届一轮复习细胞工程专题培训课件

一、植物细胞工程的基本技术（一）细胞的全能性1、概念：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。2、原因：受精卵有丝分裂体细胞含全套遗传基因3、全能性的程度（1）受精卵的全能性最高

受精卵生殖细胞体细胞＞＞（2）植物细胞＞动物细胞（3）4、形成不同组织、器官原因：基因选择性表达5、条件：（1）离体状态（2）提供营养物质、激素

（4）体细胞：分化程度低的﹥分化程度高的分裂能力强的﹥分裂能力弱的（二）植物组织培养技术(重点理解)1、原理：植物细胞的全能性2、过程：

外植体

愈伤组织根、芽植物体再分化脱分化避光需光植物激素：细胞分裂素、生长素分化培养基人工种子：胚状体、不定芽、顶芽和腋芽经人工薄膜包装而得。杂种细胞愈伤组织杂种植株植物细胞A植物细胞B

原生质体A原生质体B正在融合的原生质体去细胞壁再生细胞壁植物组织培养植物细胞融合植物体细胞杂交过程4、优势：（与有性杂交方法比较）克服植物远缘杂交不亲和性2、原理：细胞膜的流动性和细胞全能性（三）植物体细胞杂交3、原理：物理方法——离心、振动、电激化学方法——聚乙二醇（PEG）动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养无限传代单个细胞二、动物细胞培养1、过程不易传下去增殖逐渐缓慢以致停止细胞的核型发生变化

使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型。常见现象：细胞贴壁、接触抑制（1）无菌、无毒的环境

（2）营养（3）温度和PH

（4）气体环境：（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）补充合成培养基中缺乏的物质36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。

O2作用：进行呼吸，提供能量

CO2作用：维持培养液的PH值（葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。）有氧95%空气和5%CO2

二、动物细胞培养2、条件比较：培养基特有成分培养基性质原理比较项目细胞的全能性蔗糖、植物激素固体培养基植物组织培养葡萄糖、动物血清液体培养基细胞增殖动物细胞培养1、原理：三、动物细胞核移植2、分类：动物细胞核的全能性胚胎细胞核移植、体细胞核移植供体细胞（供核）细胞培养体细胞卵母细胞（减Ⅱ中期：供质）去核无核卵母细胞核移植重组细胞重组胚胎胚胎移植代孕母体新个体分娩激活3、过程：完成细胞分裂和发育进程含有促使体细胞细胞核表现全能性的物质和营养四、动物细胞融合1、原理：细胞膜的流动性物理法：化学法：生物法：灭活的病毒(与植物细胞杂交不同点)离心、振动、电刺激；聚乙二醇；2、诱导融合的方法：细胞A细胞B杂交细胞灭活的病毒物理法化学法仙台病毒等3、过程：四、动物细胞融合

五、单克隆抗体制备过程

注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体用特定的选择培养基筛选克隆化培养、专一抗体检测1、过程1、过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养杂交瘤细胞（B-瘤细胞）克隆化培养抗体检测杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体八单克隆抗体

五、单克隆抗体制备2、原理：3、单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、可大量制备骨髓瘤细胞能无限增殖，一种B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。4.应用：

①作为诊断试剂：准确识别