实验大肠杆菌的培养和分离详解演示文稿

实验大肠杆菌的培养和分离详解演示文稿当前第1页\共有36页\编于星期三\22点优选实验大肠杆菌的培养和分离当前第2页\共有36页\编于星期三\22点什么是培养基？三角瓶培养皿试管液体培养基：扩大培养，工业生产。固体培养基：分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏。凝固剂：琼脂当前第3页\共有36页\编于星期三\22点培养基的配制营养成分功能和来源碳源氮源生长因子水无机盐提供碳元素：主要是糖类提供氮元素：蛋白胨、牛肉膏、尿素维生素、氨基酸和含氮碱基H2O，良好的溶剂NaCl：维持一定的渗透压当前第4页\共有36页\编于星期三\22点LB培养基的配制LB固体培养基：蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50mL，琼脂1g。调节pH至7.6。封口膜当前第5页\共有36页\编于星期三\22点菌落：单细菌的克隆菌落：在固体培养基上，由单个细菌繁殖而来的一个肉眼可见的具有特定形状的子细胞群体。霉菌大肠杆菌当前第6页\共有36页\编于星期三\22点菌落的作用：鉴定菌种的重要依据菌落特征：菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等。当前第7页\共有36页\编于星期三\22点大肠杆菌大肠杆菌：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。当前第8页\共有36页\编于星期三\22点怎样无菌操作？高压蒸汽灭菌：培养皿、试管、三角瓶、枪头、玻璃三角刮刀、接种环、镊子。在121℃下灭菌15min。高压蒸汽灭菌锅当前第9页\共有36页\编于星期三\22点培养皿三角瓶玻璃三角刮刀接种环微量移液器枪头当前第10页\共有36页\编于星期三\22点棉花塞、封口膜、牛皮纸或旧报纸、橡皮筋不能用脱脂棉：易吸水，容易引起污染。当前第11页\共有36页\编于星期三\22点酒精灯和酒精棉球灭菌：杀死所有微生物。消毒：杀死部分微生物（不包括芽孢和孢子）。当前第12页\共有36页\编于星期三\22点超净工作台①打开紫外灯和过滤风，灭菌30min。②点燃酒精灯→酒精棉擦拭桌面→酒精棉球擦手。酒精灯火焰附近旁进行灼烧灭菌防止杂菌污染当前第13页\共有36页\编于星期三\22点用细菌过滤器除菌：尿素加热会分解，用G6玻璃砂漏斗过滤。当前第14页\共有36页\编于星期三\22点什么是倒平板？将灭菌后的固体培养基倒入已灭菌的培养皿中，冷却凝固后制成的培养基。当前第15页\共有36页\编于星期三\22点Step1：培养基的配制和灭菌①将50mLLB液体培养基、50mLLB固体培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌。无菌水培养皿用牛皮纸包扎当前第16页\共有36页\编于星期三\22点Step2：倒平板②在酒精灯火焰旁将三角瓶中的固体培养基（冷却到60℃）倒入灭菌的培养皿中，置于水平放置上，并轻轻晃动，待凝固后形成平面。超净台当前第17页\共有36页\编于星期三\22点Step3：接种后扩大培养③将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中，使其在37℃摇床培养12h。恒温摇床当前第18页\共有36页\编于星期三\22点Step4：平板划线分离④用接种环在培养大肠杆菌的三角瓶中蘸取菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线。将培养皿倒置，放在37℃恒温箱中培养12～24h。当前第19页\共有36页\编于星期三\22点怎样在平板上划线？1次2次3次4次连续划线法分区划线法当前第20页\共有36页\编于星期三\22点原因：随着划线次数的增加，菌数越来越少，最终在划线的末端出现由一个细菌繁殖而来的单个菌落。为什么通过划线分离可得到单菌落？当前第21页\共有36页\编于星期三\22点原因：既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基中造成污染。恒温培养时培养皿倒置培养皿倒置皿盖皿底恒温培养箱当前第22页\共有36页\编于星期三\22点Step5：菌种的斜面保存⑤将接种环将单菌落取出，用划线法接种在斜面培养基上，37℃培养24h后，置于4℃冰箱中保存。斜面培养基当前第23页\共有36页\编于星期三\22点试管斜面培养基的制作方法：将未凝固的含有琼脂的培养基加入试管中，灭菌后将试管斜放，令其冷却，固体培养基即成为斜面。当前第24页\共有36页\编于星期三\22点平板划线分离法①灼烧接种环外焰先灼烧后冷却：以免接种环温度太高，杀死菌种。当前第25页\共有36页\编于星期三\22点②接种环冷却后，蘸取带菌培养物当前第26页\共有36页\编于星期三\22点③在近火焰处，让带菌接种环在固体培养

基上划线当前第27页\共有36页\编于星期三\22点④恒温培养箱中倒置培养分区划线法每次划线之前都要灼烧接种环。总是从上一次划线的末端开始划线。当前第28页\共有36页\编于星期三\22点稀释涂布分离法①用无菌吸管吸取1mL细菌培养液加入另一个盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液。①梯度稀释菌液：10-5~10-7倍当前第29页\共有36页\编于星期三\22点②滴加菌液②用无菌吸管取0.1mL稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上。当前第30页\共有36页\编于星期三\22点③用玻璃刮刀涂布玻璃涂棒当前第31页\共有36页\编于星期三\22点③将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待玻璃刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个培养基表面。当前第32页\共有36页\编于星期三\22点④将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24~48h。④恒温培养箱中培养恒温培养箱当前第33页\共有36页\编于星期三\22点结果：以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为合适