生物选修一知识点

生物选修1知识点专题1传统发酵技术应用课题1果酒和果醋制作课题2腐乳制作课题3制作泡菜并检测亚硝酸盐含量专题2微生物培养与应用课题1微生物试验室培养课题2土壤中分解尿素细菌分离与计数课题3分解纤维素微生物分离专题3植物组织培养技术课题1菊花组织培养课题2月季花药培养专题4酶研究与应用课题1果胶酶在果汁生产中作用课题2探讨加酶洗衣粉洗涤效果课题3酵母细胞固定化专题5DNA和蛋白质技术课题1DNA粗提取与判定课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段课题3血红蛋白提取和分离专题6植物有效成份提取课题1植物芳香油提取课题2胡萝卜素提取附录1生物学试验室基本安全规则附录2生物学试验室中惯用国际单位附录3惯用培养基配方附录4惯用消毒灭菌操作方法附录5惯用化学抑菌剂课题1果酒和果醋制作一、试验原理酶1．酵母菌细胞呼吸酶酶酵母菌进行有氧呼吸大量繁殖，表示式为：C6H12O6+O2→CO2+H2O+能量酶酵母菌进行无氧呼吸产生酒精和二氧化碳，表示式为：C6H12O6→C2H5OH+CO2+能量2．酵母菌发酵最好环境酵母菌在有氧和无氧条件下都能生活：在有氧时，酵母菌大量繁殖，不过不起到发酵效果；在无氧时，繁殖速度减慢，不过此时能够进行发酵。在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵。20℃左右最适合酵母菌繁殖，酒精发酵最好温度是在18℃～25℃，pH最好是弱酸性。酶3．醋酸菌好氧性细菌，当缺乏糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸。表示式为：C2H5OH→CH3COOH+H2O；当氧气、糖源都充分时，醋酸菌将葡萄汁中糖分解成醋酸。酶醋酸菌生长最好温度是在30℃～35℃二、试验步骤1.对发酵瓶、纱布、榨汁机、盛葡萄汁器皿等试验用具进行清洗并消毒。先用温水重复冲洗几次,再用体积分数为75%酒精擦拭消毒，晾干待用。2.取葡萄500g，去除枝梗和腐烂子粒。3.用清水冲洗葡萄1～2遍除去污物，注意不要重复数次冲洗。4.用榨汁机榨取葡萄汁后，将其装入发酵瓶中或将葡萄打成浆后，用洁净纱布过滤至发酵瓶中，盖好瓶盖。假如没有适宜发酵装置，能够用500mL塑料瓶代替，但注入果汁量不要超出塑料瓶总体积2/3。5.将发酵瓶置于适宜温度下发酵。6.因为发酵旺盛期CO2产量非常大，所以需要及时排气，预防发酵瓶爆裂。假如使用简易发酵装置，如瓶子（最好选取塑料瓶），天天要拧松瓶盖2～4次，进行排气。7.10d以后，能够开始进行取样检验工作。比如，能够检验酒味、酒精含量、进行酵母菌镜检等工作。8.当果酒制成以后，能够在发酵液中加入醋酸菌或醋曲，然后将装置转移至30～35℃条件下发酵，适时向发酵液中充气。假如找不到醋酸菌菌种或醋曲，可尝试自然接种，但效果不是很好。假如没有充气装置，能够将瓶盖打开，在瓶口盖上纱布，以降低空气中尘土等污染。三、注意事项请分析此装置中充气口、排气口和出料口分别有哪些作用。为何排气口要经过一个长而弯曲胶管与瓶身连接？结合果酒、果醋制作原理，你认为应该怎样使用这个发酵装置？充气口排气口出料口答：充气口是在醋酸发酵时连接充气泵进行充气用；排气口是在酒精发酵时用来排出CO2；出料口是用来取样。排气口要经过一个长而弯曲胶管与瓶身连接，其目标是预防空气中微生物污染。使用该装置制酒时，应该关闭充气口；制醋时，应将充气口连接气泵，输入氧气。课题2腐乳制作试验原理1．参加豆腐发酵微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多个，其中起主要作用是毛霉。2．毛霉是一个丝状真菌，常见于土壤、水果、蔬菜、谷物上，具备发达白色菌丝。3.毛酶等微生物产生蛋白酶能将豆腐中蛋白质分解成小分子肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪酸。二、试验步骤1.将豆腐切成3cm×3cm×1cm若干块。所用豆腐含水量为70％左右，水分过多则腐乳不易成形。2.将豆腐块平放在铺有干粽叶盘内，粽叶能够提供菌种，并能起到保温作用。每块豆腐等距离排放，周围留有一定空隙。豆腐上面再铺上洁净粽叶。气候干燥时，将平盘用保鲜膜包裹，但不要封严，以免湿度太高，不利于毛霉生长。

3.将平盘放入温度保持在15～18

℃地方。毛霉逐步生长，大约5

d后豆腐表面丛生着直立菌丝。

4.当毛霉生长旺盛，并呈淡黄色时，去除包裹平盘保鲜膜以及铺在上面粽叶，使豆腐块热量和水分能够快速散失，同时散去霉味。这一过程通常连续36

h以上。

5.当豆腐凉透后，将豆腐间连接在一起菌丝拉断，并整齐排列在容器内，准备腌制。

6.长满毛霉豆腐块（以下称毛坯）与盐质量分数比为5∶1。将培养毛坯时靠近平盘没长直立菌丝一面统一朝向玻璃瓶边，将毛坯分层盘立摆放在容器中。分层加盐，并随层加高而增加盐量，在瓶口表面铺盐厚些，以预防杂菌从瓶口进入。约腌制8

d。〔注〕用盐腌制时，注意盐都用量。盐浓度过低，不足以抑制微生物生长，可能造成豆腐腐败变质；盐浓度过高，会影响腐乳口味。

7.将黄酒、米酒和糖，按口味不一样而配以各种香辛料（如胡椒、花椒、八角茴香、桂皮、姜、辣椒等）混合制成卤汤。卤汤酒精含量控制在12％左右为宜。

〔注〕酒精含量高低与腐乳后期发酵时间长短有很大关系。酒精含量越高，对蛋白酶抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低，蛋白酶活性高，加紧蛋白质水解，杂菌繁殖快，豆腐易腐败，难以成块。

8.将广口玻璃瓶刷洁净后，用高压锅在100

℃蒸汽灭菌30

min。将腐乳咸坯摆入瓶中，加入卤汤和辅料后，将瓶口用酒精灯加热灭菌，用胶条密封。在常温情况下，通常六个月能够成熟。三、注意事项1.酿造腐乳主要生产工序是将豆腐进行前期发酵和后期发酵。前期发酵所发生主要改变是毛霉在豆腐（白坯）上生长。发酵温度为15～18

℃，此温度不适于细菌、酵母菌和曲霉生长，而适于毛霉慢慢生长。毛霉生长大约5

d后使白坯变成毛坯。前期发酵作用，一是使豆腐表面有一层菌膜包住，形成腐乳“体”；二是毛霉分泌以蛋白酶为主各种酶，有利于豆腐所含有蛋白质水解为各种氨基酸。后期发酵主要是酶与微生物协同参加生化反应过程。经过腌制并配入各种辅料（红曲、面曲、酒酿），使蛋白酶作用迟缓，促进其余生化反应，生成腐乳香气。2.毛霉是一个低等丝状真菌，有多个细胞核，进行无性繁殖。毛霉是食品加工业中主要微生物，它能够产生能够分解大豆蛋白蛋白酶，惯用于制作腐乳和豆豉。课题3探讨加酶洗衣粉洗剂效果一、试验原理1．加酶洗衣粉是指含有酶制剂洗衣粉，现在惯用酶制剂有四类：蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶，其中，应用最广泛、效果最显著是碱性蛋白酶和碱性脂肪酶。2．碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有大分子蛋白质水解成可溶性氨基酸或小分子肽，使污迹从衣物上脱落。脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶也能分别将大分子脂肪、淀粉和纤维素水解为小分子物质，使洗衣粉具备愈加好去污能力。3．在本课题中，我们主要探究关于加酶洗衣粉三个问题：一是普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍洗涤效果有什么不一样；二是在什么温度下使用加酶洗衣粉效果最好，三是添加不一样种类酶洗衣粉，其洗剂效果有哪些区分。二、试验步骤1探究用加酶洗衣粉与普通洗衣粉洗涤效果不一样①在2个编号烧杯里，分别注入500mL清水。

②取2块大小相等白棉布，用滴管在每块白布上分别滴上等量墨水，分别放入烧杯里，用玻璃棒搅拌。

③将2个烧杯分别放入同等温度温水中，保温5分钟。

④称取5克加酶洗衣粉和5克普通洗衣粉2份，分别放入2个烧杯中，用玻璃棒均匀搅拌。保温10分钟。

⑤观察并统计2个烧杯中洗涤效果2探究用加酶洗衣粉洗涤最好温度条件①在3个编号烧杯里，分别注入500mL清水。

②取3块大小相等白棉布，用滴管在每块白布上分别滴上一滴食用油、鸡血、牛奶，分别放入烧杯里，用玻璃棒搅拌。

③将3个烧杯分别放入50摄氏度热水、沸水和冰块中，保温5分钟。

④称取5克加酶洗衣粉3份，分别放入3个烧杯中，用玻璃棒均匀搅拌。保温10分钟。

⑤观察并统计3个烧杯中洗涤效果。

3探究不一样种类加酶洗衣粉洗涤效果污染物蛋白酶洗衣粉脂肪酶洗衣粉复合酶洗衣粉普通洗衣粉油渍汗渍血渍观察并统计四种洗衣粉分别洗涤三种污染洗涤效果。

三、注意事项1．变量分析和控制影响加酶洗衣粉洗涤效果原因有水温、水量、水质、洗衣粉用量，衣物质料、大小及浸泡时间和洗涤时间等。在这些原因中，水温是我们要研究对象，而其余原因应在试验中保持不变。选择什么样水温进行试验需要试验者依照当地一年中实际气温改变来确定水温，通常情况下，冬季、春季、秋季和夏季可分别选取5℃、15℃、25℃和35℃水温，因为这4个水温是比较符合实际情况，对现实也有指导意义。2．洗涤方式和材料选择。在洗涤方式中有机洗和手洗两种方式，应考虑其中哪一个比较科学？哪一个更有利于控制变量？再有，洗衣机又能够分为半自动和全自动两种，相比之下，采取全自动洗衣机比很好，而且应该尽可能使用同一型号小容量洗衣机，其机械搅拌作用相同。关于洗涤材料选择也有一些考究。用衣物作试验材料并不理想，这是因为作为试验材料衣物，其大小、颜色、洁净程度等应该完全一致，而这并不轻易做到；另外，人为地在衣物上增加污物，如血渍、油渍等，也令人难以接收。所以，选取布料作为试验材料比较可行。在作对照试验时，能够控制布料大小、颜色以及污物量，使其相同；同时，也便于洗涤效果比较。3．水量、水质和洗衣粉用量问题。水用量和布料大小是成正比。做试验用布料不易过大，水量不易过多，但应该让布料充分浸泡在水中。水量和洗衣粉用量能够参考下表。试验时可依照表中数据换算出实际用量。假如在试验中使用手洗方法，如书本中图4-4所表示，使用1000mL烧杯作为容器，能够用500mL水，洗衣粉用量能够用1g或1.5g。洗涤方式机洗手洗水量0.5L0.5L洗衣粉量0.5g1g或1.5g其余相关问题简述以下。试验中能够用滴管控制污物量，待污物干燥后再进行试验；布料应放在洗衣粉溶液中浸泡相同时间；采取玻璃棒或筷子搅拌方式模拟洗衣过程；模拟搅拌时间、次数和力量应基本相同。课题4酵母细胞固定化一、试验原理1．使用固定化酶技术，将这种酶固定在一个颗粒状载体上，再将这些酶颗粒装到一个反应柱内，柱子底端装上分布着许多小孔筛板。酶颗粒无法经过筛板小孔，而反应溶液却能够自由出入。生产过程中，将葡萄糖溶液从反应柱上端注入，使葡萄糖溶液流过反应柱，与固定化葡萄糖异构酶接触，转化结果糖，从反应柱下端流出。反应柱能连续使用六个月，大大降低了生产成本，提升了果糖产量和质量。2．固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内技术，包含包埋法、化学结正当和物理吸附法。通常来说，酶更适合采取化学结正当和物理吸附法固定，而细胞多采取包埋法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大难以被吸附或结合，而个小酶轻易从包埋材料中漏出。固定化酶优点：使酶既能与反应物接触，又能与产物分离，还能够被重复利用。固定化细胞优点：成本更低，操作更轻易，能够催化一系列化学反应。二、试验步骤1。细胞活化称取lg干酵母，放入50mL小烧杯中，加人蒸馏水10mL，用玻璃棒搅拌，使酵母细胞混合均匀，成糊状，放置1h左右，使其活化。【注】活化：让处于休眠状态微生物重新恢复正常生活状态2。配制物质量浓度为0.05mo1/LCaCl2溶液称取无水CaCl20.83g。放人200mL烧杯中，加入150mL蒸馏水，使其充分溶解，待用。

3。配制海藻酸钠溶液

称取0.7g海藻酸钠，放入50mL小烧杯中。加人10mL水，用酒精灯加热，边加热边搅拌，将海藻酸钠调成糊状，直至完全溶化，用蒸馏水定容至10mL。注意，加热时要用小火，或者间断加热，重复几次，直到海藻酸钠溶化为止。

4。海藻酸钠溶液与酵母细胞混合

将溶化好海藻酸钠溶液冷却至室温，加人已活化醉母细胞，进行充分搅拌，使其混合均匀，再转移至注射器中。【注】冷却至室温目标：预防杀死酵母菌5。固定化酵母细胞以恒定速度迟缓地将注射器中溶液滴加到配制好CaCl2溶液中，观察液滴在CaCl2溶液中形成凝胶珠情形。将这些凝胶珠在CaCl2溶液中浸泡30min左右。【注】CaCl2溶液作用：使胶体聚沉6使用固定化酵母细胞发酵a)将固定好酵母细胞(凝胶珠)用蒸馏水冲洗2-3次。b)将150mL质量分数为10%葡萄糖溶液转移到200mL锥形瓶中，再加入固定好酵母细胞，置于25℃下发酵24h。

三、注意事项1.配制海藻酸钠溶液：小火、间断加热、定容，假如加热太快，海藻酸钠会发生焦糊。2.海藻酸钠溶液与酶母细胞混合：冷却后再混合，注意混合均匀，不要进入气泡3.制备固定化酵母细胞：高度适宜，并匀速滴入4．刚形成凝胶珠应在CaCL2溶液中浸泡一段时间，方便Ca2+与Na+充分交换，形成凝胶珠稳定。检验凝胶珠是否形成，可用以下方法：用镊子夹起一个凝胶珠放在试验桌上用手挤压，假如不轻易破裂，没有液体流出就表明成功地制成了凝胶珠，还能够用手将凝胶珠在试验桌上用力摔打，假如凝胶珠很轻易弹起，也表明制备凝胶珠是成功。5．凝胶珠颜色和形状假如制作凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠浓度偏低，固定酵母细胞数目较少；假如形成凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。课题5DNA粗提取与判定一、试验原理提取生物大分子基本思绪是选取一定物理或化学方法分离具备不一样物理或化学性质生物大分子。对于DNA粗提取而言，就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面差异，提取DNA，去除其余成份。1．DNA溶解性DNA和蛋白质等其余成份在不一样浓度NaCl溶液中溶解度不一样，利用这一特点，选择适当盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达成分离目标。另外，DNA不溶于酒精溶液，不过细胞中一些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，能够将DNA与蛋白质深入分离。2．DNA对酶、高温和洗涤剂耐受性蛋白酶能水解蛋白质，不过对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受60—80oC高温，而DNA在80oC以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA没有影响。3．DNA判定在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色，所以二苯胺能够作为判定DNA试剂。二、试验设计试验材料选取凡是含有DNA生物材料都能够考虑，不过使用DNA含量相对较高生物组织，成功可能性更大。破碎细胞，获取含DNA滤液动物细胞破碎比较轻易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后搜集滤液即可。假如试验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。比如，提取洋葱DNA时，在切碎洋葱中加入一定洗涤剂和食盐，进行充分搅拌和研磨，过滤后搜集研磨液。注意：①为何加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一个低渗液体，水分能够大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌机械作用，就加速了鸡血细胞破裂(细胞膜和核膜破裂)，从而释放出DNA。②加入洗涤剂和食盐作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA释放；食盐主要成份是NaCl，有利于DNA溶解。③假如研磨不充分，会对试验结果产生怎样影响?研磨不充分会使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，影响试验结果，造成看不到丝状沉淀物、用二苯胺判定不显示蓝色等。④此步骤取得滤液中可能含有哪些细胞成份？可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。去除滤液中杂质方案一原理是DNA在不一样浓度NaCl溶液中溶解度不一样；方案二原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA；方案三原理是蛋白质和DNA变性温度不一样。注意：①为何重复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？用高盐浓度溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中杂质。所以，经过重复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不一样多个杂质。②方案二与方案三原理有什么不一样？方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取DNA与蛋白质分开；方案三利用是DNA和蛋白质对高温耐受性不一样，从而使蛋白质变性，与DNA分离。DNA析出与判定将处理后溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却酒精溶液，静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸收上面水分。取两支20ml试管，各加入物质量浓度为2mol/LNaCl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色改变，看看溶解有DNA溶液是否变蓝。三、试验步骤—以洋葱为试验材料1．称取30克已切碎洋葱，放入研钵中，加入少许石英砂助研，倒入10mL2mol/L氯化钠溶液，充分研磨。洋葱含有挥发性刺激物，有效降低刺激，才能使试验顺利进行。上课前，教师可先将洋葱放入冰箱冷冻一会儿，使其凉透但又不能结冰；或将洋葱切成几大块，放入清水泡一会儿，让其挥发性刺激物溶于水，能够减轻刺激。然后将洋葱切碎备用。研磨目标主要是使洋葱细胞破裂，使DNA溶于2mol/L氯化钠溶液，没必要将洋葱研成粥糊状，后者既浪费时间又影响试验效果。研磨时，切忌使用搅拌器（榨汁机）。使用搅拌器虽能够提升研磨效率，但搅拌器将洋葱切成极细小颗粒，无法经过过滤将洋葱颗粒剔除。只能将酒精直接倒入滤液中，许多洋葱小颗粒因为轻会漂浮起来，DNA藏在其中，无法分辨。学生看不到白色纤维状粘稠物DNA。2．研磨后，用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中，得到滤液。3．向滤液中加入95%酒精溶液20mL，沿烧杯壁缓缓倒入，不要震动或搅拌。此时，烧杯中液体分为上、下两层，下层较浑浊，上层澄清，很快上层溶液中就会有白色纤维状粘稠物析出，用玻璃棒可将其轻轻卷起。这就是统计生命遗传信息主要物质——DNA。DNA析出过程中，切忌震动和搅拌（不震动易于分层，我们就能很轻易观察到上清液中丝状物；搅拌会使非常柔软DNA断裂成小段，不易取出）。假如用玻璃棒DNA不易卷起，可改用表面打毛牙签，DNA提取物就缠绕在牙签上了。4．判定：取两支试管，编为1、2号，各加入2mol/L氯化钠溶液2mL，向1号试管中加入一些白色纤维状物，振荡使其溶解，然后向两支试管中各加入2mL二苯胺试剂，沸水浴加热5分钟。四、注意事项1．以血液为试验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠预防血液凝固。2．加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，不然轻易产生大量泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免DNA分子断裂，造成DNA分子不能形成絮状沉淀。3．二苯胺试剂要现配现用，不然会影响判定效果。4．DNA溶解度与NaCl溶液浓度关系：当NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，随浓度升高，DNA溶解度降低；当NaCl溶液浓度高于0.14mol/L时，随浓度升高，DNA溶解度升高。5．盛放鸡血细胞液容器，最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出DNA，轻易被玻璃容器吸附，因为细胞内DNA含量原来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到DNA就会更少。所以，试验过程中最好使用塑料烧杯和试管，这么能够降低提取过程DNA损失。课题6血红蛋白提取和分离一、试验原理蛋白质物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。1．凝胶色谱法（分配色谱法）：（1）原理：分子量大分子经过多孔凝胶颗粒间隙，旅程短，流动快；分子量小分子穿过多孔凝胶颗粒内部，旅程长，流动慢。（2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。（3）分离过程：混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→搜集大分子→搜集小分子洗脱：从色谱柱上端不停注入缓冲液，促使蛋白质分子差速流动。（4）作用：分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质脱盐等。2．缓冲溶液（1）原理：由弱酸和对应强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等），调整酸和盐用量，可配制不一样pH缓冲液。（2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH干扰而保持pH稳定。3．凝胶电泳法：（1）原理：不一样蛋白质带电性质、电量、形状和大小不一样，在电场中受到作用力大小、方向、阻力不一样，造成不一样蛋白质在电场中运动方向和运动速度不一样。（2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。（3）分离过程：在一定pH下，使蛋白质基团带上正电或负电；加入带负电荷多SDS，形成“蛋白质－SDS复合物”，使蛋白质迁移速率仅取决于分子大小。二、试验步骤1．样品处理红细胞洗涤洗涤红细胞目标是去除杂蛋白，采集血样要及时采取低速短时间离心分离红细胞，然后用胶头吸管吸出上层透明黄色血浆，将下层暗红色红细胞液体倒入烧杯，再加入五倍体积生理盐水，迟缓搅拌10min，低速短时间离心，如此重复洗涤三次，直至上清液中没有黄色，表明红细胞已洗涤洁净。②血红蛋白释放在蒸馏水和甲苯作用下，红细胞破裂释放出血红蛋白。注：加入蒸馏水后红细胞液体积与原血液体积要相同。加入甲苯目标是溶解细胞膜，有利于血红蛋白释放和分离。2．粗分离①分离血红蛋白溶液将搅拌好混合溶液离心后，试管中溶液分为4层。第一层为无色透明甲苯层，第2层为白色薄层固体，是脂溶性物质沉淀层，第3层是红色透明液体，这是血红蛋白水溶液，第4层是其余杂质暗红色沉淀物。将试管中液体用滤纸过滤，除去之溶性沉淀层，于分液漏斗中静置片刻后，分出下层红色透明液体。②透析取1mL血红蛋白溶液装入透析袋中，将透析袋放入盛有300mL物质量浓度为20mmol/L磷酸缓冲液中，透析12h。透析能够去除样品中分子量较小杂质，或用于更换样品缓冲液。3．纯化调整缓冲液面：打开