结核分歧杆菌及耐药试验检测新技术

结核检测新技术广州市场部徐未概述结核病：由结核分枝杆菌引起的一种慢性感染疾病，以肺结核最为常见，主要病变为结核结节、侵润、干酪样变和空洞形成。传染源：患者和动物（牛）传播途径：空气途径为主。易感人群：普遍易感。婴幼儿、青春后期及老年人发病率较高。肺结核最常见的症状是持续大于2周的排痰性咳嗽中国结核病患病约为600万2023/5/243结核病感染率44.5%123耐多药结核病率6.8%4活动性肺结核患病率459/10万菌阴肺结核病患病率340/10万（74.1%）现症（15岁及以上）：MDRTB33.9万，XDRTB10.5万耐多药结核病流行病学2007-2008年全国结核病耐药基线调查涂阳肺结核初治涂阳复治涂阳总耐药率37.8%35.2%56.2%耐多药率8.3%5.7%25.6%广泛耐药率0.7%0.5%2.1%2010年肺结核耐药率涂阳肺结核初治涂阳复治涂阳总耐药率42.1%42.7%38.5%耐多药率6.8%5.4%15.4%广泛耐药率2.1%1.2%7.7%1.单耐药结核病：是指结核病患者感染的结核分枝杆菌体外DST证实对1种一线抗结核药物耐药的结核病。2.多耐药结核病：是指结核病患者感染的结核分枝杆菌体外DST证实对1种以上一线抗结核药物耐药（但不包括同时对异烟肼和利福平耐药）的结核病。3.利福平耐药结核病:是指结核病患者感染的结核分枝杆菌体外DST证实对利福平耐药的结核病，包括任何耐利福平的结核病WHO.Definitionsandreportingframeworkfortuberculosis–2013revision.WHO/HTM/TB/2013.2耐药结核病的定义4.耐多药结核病：是指结核病患者感染的结核分枝杆菌体外DST证实至少同时对异烟肼和利福平耐药的结核病。5.广泛耐药结核病：是指结核病患者感染的结核分枝杆菌体外DST证实除至少同时对异烟肼和利福平耐药外，还对任何氟喹诺酮类抗菌药物产生耐药，以及3种二线注射类药物（卷曲霉素、卡那霉素和阿米卡星）中的至少1种耐药的结核病。WHO.Definitionsandreportingframeworkfortuberculosis–2013revision.WHO/HTM/TB/2013.2耐药结核病的定义结核病的诊断方法

诊断方法特点影像学特异性差，对医师主观依赖性强痰结核菌培养金标准，耗时2-8周，需要带菌标本（如痰等标本）抗酸染色法敏感性较低，需要带菌标本（如痰等），不区分结核分子杆菌与其他分枝杆菌血清结核抗体检测灵敏性特意性低，不适用于活动性结核判断分子诊断方法重复性较差，易污染结核菌素实验受卡介苗接种干扰，假阳性高，特异性差药物敏感试验需要时间痰结核分枝杆菌培养阳性平均时间：固体培养基14~21天液体培养基

7~14天

菌种鉴定平均时间：20~30天药物敏感试验平均时间：固体培养基

30天液体培养

7~14天γ干扰素释放试验（interferongammareleaseassays,IGRAs）国际最新的用于结核杆菌感染的体外免疫诊断方法原理：机体感染结核杆菌后，血液中特异性的T淋巴细胞在再次受到结核杆菌特异性抗原刺激时，分泌特异性的细胞因子IFN-γ，通过检测IFN-γ来判断有无结核的感染。结核杆菌特异性抗原：早期分泌靶抗原6（ESAT-6）培养滤液蛋白10（CEP-10）TB-7.7（p4）两种商品化的试剂盒：浓度法的QFT-GIT（QuantiFERON-TB＠GoldIn-Tube）（德国Qiagen）斑点法的T-SPOT.TB

（英国OxfordImmunotec）7γ干扰素释放试验原理8IGRAs的原理是：受到MTB刺激致敏的T淋巴细胞再次遇到同类抗原时可产生γ-干扰素来自结核分枝杆菌基因组RD1和RD11区域所有的卡介苗均缺失RD1和RD11区基因大多数环境分枝杆菌也缺失RD1和RD11区基因（除M.kansasii、M.szulgai和M.marrinums之外）γ干扰素释放试验的高特异性ESAT-6、CEP-10和TB-7.711QFT-GIT试验结果判读空白对照（IU/ml）结核抗原减去空白对照（IU/ml）阳性对照减去空白对照（IU/ml）结果解释≤8.0≥0.35且≥25%空白对照值任意值阳性很可能感染了结核分枝杆菌≤8.0＜0.35或＜25%空白对照值≥0.5阴性不太可能感染结核分枝杆菌≤8.0＜0.35或＜25%空白对照值＜0.5不确定不确定是否感染结核分枝杆菌＞8.0任意值任意值不确定不确定是否感染结核分枝杆菌GuillénMA.ArchBronconeumol2011,47:521-530.报告单送检注意事项1、耗材的使用：肝素锂抗凝管2、送检时间：16h内3、标本保存温度：17-27度4、结核IGRA技术不能鉴别出活动性结核和潜伏性结核γ干扰素释放试验临床应用“菌阴”结核的辅助诊断、不明原因发热查因的检查涂片和培养阴性的疑似结核病患者儿童结核病的辅助诊断肺外结核的鉴别诊断肠结核（与克罗恩病鉴别）结核性脑膜炎（儿童）结核性胸膜/腹膜炎（胸腹水待查的患者）骨与关节结核淋巴结结核肾结核2012年全世界通过快速诊断检测方法发现的病人数增加了40%以上，达到9.4万人，耐多药结核病例中仍有四分之三的人没有得到诊断。WHO.Globaltuberculosisreport2012WHO全球推荐2010年12月WHO官方推荐用于结核病的检测WHO《结核病定义和报告框架2013年修订版》细菌学确诊结核病例:生物标本经涂片镜检、培养或世卫组织批准的快速诊断试剂(如XpertMTB/RIF)检验为阳性者。所有此类病例均应报告,不论其是否已开始结核病治疗。WHO资料更新XpertMTB/RIFimplementationmanualXpertMTB/RIFassayforthediagnosisofpulmonaryandextrapulmonaryTBinadultsandchildren2014年2月26日拿到CFDA注册证，我国CDC于2014年5月份购买了774台。XpertMTB/RIF检测检测原理半巢式实时荧光定量PCR技术，检测结核杆菌DNA，可同时诊断结核病和利福平耐药，操作简便，全自动处理操作简单、安全性好操作人员仅需一天培训，即可掌握全自动检测，手动操作仅3步，安全性好WHO认可的检测项目WHO认可，可用于结核病的确诊XpertMTB/RIF：临床研究Chin

Med

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2014;127

(21):

3744-375038XpertMTB/RIF：研究结果MTB检测敏感性和特异性Chin

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2014;127

(21):

3744-375039标本类型对照（研究数量，样本数量）敏感性中位数（%）（95%Crl）

特异性中位数（%）（95%Crl）

淋巴结组织和穿刺物XpertMTB/RIF与培养比较（14项研究，849份样本）84.9(72–92)92.5(80–97)XpertMTB/RIF与CRS比较（5项研究，1项未发表）83.7(74–90)99.2(88–100)脑脊液XpertMTB/RIF与培养比较（16项研究，709份样本）79.5(62–90)98.6(96–100)XpertMTB/RIF与CRS比较（6项研究，512份样本）55.5(51–81)98.8(95–100)

胸腔积液XpertMTB/RIF与培养比较（17项研究，1385份样本）43.7(25–65)98.1(95–99)XpertMTB/RIF与CRS比较（7项研究，698份样本）17(8–34)99.9(94–100)胃灌洗液和吸出物XpertMTB/RIF与培养比较（12项研究，1258份样本）83.8(66–93)98.1(92–100)其它组织样本XpertMTB/RIF与培养比较（12项研究，699份样本）81.2(68–90)98.1(87–100)XpertMTB/RIF诊断成人和儿童肺外结核及利福平耐药（肺外标本）敏感性和特异性的荟萃分析综合参考标准（CRS）：包括除了XpertMTB/RIF外的核酸扩增试验（NAAT）、组织学、涂片、细菌培养、生化检测、临床症状或抗结核治疗疗效的组合不受其他微生物的干扰79株来自不同地区的结核菌株82株非结核分枝杆菌、真菌、病毒WHO推荐：XpertMTB/RIF应当作为成人或儿童疑似耐多药结核病或合并HIV感染的首选诊断XpertMTB/RIF可以作为所有成人或儿童疑似结核病的首选诊断XpertMTB/RIF可以作为成人疑似结核病（非耐多药结核病或合并HIV结核病）的补充诊断，应当作为涂片阴性的标本的进一步检测手段16结核病诊断未来的首选检测QFT与Xpert对比

QFT/t-spotXpert原理人体被结核分枝杆菌感染后产生的记忆性T细胞在体外被特异性抗原刺激时激活并释放Y-IFN运用实时PCR和反转录酶PCR技术，一体化和自动化进行样品制备、核酸扩增和靶向序列检测。引物扩增含有rpoB基因，而利福平耐药中rpoB基因突变率为95%是否为进口试剂是是标本类型血，3ml/血，8