磁珠分选原理及应用

1/1MD0xxx.01MiltenyiBiotec:

免疫磁珠分选技术及应用

德国美天旎生物技术有限公司目前一页\总数四十八页\编于三点MD0197.02内容

•

MACS技术原理

•MACS技术设备及分选策略

•几种特殊的MACS分选

分选和分析DC细胞

分选各种T细胞

分选和分析细胞因子分泌细胞

分选造血干细胞

分选人类肿瘤细胞

分选和分析凋亡和死亡细胞

分选转染细胞

分子生物学和蛋白生化的分选目前二页\总数四十八页\编于三点MD0347.01MACS技术原理MACS(MagneticActivatedCellSorting)：=免疫学+细胞生物学+磁力学基于抗体对抗原的特异性识别磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上，从而与细胞相连在高强度、梯度磁场中达到细胞磁性分离的目的目前三页\总数四十八页\编于三点MD0651.01MACS®磁性分选MACS微珠进行磁性标记未标记的细胞

先行流出洗脱阳性分选的细胞目前四页\总数四十八页\编于三点MD0197.02分选前标本制备：过滤MACS预选滤器：30m

目前五页\总数四十八页\编于三点MD0197.02MACS技术

设备与试剂

»

MACS微珠

»

MACS分选柱

»

MACS分选器

»详细分选方案*

目前六页\总数四十八页\编于三点MACS技术

设备与试剂MACS微珠：MACS微珠是与高度特异性单克隆抗体相偶联的超顺磁化微粒，可用于目的细胞的磁性标记。

特性：

50nm大小对细胞没有毒性可生物降解不影响细胞特性

目前七页\总数四十八页\编于三点MD0057.03MACS技术分选的CD8+T细胞微珠目前八页\总数四十八页\编于三点MACS微珠直标微珠多选微珠间标微珠目前九页\总数四十八页\编于三点MACS技术

设备与试剂MACS分选柱：

》填充有不同规格的铁珠。》铁珠表面有亲水包被，不损伤细胞。》无菌包装。》可用于分选多种细胞及亚细胞物质、细菌、病毒、mRNA和蛋白质。专利产品将磁场扩大1000－10000倍——高纯度，高回收率

目前十页\总数四十八页\编于三点MD0061.02在MS柱中产生的强大磁场

目前十一页\总数四十八页\编于三点MACS分选柱：MACS技术

设备与试剂目前十二页\总数四十八页\编于三点MACS分选器：从手动到自动，从实验室到临床MACS技术

设备与试剂目前十三页\总数四十八页\编于三点MACS分选器MACS技术

设备与试剂目前十四页\总数四十八页\编于三点autoMACS分选仪9种程序，一机完成所有细胞分选成本低，两个可重复使用的分选柱（2周内100次）快速（3－10分钟）重复性好全自动分选，仪器操作简单适用范围广：从少量标本（105）到大量标本（4X109），进样量0.5ml-50ml8种全血微珠，可以做常见细胞的全血分选，省去了费时的提取单个核细胞过程

目前十五页\总数四十八页\编于三点MACS技术主要优势

• 小磁珠:50nm（快速、不活化细胞、不沉淀）

• 保留细胞功能（直接进行后续实验；无毒性；氧化

铁和多聚糖组成，可生物降解）

• 与流式细胞仪兼容（不影响细胞光学特性、不影响荧

光抗体标记、与流式细胞仪分选联合使用可以缩短流

式分选时间）

•快速、简便、无菌

•适用范围广（磁珠种类多、从少量到大量、适用于分

选各种细胞、亚细胞物质）MD0043.02目前十六页\总数四十八页\编于三点MACS®

细胞分选策略

• 阳性分选

•去除分选

•去除分选后再阳性分选

•多重分选

MD0044.02目前十七页\总数四十八页\编于三点MACS细胞分选策略

1、阳性分选：

• 根据特异性标志分选细胞:阳性分选是指目的细胞磁性标记

后，作为阳性的标记组分直接分选出来。

•优点：

》高纯度，尤其是富集稀有的细胞

》高回收率

》操作简便、迅速

MD0044.02目前十八页\总数四十八页\编于三点MD016102阳性分选策略MACS®

微珠磁性标记未标记细胞先行流出将分选柱移出磁场，洗脱阳性分选细胞目前十九页\总数四十八页\编于三点MACS细胞分选策略

2、去除分选：

•

去除分选是磁性标记非目的细胞，并将其从细胞混合物中去

除，即未磁性标记的细胞为目的细胞。

•去除分选策略适用范围：

》去除不需要的细胞

》缺乏针对目的细胞的特异性抗体（如肿瘤细胞）

》不需要抗体和目的细胞结合

》需进一步通过阳性选择分选细胞亚群

MD0044.02目前二十页\总数四十八页\编于三点MD0160.02去除分选磁性标记分选未磁性标记细胞目前二十一页\总数四十八页\编于三点MACS细胞分选策略

3、去除分选后再阳性分选：

•

即先去除非目的细胞，再进行阳性分选。

•适用范围：

》非目的细胞也表达用来阳性选择目的细胞的抗原。

》要分选非常稀有细胞，先去除非目的细胞再行阳性分选，

可获得高纯度的目的细胞。

MD0044.02目前二十二页\总数四十八页\编于三点1.去除非CD4+T细胞。

用生物素化抗体混合物和抗生物素微珠间接磁性标记非CD4+T细胞磁性分选去除标记细胞

先行流出为CD4+T细胞2.CD25微珠直接磁性标记CD25+细胞阳性分选靶细胞CD4+CD25+

调节性T滞留在分选柱上，离开磁场后洗脱下来去除后再阳性分选CD4+CD25+双阳性细胞目前二十三页\总数四十八页\编于三点MD0652.01多选微珠标记MACS分选磁性颗粒的酶解离终止解离反应根据第二标志进行磁珠标记MACS分选MACS细胞分选策略

4、多选微珠：

目前二十四页\总数四十八页\编于三点MACS畅销机器与分选柱

•

MiniMACSstartingkit：1个分选架、1个MiniMACS分选器、1盒MS分选柱、1支价值7500元试剂（15088元）：可做阳性分选、小量标本、间标去除分选、分子生物学分选

•

Mini&MidiMACSstartingkit：1个分选架、1个MiniMACS分选器、1个MidiMACS分选器、1盒MS分选柱、1盒LS/LD分选柱、1支价值7500元试剂（27838元）：可做阳性分选和去除分选

•

MS分选柱：1盒25个，2763元

•LS分选柱：1盒25个，4356元

•LD分选柱：1盒25个，5100元

•uMACS与u或者M分选柱：分子生物学分选

• VarioMACS分选仪

• autoMACS自动分选仪、CliniMACS分选仪

MD0044.02目前二十五页\总数四十八页\编于三点MACS几种畅销磁珠与抗体

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专利产品：CD133、CD303、CD304

•

特殊产品：人类DC系列：BDCA-1(CD1c)、BDCA-2(CD303)、

BDCA-3(CD141)、BDCA-4(CD304)

小鼠DC系列：mPDCA微珠与抗体

干细胞产品：CD133、CD271微珠与抗体

细胞因子分泌细胞：CSA分选与分析

TH2细胞：CD294(CRTH)微珠与抗体

分选人类肿瘤细胞：上皮肿瘤：CK、HEA

非血液肿瘤：CD45去除

死亡细胞去除试剂盒

分选转染细胞

分选HIV病毒、mRNA、cDNA

•topten：CD133、CD34、人CD4+CD25+、小鼠CD4+CD25+

CD303/CD304、人类NK、小鼠CD11c、anti-PE微珠

小鼠干细胞试剂盒（系别阴性＋CD117）、CD4/CD8

MD0044.02目前二十六页\总数四十八页\编于三点主要竞争对手分析

Dynal：大磁珠

主要市场：CD4、CD8等高频细胞，

优势：价格

劣势：回收率低（不能做低频细胞、弱表达细胞分选）

磁珠必需剪切（耗时——细胞状态不佳）

大磁珠（活化细胞）

我们的优势：纯度高、回收率高、细胞活性好

不活化细胞，不改变细胞功能

省时、省细胞

产品品种最多，有专利产品

有手动、自动、临床级产品

有强大的技术支持队伍

很好的声誉，市场占有率最高

MD0044.02目前二十七页\总数四十八页\编于三点主要卖点

干细胞产品：人类：CD133、CD34、MSC试剂盒（CD271）

小鼠：系别阴性试剂盒、CD117微珠

定向分化培养基

DC产品：人类：BDCA-1、BDCA-2/4

小鼠：CD11c

NK产品：人类：NK细胞阴选试剂盒、CD3/CD56

T细胞产品：CD4+CD25+调节性T细胞（人和小鼠）

CSA系列

CD4、CD8微珠及阴选试剂盒

B细胞产品：CD19微珠及阴选试剂盒

肿瘤细胞分选：癌细胞富集试剂盒、HEA微珠、CD45阴选

单核细胞分选：CD14微珠及阴选试剂盒

间标微珠

死细胞去除试剂盒

预选滤器、FCR阻断剂、T细胞活化与扩增试剂盒

流式细胞仪抗体（价廉、包装量大、优质）

MD0044.02目前二十八页\总数四十八页\编于三点识别DC和DC亚群New

Lineage-

(CD3,CD14,CD16,CD19,CD20,CD56)

HLA-DR+PDCCD11c-CD123+BDCA-2(CD303)+BDCA-4(CD304)+CD123lowCD123-CD11c+CD123low/-MDCMDC1MDC2BDCA-1(CD1c)+BDCA-3(CD141)++DC亚群特异性标志:BloodDendriticCellAntigensBDCA-2/4+BDCA-1+BDCA-3+目前二十九页\总数四十八页\编于三点CD11c+DCCD8+DCCD4+DCCD11c+B220+Gr-1(Ly-6C/G)+DCCD11c+B220-

DCConventionalDC(“lymphoid“DC)(“myeloid“DC)CD11cCD8aCD11cCD4PEFITCAPCCD11cCD11cB220Gr-1PlasmacytoidDC(PDC)mPDCA-1MACS®

技术分选与分析小鼠DC细胞New

目前三十页\总数四十八页\编于三点MACS®技术分选与分析大鼠DC细胞New

MD0044.02Anti-DC(OX62)微珠

用于从大鼠外周血、淋巴和非淋巴组织中分选或者去除OX62+DC。

单克隆抗体OX62识别表达于大部分大鼠DC上的整合素αE2亚单位（分子量150kDa）。

两个主要的树突状细胞亚群：CD4/OX41双阳性和CD4/OX41双阴性亚群。

该抗原也表达于表皮TCRα/β+或γ/δ+的T细胞亚群和垂体前叶星状滤泡样（S100+）细胞的一个亚群，但在朗格罕氏细胞和巨噬细胞上不表达。

目前三十一页\总数四十八页\编于三点MACS®技术分选与分析功能性T细胞MD0044.02目前三十二页\总数四十八页\编于三点MD0420.02MACS®

细胞因子分泌细胞分析与分选New抗原特异性

再刺激细胞因子

分泌阶段捕获试剂

标记荧光标记和

磁性分选••••CatchReagentDetectionAntibodyAnti-PEMicroBeadscytokinesecretingcellsecretedcytokine目前三十三页\总数四十八页\编于三点MD0420.02MACS®

细胞因子分泌细胞分析与分选New分选前刺激组分选后未刺激组*百分比均为占CD4＋细胞百分比目前三十四页\总数四十八页\编于三点MD0420.02MACS®

细胞因子分泌细胞分析New刺激组未刺激组

使用PE-CMVpp65/HLA/A2-tetramers

和IFN-gSecretionAssay-DetectionKit(APC)orIL-2SecretionAssay-DetectionKit(APC)检测HLA/A2CMV+患者PBMC。*百分比均为占CD8＋细胞百分比目前三十五页\总数四十八页\编于三点人类细胞因子分泌细胞分选与检测试剂盒IFN-g

分泌细胞IL-2分泌细胞IL-4分泌细胞IL-10分泌细胞TNF-分泌细胞MACS®

细胞因子分泌细胞分析与分选

New小鼠细胞因子分泌细胞分选与检测试剂盒IFN-g

分泌细胞IL-2分泌细胞IL-4分泌细胞IL-5分泌细胞IL-10分泌细胞目前三十六页\总数四十八页\编于三点人类干细胞分选微珠与试剂盒

• CD34微珠及多选微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选

造血干细胞、内皮前体细胞

•

CD133微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选

造血干细胞、内皮前体细胞、多能成体干细胞（MAPC）

•

CD117微珠：用于从骨髓、外周血、脐带血中分选

造血干细胞、骨髓间充质细胞

•

CD45/GlyA去除分选试剂盒：用于从骨髓中阴选分选

多能成体干细胞（MAPC）

•

CD105微珠：用于从骨髓中分选间充质细胞

• 抗成纤维细胞微珠：用于从骨髓中分选间充质细胞

多能成体干细胞（MAPC）

•

MSC分选工具（CD271）new：用于从骨髓中分选间充质细胞MD0044.02目前三十七页\总数四十八页\编于三点MSCResearchToolBox-CD271(LNGFR)new成分:分选:CD271(LNGFR)-APCAnti-APCMicroBeadsFcRBlocking培养:NHExpansionMedium(2x500mL)CytoMix-CD271(LNGFR)

质量控制:NHAdipoDiffMedium(12x8mL)NHOsteoDiffMedium(12x5mL)Introductoryoffer目前三十八页\总数四十八页\编于三点AdsinBlood(April&Mai)MSCResearchToolBox-CD271(LNGFR)人类MSC的标准化研究CD271又叫做低亲和力神经生长因子受体(LNGFR),是迄今为止发现的最佳MSC分选标志，可用于直接从人类骨髓中分选MSC。分选后CD271(LNGFR)+MSCs是一群均一的MSC细胞群，而CD271阴性细胞成分中没有成纤维细胞克隆形成单位(CFU-F)活性。与贴壁培养的MSC相比，CD271分选的MSC增殖能力增强10－1000倍。CD271分选和扩增的MSC保留了多系分化潜能，具有分化为脂肪细胞和成骨细胞、软骨细胞、内皮细胞的可塑性。cumulativepopulationdoubling(CPD)

目前三十九页\总数四十八页\编于三点AdsinBlood(April&Mai)MSCResearchToolBox-CD271(LNGFR)人类MSC的标准化研究NadiaQuirici等，ExperimentalHematology30(2002)783–791目前四十页\总数四十八页\编于三点MACS小鼠干细胞分选试剂盒：LineageCellDepletionKit:去除成熟和分化的造血细胞，预富集造血干祖细胞。CD117MicroBeads：分选早期和晚期干祖细胞。Anti-Sca-1MicroBeads：分选造血干细胞和早期造血祖细胞。CD117+Sca-1+lin–细胞也有非造血分化潜能，如分化为肌细胞、内皮细胞、肝细胞、神经系统细胞。CD45/Ter119微珠去除分选骨髓细胞，可以得到MAPCs,也有体外分化为多种细胞的潜能。小鼠骨髓造血干细胞(HSC)定义为Sca-1+、CD117+(c-kit)、Thy-1low

和lin-细胞.目前四十一页\总数四十八页\编于三点MACS®

技术分选人类肿瘤细胞NewMD0044.02上皮肿瘤细胞

根据表面抗原进行分选与分析：Anti-HEA(EpCAM)MicroBeadsAnti-ErbB-2(HER-2/neu)MicroBeads根据细胞内细胞角蛋白分选与分析：cytokeratin黑色素瘤细胞分选：Anti-melanomaMicroBeads其它非造血系统肿瘤细胞:CD45MicroBeads去除白细胞骨髓瘤细胞：CD138MicroBeads霍奇金氏淋巴瘤/RS细胞：CD30MicroBeads目前四十二页\总数四十八页\编于三点MACS®

技术分选凋亡细胞NewMD0044.02刺激、分化、凋亡、脱颗粒、坏死PS暴露PS暴露细胞被AnnexinV微珠磁性标记磁性标记细胞滞留在分选柱上PS暴露细胞被洗脱下来目前四十三页\总数四十八页\编于三点MACS®

技术分选转染细胞NewMD0044.02应用于功能基因、信号转导研究、药物筛选和标记技术。MACSelect4转染细胞分选试剂盒使用pMACS4.1和自己的质粒转染细胞用MACSelect4微珠标记转染细胞MACS分选转染细胞分选后细胞可用于培养或者分析目前四十四页\总数四十八页\编于三点MACS®技术分选转染细胞NewMD0044.02优点：

省时：只需2-3小时（建立一个稳定的细胞系需数周）