是【Ｅ】

I融合基因能稳定扩增II融合蛋白能抗蛋白酶降解III表示产物易于亲和层析分离

ＡIII

ＢI+II

ＣI+III

ＤII+III

ＥI+II+III028第二代基因工程是指【C】

Ａ路径工程

Ｂ代谢工程

Ｃ蛋白质工程

ＤRNA基因工程

Ｅ细胞器基因工程029基因工程菌中重组质粒丢失机制是【Ｃ】Ａ重组质粒渗透至细胞外

Ｂ重组质粒被细胞内核酸酶降解

Ｃ重组质粒在细胞分裂时不均匀分配

Ｄ重组质粒杀死受体细胞

Ｅ重组质粒刺激受体细胞提升其通透性030利用毛细管作用原理，将凝胶电泳分离后DNA片段转移至硝酸纤维素膜上并依照核酸杂交原理进行分析技术是【Ｄ】ＡWestern印迹转移技术ＢNorthern印迹转移技术Ｃ基因表现型分析法ＤSouthern印迹转移技术031在翻译过程中．mRNA必需首先与核糖体相结合才能进行蛋白质合成。在原核生物中，mRNA分子上有两个核糖体结合位点，一个是起始密码AUG，另一个是【Ｃ】Ａ开启子Ｂ调整基因ＣSD序列Ｄ终止子二、填空题答案1、Ⅱ型限制性内切酶可特异性地识别呈双重螺旋对称结构特定双链DNA序列并进行切割。如BstBⅠ(TTCGAA）消化可产生含5′CG3′5′磷酰基端黏性末端末端，PstⅠ（CTGCAG）消化可产生5′TGCA3′3′－OH端黏性末端，而SmaⅠ（CCCGGG）消化产生平末端。2、识别次序相同但切割位点不一样者称同位酶，识别次序与切割方式均相同者称同裂酶，起源与识别次序均不一样，但切割后形成限制性片段有相同粘性末端，称同尾酶。3、受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2等化学试剂法）处理后，细胞膜通透性发生改变，成为能允许有外源DNA载体分子经过，这种细胞称为感受态细胞。4、在翻译过程中，mRNA必需首先与核糖体相结合才能进行蛋白质合成。在原核生物中，mRNA分子上有两个核糖体结合位点，一个是起始密码AUG，另一个是SD序列。5、在提取分离DNA过程中，加入酚-氯仿、去垢剂或酶目标是使蛋白质变性或水解，除去蛋白质，使用金属离子螯合剂如EDTA等原因是细胞内有金属离子，如Mg2+，是酶活性辅助因子，会使DNA被DNase分解，故除去使DNase活性Mg2+以保护DNA不被变性或降解。在小批量碱变性提取质粒过程中加入醇溶液目标是是DNA变性沉淀，并除去蛋白质、糖类等其余水溶性杂质，使之分离，加入Rnase目标是除去DNA沉淀中RNA，是凝胶电泳检测时条带更显著。6、PCR全称是聚合酶链式反应，它是一个在体外模拟DNA复制方式选择性地扩增DNA特殊区域技术。它是在四种脱氧核苷三磷酸存在下，以寡聚核苷酸为引物及单链DNA为模板，经DNA聚合酶催化合成DNA互补链过程，其基本反应步骤为高温变性、低温退火和适温延伸，并循环n次，达成扩增目标。7、采取光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子或其余生物样品有序地固化于支持物表面，然后与已标识待测生物样品中靶分子杂交，经过特定仪器对杂交信号强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子数量技术称为生物芯片技术，依照固定探针不一样，可分为基因芯片、蛋白芯片、细胞芯片和组织芯片。该技术具备高通量、快速高效、高度灵敏等特点。8、依照Southernblot结果能够说明被检测样品中DNA及其含量，了解基因状态,如是否有点突变、扩增重排等，Northernblot则用于检测样品中是否含有基因转录产物（mRNA）及其含量，而Westernblot结果能够明被检测基因在蛋白质水平上表示情况。9、基因工程中用来取得有功效异源蛋白质体系称为表示系统。10、用火药爆炸或者高压气体加速将包裹了DNA球状金粉或者钨粉颗粒直接送入完整植物组织或者细胞中，这一方法称为基因枪法。基因工程课程习题问答题基因工程操作过程主要步骤包含哪些？切、接、转、增、筛（检）（1）切——取得DNA片段，取得目标基因；载体选择与制备。

方法：从生物基因组中分离得到——基因组DNA——>酶切产物从总RNA中分离得到mRNA，再逆转录得到cDNA人工合成——化学合成；PCR（聚合酶链式反应）接——DNA片段和载体DNA在体外连接，形成重组子。转——将重组DNA引入宿主细胞方式：转化——某一基因型细胞从周围介质中吸收另一基因型细胞DNA，而使其基因型和表型发生对应改变现象；转染——除去蛋白质外壳病毒核酸感染细胞或原生质体过程；转导——用噬菌体做载体，将一个细胞基因传递给另一个细胞过程。还有显微注射等。（4）增——培养已转化细胞，使目标基因在其中进行复制、扩增，并将其整合到受体细胞基因组中。（5）筛、检——重组子筛选与判定。筛选和判定转化细胞，取得使外源基因高效表示基因工程菌或细胞。2、什么是限制性核酸内切酶？第二型限制酶有何特点？限制性核酸内切酶（限制酶，restrictionendonuclease）是一类能够识别双链DNA分子中一些特定核苷酸序列，并对DNA分子进行切割核酸内切酶。第二型限制酶特点:2亚基，单辅因子;识别序列是由4、5、6或7个核苷酸组成特定核苷酸序列，识别位点双重旋转对称结构，切割与识别位点相同或相近。分子量较小，仅需Mg2+作为催化反应辅助因子，不需ATP。3、分析影响限制性内切酶酶切原因有哪些？（1）温度：大部分限制性内切酶最适反应温度为37℃，少数酶高于或低于这个温度。（2）时间：适宜，大多为1h，可过夜反应。（3）溶液体系：要求有稳定pH环境。标准缓冲溶液中含有氯化钙、氯化镁或氯化钾、Tris-HCl、β-巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT）以及牛血清蛋白质（BSA）和Mg2+，具备一定酸碱值即pH值。（4）盐离子浓度：不一样限制性内切酶对盐离子强度（Na+）有不一样要求，通常按离子强度不一样分为低（0mmol/L）、中（50mmol/L）、高盐（100mmol/L）三类。Mg2+也是限制性内切酶酶切反应所需。（5）反应体积和甘油浓度：在进行酶切反应时，加酶体积通常不超出总反应10%，若加酶体积太大，甘油浓度过高，则会影响酶切反应。（6）DNA纯度和结构：DNA样品中所含蛋白质、有机溶剂及RNA等杂质均会影响酶切反应速度和酶切完全度，酶切底物通常是双链DNA，DNA甲基化位置会影响酶切反应。4、一个经典原核表示质粒主要元件有哪些？《基因工程》P53能在宿主细胞中自主复制序列即复制子；控制转录开启子如lac、trp等；选择标识编码序列如各种抗生素抗性基因；多克隆位点（MCS）；转录调控序列，如一个适宜核糖体结合位点和起始密码子ATG等。5、以人工构建pBR322质粒为例说明基因工程载体特点。有多个限制性内切酶单一位点（EcoRⅠ，HindⅢ等）四环素抗性基因Tetr和氨苄青霉素抗性基因Ampr，且Tetr中有BamHI（G↓GATCC）切点，Ampr中有PstⅠ切点（CTGCA↓G）和SalI切点（GTCGAC）。能够经过AmprTets来筛选重组体。——插入失活筛选原理。在细胞中是多拷贝，是松弛型复制子。具备复制起始点（ori)。分子量较小，安全。6、小批量碱变性提取质粒DNA原理与基本过程怎样？碱变性法是惯用质粒抽提方法，其原理是基于染色体DNA与质粒DNA变性与复性差异而达成分离目标。在pH值高达12.6碱性条件下，染色体DNA氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状两条互补链不会完全分离，当以pH4.8NaAc高盐缓冲液去调整其pH值至中性时，变性质粒DNA又恢复原来构型，保留在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连网状结构，经过离心，染色体DNA与不稳定大分子RNA、蛋白质－SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。小批量碱变性提取质粒DNA基本过程为——（1）酶或机械法等方法破坏细胞，释放出胞内物质；（2）加碱使DNA与蛋白质变性，加中和液复性。因为质粒DNA分子量小易复性，从而使得其与基因组DNA分离；（3）在上清液中经过酚－氯仿抽提、去垢剂或酶使剩下蛋白质变性或水解，除去蛋白质；（4）再加入醇溶液使质粒DNA变性沉淀而与其余水溶性物质分离；（5）将沉淀溶解于有RNaseTE溶液中，温育降解RNA后电泳检测、-20℃7、什么是基因文库？基因组文库与cDNA文库制备方法有何区分？经过克隆技术将大分子DNA编码全部或者绝大多数基因或基因组进行扩增后DNA片段混合物，称为基因文库或DNA文库、克隆库。分为基因组文库和cDNA文库两种。基因组DNA文库制备：从生物组织细胞提取出全部DNA，用物理方法（超声波、搅拌剪力等）或酶法（限制性核酸内切酶不完全酶解）将DNA降解成预期大小片段，然后将这些片段与适当载体（惯用噬菌体、粘粒或YAC载体）连接，转入受体细菌或细胞，这么每一个细胞接收了含有一个基因组DNA片段与载体连接重组DNA分子，而且能够繁殖扩增，许多细胞一起组成一个含有基因组各DNA片段克隆集合体，就是基因组文库。cDNA文库制备：提取出组织细胞全部mRNA，在体外反转录成cDNA，与适当载体（惯用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，许多细胞一起组成包含着某细胞全部mRNA信息cDNA克隆集合称为该组织细胞cDNA文库。8、PCR定义、原理、方法？在生命科学领域有何详细用途？一个在体外模拟DNA复制方式选择性扩增DNA特殊区域技术，又称为无细胞克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法。是在四种脱氧核苷三磷酸（dNTP）存在下，以寡聚核苷酸为引物及单链DNA为模板，经DNA聚合酶催化合成DNA互补链过程。原理与方法:1.高温变性双链DNA在高温下解链（变性）变成单链过程;2.低温退火降温后变性单链DNA可按照A=T,C三G特异性配正确标准重新结合恢复双链结构;同模板DNA特异性互补结合引物结合3.适温延伸DNA聚合酶酶促作用,即可沿引物DNA5’向末端合成、延长与模板互补核苷酸链;4.循环n次。用途：1.特异性扩增目标（模板）DNA。2.特异性检测目标RNA（如表示水平）（经过反转录酶反应）3.用于基因重组（扩增特定DNA片段）4.制备特异性探针5.用于DNA测序6.用于基因定位分析7.经过诱变寡核苷酸引物产生各种突变体8.用于分析基因组DNA多态性(RandomAmplifiedPoly-morphicDNA=RAPD)9.构建cDNA或基因组DNA文库（从mRNA或基因组DNA中）10.实时荧光定量PCR：DNA或RNA绝对定量分析9、琼脂糖凝胶电泳分离DNA原理是什么？琼脂糖是从琼脂中提取一个多糖，具亲水性，但不带电荷，是一个很好电泳支持物。DNA分子在琼脂糖凝胶中时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定电场强度下,DNA分子迁移速度取决于分子筛效应。具备不一样相对分子质量DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。相对分子质量相同，但构型不一样DNA分子泳动速度不一样。10、什么是原位杂交技术？其基本过程怎样？依照核酸杂交原理，利用基因探针检出培养板上重组转化体菌落位置技术。基本过程：（1）将硝酸纤维素滤膜铺放在生长着转化菌落平板表面，使其中质粒DNA转移到滤膜上。（2）取出滤膜，作溶菌、碱变性（0.5mol/LNaOH），酸中和（Tris.ClpH7.4）等处理后，转移到一张干滤纸上，置于室温20~30min，使滤膜干燥。将滤膜夹在两张干滤纸之间，在真空烤箱中于80℃烘烤2h，固定DNA。（3）带有DNA印迹滤膜同32P标识适当探针杂交、以检测带有重组质粒（含有被研究DNA插入片段）阳性菌落。（4）将放射自显影X光底片同保留下来原菌落平板对照，从中挑出阳性菌落供作深入分析研究。11、什么是开启子?什么是SD序列？开启子(promoter，P)：是指能被RNA聚合酶识别、结合并开启基因转录一段DNA序列(40bp-60bp)。富含A-T碱基对，具备保守序列：-10区（pribnowbox）：TATAAT；-35区：不一样开启子效率不一样，强开启子指导产生较多量mRNA，弱开启子指导下转录合成mRNA极少。开启子强度主要决定于开启子结构。原核生物RNA聚合酶不能识别真核细胞开启子，所以真核基因在原核生物表示时，应将真核基因置于原核生物强开启子下，以实现高效转录。在原核生物中，mRNA起始密码子AUG上游3-11bp处一段能与16SrRNA3’mRNA分子上有两个核糖体结合位点，一个是起始密码AUG，另一个是起始密码AUG上游处一段序列．后者称为SD序列。12、什么是操纵子？请用简图表示操纵子基本结构并以乳糖操纵子负调控系统（阻遏蛋白调控作用）为例说明其功效。操纵子是原核生物转录单位。操纵子组成为结构基因连同其上游调控序列(开启子promotorP、操纵基因operatorO、其余调整序列)共同组成一个操纵子。

无诱导物（乳糖）时，阻遏物基因I产生阻遏蛋白与操纵基因结合，位点关闭，RNA多聚酶通不过，转录不进行，基因关闭；有诱导物（乳糖）时，诱导物与阻遏蛋白结合，阻遏蛋白失活，从o点脱离，o位点打开，RNA多聚酶经过，Z、Y、A转录。即基因表示。13、为何用原核表示系统表示真核生物蛋白质时，克隆真核基因不能来自基因组文库？真核基因应怎样取得？对真核细胞来说，从基因组DNA文库取得基因与从cDNA文库取得不一样，基因组DNA文库所含是带有含子和外显子基因组基因，而从cDNA文库中取得是已经过剪接、去除了内含子cDNA。因为原核细胞不具备mRNA转录后加工系统，不能进行剪接、去除内含子等操作，所以用原核表示系统表示真核生物蛋白质时，克隆真核基因不能来自基因组文库，应从cDNA文库中取得，或者经过提取mRNA后RT-PCR方法取得。14、怎样提升真核基因在原核宿主中表示效率？（1）选择适宜载体，提升翻译水平强开启子——提升转录水平核糖体结合位点（ATG-SD）距离适宜在基因重组过程中应将结构基因接于SD序列之后．方便为mRNA提供核糖体结合位点，提升真核基因表示效率。防止产物降解：分泌/融合表示；（融合蛋白表示后再去除原核肽段）（2）选择适宜宿主(如Lac开启子——LacI菌；PL/PR——CI857溶源菌)（3）调整宿主细胞代谢为保持宿主正常生长速度及重组转化体稳定性，维持产物高效表示，必需采取适当方法，调整细胞代谢。现在，调整细胞代谢方法很多。如营养物浓度控制、产物诱导表示、载体诱导复制及促进产物分泌等。15、什么是基因诊疗？基因诊疗中惯用方法有哪些？试简述其中一个方法原理。基因诊疗是指用分子生物学技术对引发疾病原因——遗传基因、致病微生物和寄生虫,以及一些恶性肿瘤在基因水平上进行病原学和细胞遗传基因检测和分析。基因诊疗中惯用方法有核酸分子杂交、PCR、DNA芯片技术、限制酶酶谱分析和DNA序列测定等。核酸分子杂交是基因诊疗最基本方法之一。它基本原理是：互补核酸单链能够在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。它不但能在DNA和DNA之间进行，也能在DNA和RNA之间进行。所以，当用一段已知基因核酸序列作探针，与变性后单链基因组DNA接触时，假如二者碱基完全配对，它们即互补地结合成双链，从而表明被测基因组DNA中含有已知基因序列。16、名词解释：基因探针基因芯片蛋白质工程基因探针（probe）：就是一段与目标基因DNA互补带有能检测标识物特异核苷酸序列，它能够包含整个基因，也能够仅仅是基因一部分；能够是DNA本身，也能够是由之转录而来RNA。基因芯片(genechip)：又称DNA芯片，是指将许多特定寡核苷酸片段或基因片段有规律地排列固定于支持物上，样品DNA/RNA经过PCR扩增、体外转录等技术掺入荧光标识分子，然后按碱基配对原理进行杂交，再经过荧光检测系统等对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一探针上荧光信号作出比较和检测，从而快速得出所要信息。蛋白质工程：是指在蛋白质空间结构和结构与功效研究基础上,借助计算机等辅助设计来确定某一蛋白质分子改造方案。然后经过基因改造和基因工程技术取得新蛋白质分子。17、简述包含体形成原因和包含体蛋白复性主要步骤。重组蛋白在细菌中表示时，尤其当表示目标蛋白量超出细菌体总蛋白量10%时，会在细胞内与细菌杂蛋白、核酸等成份聚集成没有生物活性直径0.1-0.3μm固体颗粒，这种不溶性聚合体即包含体（inclusionbody）。生成包含体原因可能有是蛋白质合成速度太快，多肽链相互缠绕，影响了多肽链正确折叠，造成疏水基团外露等。（包含体形成有利于预防蛋白酶对表示蛋白降解，而且非常有利于分离表示产物。但包含体形成后，表示蛋白不具备生物活性，所以必须溶解包含体并对表示蛋白进行复性。）包含体复性即从伸展态－中间体－后期中间体－天然态过程，操作步骤通常为用超声波、匀浆等使菌体破碎后，离心得到包含体－加入强蛋白质变性剂如6～8mol／L盐酸胍或9～10mol／L尿素溶解包含体－用透析、稀释和超滤复性法等等方法使之正确折叠。18、列表比较大肠杆菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞表示系统优缺点。以下为某同学作业答案，供参考表示系统优点缺点大肠杆菌表示系统（1）对大肠杆菌背景知识，尤其是基因表示调控分子机理有深刻了解；（2）是一个安全基因工程试验体系，拥有各类适用寄主菌株和不一样类型载体；（3）许多克隆真核基因都能够在大肠杆菌细胞中实现有效、高水平表示；（4）大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，易用于批量生产。（1）缺乏转录后加工机制，只能表示克隆cDNA,不宜表示真核基因组DNA；（2）缺乏翻译后加工机制，许多真核基因蛋白质产物，都要经过转译后加工修饰（正确折叠和组装），而大多数这类修饰作用在细菌细胞中并不存在；（3）表示蛋白质常形成不溶性包含体，需作复性处理；（4）难于表示大量可溶性蛋白。酵母表示系统（1）基因背景了解清楚，上游操作简单，生长快速，非常适于大规模发酵。（2）具备一定加工及修饰能力：如二硫键正确形成，前体蛋白水解加工。表示产物与天然蛋白相同或类似。（3）可将异源蛋白基因与N-末端前导肽等信号肽融合，指导新生肽分泌，在分泌中可对表示蛋白进行糖基化修饰，但其修饰糖链与高等真核细胞并不相同。（4）可移去起始甲硫氨酸，防止了作为药品使用可能引发免疫反应问题。（1）产糖量过多因而损坏蛋白质生物活性、安全性等；（2）糖基化修饰与高等真核细胞并不相同。

昆虫细胞表示系统（1）表示效率高。重组蛋白表示水平最高可达成细胞总蛋白50％。（2）属于真核表示系统。有糖基化作用、脂肪酸酰基化作用、氨基末端乙酰化作用以及磷酸化，有利于表示产物形整天然高级结构，保持原有生物活性与功效。（3）杆状病毒能容纳较大外源基因而不影响其本身增殖。（4）杆状病毒属于昆虫病毒。具备高度特异宿主范围，对脊椎动物和植物均无致病性。病毒重组因失去多角体保护，在自然界生存能力很弱，所以比较安全。（5）应用晚期多角体蛋白基因开启子表示外源基因可表示毒性蛋白。（6）杆状病毒表示载体通用性广。可表示来自病毒、细菌、真菌、植物和动物几乎全部蛋白，而且能表示带有内含子外源基因。（7）重组杆状病毒除在体外昆虫培养细胞表示外源基因外，还能感染昆虫活体，在体内高效表示外源蛋白。（1）宿主细胞生长慢、培养基昂贵、含有免疫宿主蛋白、杆状病毒感染会造成宿主死亡、所以每一轮蛋白合成均需重新感染。（2）昆虫细胞内糖基化方式与脊椎动物细胞内糖基化方式有一定差异，其糖蛋白糖链结构多为简单不分支结构。哺乳动物细胞表示系统（1）产物抗原性、免疫原性和功效与天然蛋白质最靠近，糖基化等后加工最精准。（2）通常会产生正确加工、有活性蛋白。该表示系统表示水平较低、培养基昂贵、生长迟缓、含有过敏物质等缺点在实际应用过程中较难防止。19、利用基因工程菌生产有哪些特点？有什么优势？惯用宿主菌有哪些？基因工程菌带有外源基因，这些基因可能不稳定。丢失外源基因菌往往比未丢失菌生长快得多，这么就会大大降低产物表示。为了抑制基因丢失菌生长，通常在培养中加入选择压力，如抗生素。基因工程菌培养通常分两段。前期是菌体生长，生长到某一阶段，加入诱导因子，诱发产物表示。利用基因工程菌生产优势主要表现在目标产物产量高，表示调控性好，可依照目标产物特点构建各种表示系统，等等。惯用宿主菌有大肠杆菌（如BL21(DE3)plysS菌株）、酵母菌（如Pichiapastoris、Saccharomycescerevisiae等）、枯草芽孢杆菌等。20、在基因工程菌培养过程中为何质粒会丢失？（1）分离不稳定性：细胞分裂过程中，有一个子细胞