微乳液在苦参及其中成药薄层色谱分析中的应用研究

微乳液在苦参及其中成药薄层色谱分析中的应用研究【摘要】目的探讨微乳薄层色谱法用于分离鉴定苦参中生物碱的方法以及同时分离鉴定含苦参中成药中多种有效成分。方法以十二烷基硫酸钠-正丁醇－正庚烷－水微乳液为展开剂，在普通硅胶板上进行了苦参中生物碱的微乳薄层色谱分析，考察各分离条件对苦参中生物碱分离度的影响，并与传统薄层方法进行比较。在此基础上，通过一次点样展开，用微乳液薄层色谱分离检测了苦参中成药——复方石韦胶囊中多种成分。结果以含水量30%的微乳液为展开剂，对苦参中的生物碱有很好的分离效果，各生物碱的Rf值均在～范围内，此展开剂用于复方石韦胶囊的分离鉴定，可同时检测出多种有效成分，操作简便，分离效果理想，检出灵敏。结论微乳薄层可用于苦参药材及中成药的分离鉴定。

【关键词】微乳液薄层色谱苦参复方石韦胶囊

Abstract：ObjectiveToinvestigatetheapplicationofmicroemulsionTLCinseparationandidentificationofalkaloidsofSopharaanditspatentmedicine-ShiweiCompoundCapsule.MethodsSodiumdodecylsulphate/n-C4H9OH/n-C7H16/H2Omicroemulsionasmobilephasewasstudied.Theseparationconditionsandoperationalprocessesofthemethodwereoptimized,anditschromatographiccharacteristicscomparedwithconventionalTLC.Basedonthemethod,thevariouscompositionsinShiweiCompoundCapsulewereseparatedandidentifiedsimultaneouslywithmicroemulsionTLC.ResultsTheW/Omicroemulsion(containing30%water)waschosenasmobilephaseandtheME-TLCsystemwaseasiertooperate,andwithhigherresolutionandbetterreproducibilitythantheconventionalME-TLCcanbeusedasmobilephasetoseparateSopharaanditspatentmedicine.

Keywords：Microemulsion;TLC;Sophara;ShiweiCompoundCapsule

微乳液通常是由表面活性剂、助表面活性剂、油、水等组分在适当配比下自发生成的、无色透明低黏度的热力学稳定体系。由于其独特的结构与性能，备受人们的关注。微乳液具有增溶增敏的特点，作为展开剂可同时对不同极性、不同带电的成分进行分离，尤其对差别细微成分的分离具有独特的优势［1］，目前已有多篇将微乳液作为展开剂用于中药分析的报道［1～5］，包括对生物碱的分离［1］，对黄酮类化合物的分离鉴别［2～3］，对氨基酸的分离鉴别［4，5］等。

苦参及苦参中成药是临床常用药物，《中国药典》中苦参的薄层鉴别采用双展开系统，斑点拖尾，重复性较差［6］。本实验以十二烷基硫酸钠-正丁醇－正庚烷－水微乳液为展开剂，对苦参碱和氧化苦参碱的微乳薄层行为进行了研究，并通过与传统有机溶剂作展开剂的色谱行为进行比较，对微乳色谱理论进行了探讨。并在此基础上，以分离苦参中生物碱的优化比例后的微乳液作展开剂，对含苦参中成药——复方石韦胶囊中4种中药材进行了同时分离鉴定，可鉴别出其中多种有效成分。

1仪器和试剂

双槽层析玻璃缸；2F-20D暗箱式紫外分析仪；硅胶G层析板；点样用定量毛细管。

对照品：苦参碱、氧化苦参碱、槲皮素；对照药材：苦参、萹蓄、黄芪、石韦；样品：复方石韦胶囊。

十二烷基硫酸钠(SDS，广州市医药公司化学试剂仪器批发部进口分装，AR)，其他试剂均为分析纯。

2方法

溶液配制

传统有机溶剂展开剂的配制采用文献方法［6］，配制醋酸乙酯－甲醇－水－氨(30∶5∶1∶2)的展开剂。

微乳液展开剂的制备因为考虑到苦参生物碱极性不大，而含水量60%以上的微乳液含水量大，是O/W型，极性太大，所以选择含水量为15%～60%范围的微乳液，按照文献方法［1］配置微乳液。在保证重量比十二烷基硫酸钠：正丁醇：正庚烷=∶∶的条件下，改变水量，配制系列微乳液。按上述重量比取SDS，正丁醇，正庚烷，于研钵中加适量水研磨,然后加水至足量混匀，放置24h即可。表1微乳液的成分配比及结构

对照溶液的配制［7］

苦参碱对照品溶液：取苦参碱对照品加乙醇制成每毫升含有mg的溶液，作为苦参碱对照品溶液。氧化苦参碱对照品溶液：取氧化苦参碱对照品加乙醇制成每毫升含有mg的溶液，作为氧化苦参碱对照品溶液。

石韦对照药材溶液：取石韦粉2g，用石油醚浸泡过夜脱脂，去色素，抽滤，滤渣风干，加55%乙醇30ml浸泡过夜，过滤，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液。

黄芪对照药材溶液：取黄芪药材粉末2g，加70%乙醇浸泡过夜，过滤，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液。

萹蓄对照药材溶液：取萹蓄药材粉末2g，用石油醚浸泡过夜脱脂，去色素，抽滤，滤渣风干，加50%乙醇浸泡过夜，过滤，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液。

供试品溶液的配制

苦参供试品溶液：取苦参粉末g，加浓氨试液ml，氯仿25ml，放置过夜，滤过，滤液蒸干，残渣加氯仿ml使溶解，作供试品溶液。

复方石韦胶囊供试品溶液：取复方石韦胶囊4粒，倒出药粉置50ml锥形瓶，加30ml75%乙醇30ml浸泡过夜，过滤，滤液浓缩至2ml，作为供试品溶液。

薄层板的选择用定量毛细管吸取苦参碱对照品溶液、氧化苦参碱对照品溶液、苦参供试品溶液各2μl，分别于2%NaOH溶液制备的硅胶G薄层板和氨气预饱和过的普通硅胶G薄层板上点样，以醋酸乙酯－甲醇－水－氨(30∶5∶1∶2)为展开剂［5］，于室温(25℃)上行法展开，展程约10cm，取出晾干，喷以改良碘化铋钾显色。

苦参微乳薄层色谱分离用定量毛细管吸取苦参碱对照品溶液、氧化苦参碱对照品溶液、苦参供试品溶液2μl，氨气预饱和过的普通硅胶G薄层板上点样，以不同含水量各微乳液为展开剂，于室温(25℃)上行法展开，展程约8cm，取出晾干，喷以改良碘化铋钾显色。

复方石韦胶囊的微乳薄层色谱分析用定量毛细管分别吸取复方石韦胶囊供试品溶液、苦参碱对照品溶液、氧化苦参碱对照品溶液、石韦对照药材溶液、黄芪对照药材溶液、萹蓄对照药材溶液各2μl，点于同一块硅胶G薄层板上，氨气预饱和后以含水量30%的微乳液为展开剂，于室温(25℃)上行法展开，展程约8cm，取出晾干，先喷1%三氯化铝乙醇溶液使显色，置紫外光灯(365nm)下检视，找出斑点做好标志；然后喷10%硫酸乙醇液，于105℃加热至斑点显色清晰，做好标志；最后喷改良碘化铋钾显色。

3结果

薄层板的选择由于生物碱显碱性，而硅胶G微显酸性，为了避免生物碱与硅胶G反应使斑点拖尾严重，甚至停留在原点，所以应先使硅胶G变成中性或碱性物质。按照实验部分中“”，分别使用2%NaOH的硅胶G薄层板和用氨气预饱和后的普通硅胶G薄层板作为固定相，比较薄层分离结果。见图1。

从图1可以看到两种薄层板均可用于鉴别苦参药材中的苦参碱和氧化苦参碱，但是用氨气预饱和过的薄层板上苦参药材分离可以得到4个斑点，而用2%NaOH的硅胶G薄层板苦参药材分离只得到3个斑点，所以，选择用氨气预饱和过的薄层板作为固定相。

微乳展开剂的选择根据实验部分“”项，以不同含水量的微乳液为展开剂对苦参样品进行薄层分离。结果见图2。

从以上结果可以看出，4种规格的微乳液皆能鉴别苦参药材中的苦参碱和氧化苦参碱，图2a和图2b的斑点分离度明显比图2c和图2d的好，而且斑点较为集中，而图2c和图2d有拖尾、斑点未能分开，由实验结果对比可知，以含水量为15%和30%的微乳液为展开剂进行的薄层色谱实验效果要比含水量为45%和60%的好，而且前两者的效果相差不大。因此优选出适合作为苦参生物碱薄层色谱鉴别展开剂的微乳液规格是含水量为15%～30%幅度。

微乳展开剂与有机溶剂展开剂的比较对以传统有机溶剂为展开剂［5］和以微乳液为展开剂的苦参生物碱的薄层分离进行比较。结果见表2。表2传统有机溶剂展开剂微乳液展开剂的苦参生物碱的薄层分离比较

苦参碱和氧化苦参碱Rf值随微乳液中含水量变化趋势如图3所示。随含水量增加，苦参碱和氧化苦参碱的Rf值开始都有减小的趋势，含水量增加到60%时，氧化苦参碱Rf值突然增大。氧化苦参碱Rf值随微乳液含水量变化趋势较苦参碱明显，推测是因为氧化苦参碱因其独特的氧结构，极性大于苦参碱所致。并且由表2也可知，微乳系统中氧化苦参碱比移值变化较大，推测因氧化苦参碱亲水性较强，氧化苦参碱在微乳展开剂中溶解性比在有机溶剂展开剂中溶解性提高，因此比移值升高。

微乳液作为展开剂，对待测成分具独特的选择性和富集作用，更有利于提高色谱效率，可同时分离亲水物质、疏水物质、带电成分、非带电成分等。在微乳色谱中，溶质在固定相、油或水连续相及内核和界面膜等数相之间进行分配、层附过程中，被分离成分分配在微乳液的内相或连续相处，也可穿插排在界面上由十二烷基硫酸钠与正丁醇组成的栅栏层中，另外吸附剂硅胶G也对其产生吸附作用，使之在与富集相的竞争中连续不断地脱附出来。这样由于吸附、分配、静电、疏水、立体、萃取与反萃取等可能的效应，导致样品中被分离成分的迁移速率不同而使Rf值有所差异［1］。从以上结果可以看出，用有机溶剂做展开剂，斑点可以得到分离，但有时有拖尾现象。而用30%含水量的微乳液做展开剂对苦参药材进行分离，斑点圆而集中，无拖尾，分离效果好。

微乳薄层同时分离鉴定苦参中成药——复方石韦胶囊的多种成分由于该实验是四种不同药材在同一块薄层板上进行分析，所以显色方法必须集合单个药材各自的显色方法分析确定。各个药材的传统显色方法如下［8］。

萹蓄主要标志性成分为槲皮素，属于黄酮类化合物。显色方法是喷以1%三氯化铝乙醇溶液。置紫外光灯(365nm)下检视，槲皮素斑点显黄绿色。

石韦主要标志性成分是绿原酸。显色方法是喷1%三氯化铝乙醇液，烘干，在紫外灯(365nm)下检视。

黄芪主要标志性成分为黄芪甲苷，属于三萜皂苷类。显色方法是喷10%硫酸乙醇液，于105℃加热至斑点显色清晰。日光下显棕褐色斑点，365nm下显橙黄色荧光斑点。

苦参主要标志性成分为苦参碱和氧化苦参碱，属于生物碱类。显色方法是喷改良碘化铋钾显橘红色。

考虑到喷硫酸乙醇后加热到105℃的温度太高，可能会破坏其他药材成分，而改良碘化铋钾为黄褐色溶液，必须留在最后显色。所以确定显色步骤是先喷1%三氯化铝乙醇溶液使显色，置紫外光灯(365nm)下检视，找出斑点做好标志；然后喷10%硫酸乙醇液，于105℃加热至斑点显色清晰，做好标志；最后喷改良碘化铋钾显色。

按照实验部分“”项，对复方石韦胶囊和对照药材进行薄层分离，结果见图4。

图4中A斑点和B，D，E斑点是喷1%三氯化铝乙醇溶液使显色，置紫外光灯(365nm)下检视下发现的，呈淡黄绿色；C，F，G斑点是喷10%硫酸乙醇液后，用电吹风加热而显棕褐色的斑点；剩下微显橘红色的是喷改良碘化铋钾后得到的斑点。

由图4可看到复方石韦胶囊供试品可分离出4个斑点。由说明可知A斑点和B，D，E斑点由于Rf值相差比较大，未能确定是何种成分；C，F，G斑点初步可确定含有三萜皂苷类化合物，可能含有黄芪甲苷；剩下微显橘红色的斑点，可以确定含有氧化苦参碱和苦参碱。因此可以知道苦参碱和氧化苦参碱、黄芪甲苷等成分在该微乳薄层色谱分析中得到良好的分离，而石韦和萹蓄的标志性成分未能准确地鉴别。

4结论

用含水量30%的微乳液做展开剂成功用于分离鉴定苦参药材及含苦参类中成药复方石韦胶囊中生物碱，方法简单，避免了使用毒性大的有机溶剂，色谱斑点规则清晰，圆而集中，不扩散，不拖尾，检出灵敏度高，可作为苦参及其中成药中有效成分的定性检测方法。

【参考文献】

［1］康纯，闻莉毓，丁仲