电泳相关信息和配方

Acr-Bis液(丙烯酰胺溶液)500mL：于800mL洁净的烧杯中，依次称取双丙烯酰胺4g,丙烯酰胺146g，缓慢倒入双蒸水约350mL，以玻璃棒缓慢搅拌促进溶解。注意，双丙烯酰胺粉末易漂浮在空气中，所以要称重时注意周围空气流速，称取丙烯酰胺时可以将烧杯中的双丙烯酰胺掩盖。玻璃棒搅动幅度不要太大以免溶液底部的双丙烯酰胺浮起并扩散到空气中。完全溶解的溶液应清澈无色透明。待溶解完全后补加双蒸水至500mL，倒入无色玻璃试剂瓶中，4°C冰箱可保存10个月。4x分离胶缓冲液，500mL：于500mL洁净的量筒中，依次加入375mL2MTris-HCl(实测pH8.9±0.1，25C)，100g/LSDS溶液(冰箱取出后可微波加热促进储存液的溶化)20mL，最后加入适量双蒸水至500mL。倒入无色玻璃试剂瓶中，4C冰箱最少可保存12个月。有时冰箱温度过低会使储存液混浊，微波略微加热使其澄清后即可使用。100g/L过硫酸铵溶液(ammoniumpersulfate,AP)20mL：2g过硫酸铵加20mL双蒸水，倒入无色塑料试剂瓶中，4C冰箱最少可保存10个月。注意配胶时不要交叉污染TEMED，可以以5mL分装到4个无色塑料试剂瓶中分别保存。TEMED成品液：购买后分装成2或5mL小管装使用可避免母液受到污染。5x样品缓冲液，100mL：依次加入50mL75%(v/v)甘油，20mL100g/LSDS溶液，10mL10g/L漠酚蓝溶液，5mL2MTris-HCl(实测pH8.9±0.1，25C)，5mL巯基乙醇，9mL双蒸水。混合母液倒入无色玻璃试剂瓶中，4C冰箱至少可保存12个月。可分装成10mL使用，不会使母液受到蛋白污染。10x电泳缓冲液，1000mL：称取10gSDS，30gTrisbase，144g甘氨酸(事先要明确甘氨酸溶液的颜色，选用溶解后澄清无色的产品)于1000mL的烧杯中，加水约700mL溶解，可微波炉加热(<80C)以促进溶解，注意不要使其沸腾，加热至烧杯烫手即可，间歇用玻璃棒搅拌。分装至无色玻璃试剂瓶中，室温最少可保存6个月。其pH值约为pH8.4±0.1。【注意可省去pH6.8的浓缩胶缓冲液，用4x分离胶缓冲液pH8.9的替代即可】【三】12%电泳胶的配制要注意的是，配胶时分离胶的五个组分按下表依次加入洁净的配制分离胶的小烧杯内，以枪头搅拌约10-20sec，灌胶后再在胶面上小心地铺上一几毫米厚的水层(这可使凝固后的胶面平滑整齐)，然后于37C凝固15-30min。而在配胶时浓缩胶只加前三个组分，混合液要于4C冰箱保存，待分离胶凝固后再取出加入AP和TEMED溶液，枪头搅拌均匀，灌胶后插入梳子，然后于37C凝固15-30min。凝固的胶连带其附着的玻璃板用塑料薄膜严密包裹可在4C冰箱保存2-4天，长时间保存易干胶，要重新做胶。12%电泳胶的配制（10mL）Table12%GelcomponentsCondensinggelReagentsSeperatinggel二块30%Acr-Bissolution4mL0.67mL4xseperatinggelbuffer2.5mLpH8.91mLpH8.9H2O3.5mL2.3mL

100g/LAPTEMED50gL5gL30gL5gL4块30%Acr-Bissolution8mL1.35mL4xseperatinggelbuffer5 mLpH8.92mLpH8.9H2O7mL4.6mL100g/LAP100gL60gLTEMED10gL10gL六块30%Acr-Bissolution12mL2.1mL4xseperatinggelbuffer7.5mLpH8.93mLpH8.9H2O10.5mL7mL100g/LAP150gL90gLTEMED15gL15gL其他浓度的电泳胶配制A%电泳胶的配制(10mL)TableA%Gelcomponents(10mL) ReagentsSeperatinggel Condensinggel二块30%Acr-BissolutionmL 0.67mL4xseperatinggelbuffer2.5mLpH8.91mLpH8.9H2O补足10mL2.3mL100g/LAP50gL30gLTEMED5gL5gL其中的H2O补足10mL，所用的计算公式为:10mL-2.5mL-mL。例如6%的配方中，30%Acr-Bissolution2mLH2O 5.5mL

例如12%的配方中，4mL3.5mL30%Acr-Bissolution4mL3.5mLH2O例如15%的配方中，30%Acr-Bissolution5mLH2O 2.5mL【四】考马斯亮蓝染色和脱色（极其好用！！！）考马斯亮蓝染色液1000mL：先称取考马斯亮蓝R2501.0g于1000mL试剂瓶内，加入甲醇450mL溶解，再加冰醋酸100mL和双蒸水450mL至大约1000mL。室温可放置12个月以上。染色液可倒入专用的回收试剂瓶，届时加入适量甲醇、考马斯亮蓝和大约10g/L的三氯乙酸后可重复使用。考马斯亮蓝脱色液10L：于10L洁净塑料桶内装入工业乙醇2L，冰醋酸500mL，加入去离子水至10L，混匀，室温可放置12个月以上。蛋白电泳凝胶的快速染色和脱色：凝胶的染色和脱色于合适体积的微波炉盒中进行。电泳后的凝胶加入染色液（以刚没过凝胶即可），于微波炉加热约40-70sec至染色液刚刚沸腾（注意塑料盒的盖子不要盖的太紧以防染色液爆沸出），然后于脱色摇床上继续染色约10min即可。染色液请倒入专用的回收容器内。以自来水小心地淋洗凝胶冲去剩余染料，然后倒入适量的脱色液，微波加热至刚沸腾后于染色摇床上摇动约10min，倒掉脱色液，此时凝胶的蛋白条带即可看清。重复以上脱色步骤一次，即可看清电泳条带。扫描凝胶蛋白条带需要完全脱掉背景颜色，这需要重新换上脱色液室温摇床脱色2h以上。【五】蛋白上样量的选择要根据具体情况决定，对于考马斯亮