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文档简介
线粒体:呼吸链(电子传递链)Respiratorychain一系列能够可逆地接收和释放H+和e-化学物质所组成酶体系在线粒体内膜上有序地排列成相互关联链状。化学渗透假说(氧化磷酸化偶联机制):线粒体内膜上呼吸链起质子泵作用,利用高能电子传递过程中释放能量将H+泵出内膜外,造成内膜内外一个H+梯度(严格地讲是离子电化学梯度),ATP合酶再利用这个电化学梯度来合成ATP。电子载体:在电子传递过程中与释放电子结合并将电子传递下去物质称为电子载体。参加传递电子载体有四种∶黄素蛋白、细胞色素、铁硫蛋白和辅酶Q,在这四类电子载体中,除了辅酶Q以外,接收和提供电子氧化还原中心都是与蛋白相连辅基。阈值效应:突变所产生效应取决于该细胞中野生型和突变型线粒体DNA百分比,只有突变型DNA达成一定数量(阈值)才足以引发细胞功效障碍,这种现象称为阈值效应。导向序列:将游离核糖体上合成蛋白质N-端信号称为导向信号,或导向序列,因为这一段序列是氨基酸组成肽,所以又称为转运肽。信号序列:将膜结合核糖体上合成蛋白质N-端序列称为信号序列,将组成该序列肽称为信号肽。共翻译转运:膜结合核糖体上合成蛋白质经过定位信号,一边翻译,一边进入内质网,因为这种转运定位是在蛋白质翻译同时进行,故称为共翻译转运。蛋白质分选:在膜结合核糖体上合成蛋白质经过信号肽,经过连续膜系统转运分选才能抵达最终目标地,这一过程又称为蛋白质分选。核糖体:1.原核生物mRNA中与核糖体16SrRNA结合序列称为SD序列(SDsequence)。2.核酶:将具备酶功效RNA称为核酶。3.N-端规则(N-endrule):每一个蛋白质都有寿命特征,称为半衰期(half-life)。研究发觉多肽链N-端特异氨基酸与半衰期相关,称为N-端规则。4.泛素介导路径:蛋白酶体对蛋白质降解经过泛素(ubiquitin)介导,故称为泛素降解路径。蛋白酶体对蛋白质降解作用分为两个过程:一是对被降解蛋白质进行标识,由泛素完成;二是蛋白酶解作用,由蛋白酶体催化。细胞核:1.核内膜:有特有蛋白成份(如核纤层蛋白B受体),膜内表面有一层网络状纤维蛋白质,即核纤层(nuclearlamina),可支持核膜。核外膜:靠向细胞质一层,是内质网一部分,胞质面附有核糖体核周隙:内、外膜之间有宽20~40nm腔隙,与粗面内质网腔相通核孔复合体:内、外膜融合处,物质运输通道核纤层:内核膜内表面纤维网络,支持核膜,并与染色质、核骨架相连。核孔复合体:是细胞核内外膜融合形成小孔,直径约为70nm,是细胞核与细胞质间物质交换通道。核孔蛋白:参加组成核孔蛋白质,可能在经核孔主动运输中发挥作用。核运输受体:参加物质经过核孔主动运输。核周蛋白:是一类与核孔选择性运输关于蛋白家族,相当于受体蛋白。5.输入蛋白:核定位信号受体蛋白,存在于胞质溶胶中,可与核定位信号结合,帮助核蛋白进入细胞核。输出蛋白:存在于细胞核中识别并与输出信号结合蛋白质,帮助核内物质经过核孔复合物输出到细胞质,而后快速经过核孔复合物回到细胞核。核输出信号:作为核内物质输出细胞核信号,帮助核内一些分子快速经过核孔进入细胞质。受体为exportin。6.核质蛋白:在细胞质中合成,经过核定位信号运输到细胞核,如各种组蛋白、DNA合成酶类、RNA转录和加工酶类、各种起调控作用蛋白因子等。是一个丰富核蛋白,在核小体装配中起作用。核定位信号:核质蛋白C端有一段信号序列,可引导蛋白质入核。(引导蛋白质进入细胞核一段信号序列。受体为importin。)Ran蛋白,一类G蛋白,调整货物复合体解体或形成。核纤层蛋白综合征:由LMNA基因及其编码蛋白laminA/C异常引发一组人类遗传病。如早老症染色质:是细胞核内能被碱性染料着色物质。染色体指细胞在有丝分裂或减数分裂过程中,由染色质高度折叠、盘曲而凝缩成条状或棒状结构。组蛋白(H1,H2A,H2B,H3,H4):富含精氨酸和赖氨酸碱性蛋白,带正电荷,对维持结构和功效完整性起关键作用。其与DNA结合可抑制DNA复制和转录。非组蛋白:含天冬氨酸、谷氨酸等酸性蛋白,带负电荷,促进复制和转录。基因组::一个生物贮存在单倍染色体组中总遗传信息,称为该生物基因组。自主复制序列:是DNA复制起点,酵母基因组含200-400个ARS,大多数具备一个11bp富含AT一致序列(ARSconsensussequence,ACS);着丝粒序列:由大量串联重复序列组成,如卫星DNA,其功效是参加形成着丝粒,使细胞分裂中染色体能够准确地分离;端粒序列:不一样生物端粒序列都很相同,由长5-10bp重复单位串联而成,人重复序列为GGGTTA。核小体组蛋白:H2B、H2A、H3和H4,帮助DNA卷曲形成核小体稳定结构。没有种属及组织特异性。H1组蛋白:在组成核小体时H1起连接作用,它赋予染色质以极性。非组蛋白组成染色体骨架(chromsomalscaffold)有种属差异,及一定组织特异性。微带是染色体高级结构单位,大约106个微带沿纵轴构建成子染色体。动粒:由着丝粒结合蛋白在有丝分裂期间尤其装配起来、附着于主缢痕外侧圆盘状结构。控制微管装配和染色体移动。着丝粒指中期染色单体相互联络在一起特殊部位,着丝点指主缢痕处两个染色单体外侧与纺锤体微管连接部位。核仁组织区:是细胞核特定染色体次缢痕处,含有rRNA基因(5SRNA基因除外)一段染色体区域,与核仁形成关于,故称为核仁组织区。具备核仁组织区染色体数目依不一样细胞种类而异,人有5对染色体即13、14、15、21、22号染色体上有核仁组织区。随体是位于染色体末端、圆形或圆柱形染色体片段,经过次缢痕与染色体主要部分相连。它是识别染色体主要特征之一。有端随体和中间随体两类。端粒染色体末端特化部位。有极性。由高度重复富含鸟苷酸短序列组成,高度保守。维持染色体结构稳定。核型:核型是指染色体组在有丝分裂中期表型,是染色体数目、大小、形态特征总和。带型:用特殊染色方法,使染色体产生显著色带(暗带)和未染色明带相间带型,形成不一样染色体个性,以此作为判别单个染色体和染色体组一个伎俩。核仁是细胞核内由特定染色体上核仁组织区缔合形成结构,是细胞内合成rRNA,装配核糖体亚基部位。核基质或称核骨架:为真核细胞间期核内网络结构,指除核被膜、染色质、核纤层及核仁以外核内网架体系。主要成份:中间纤维(一)绪论细胞(cell)是生物体形态和功效活动基本单位。细胞生物学是一门从细胞整体、亚显微结构以及分子三个不一样层次上把细胞结构与功效统一起来研究,观察细胞形态结构、研究细胞生命活动基本规律学科。正常菌群(normalflora):人类生存和生长发育需要许多微生物共生关系.病原微生物(pathogen):微生物能造成人类或动植物疾病发生.条件致病菌:一些细菌在机体健康时不致病,而在人体抵抗力低下时才造成疾病.感染(infection):微生物在宿主体内生活中与宿主相互作用并造成不一样程度病理改变。细菌侵袭力:病原菌突破机体屏障进入机体并定居、繁殖并扩散毒力:细菌产生毒素损害了机体组织、器官并引发生理功效紊乱和病理性改变(二)细胞膜及其表面结构、核糖体、线粒体(mitochondrion)细胞膜特征1、细胞膜具备流动性(1)膜脂分子运动影响脂双层流动性原因:脂肪酸链长短、饱和度胆固醇含量蛋白质影响温度影响(2)膜蛋白流动性2、细胞膜不对称性(1)脂质双层不对称性:磷脂、胆固醇、糖脂分布不一样(2)膜蛋白不对称性分布:外周蛋白、内在蛋白、糖蛋白细胞表面是包围在细胞质外层一个复合结构体系和多功效体系。包含细胞外被、细胞膜、细胞质溶胶。细胞外被功效:决定血型、细胞识别和黏附、抑制增殖、保护液态镶嵌模型核糖体:细胞内一个由蛋白质与rRNA组成复合物颗粒—核糖核蛋白颗粒,能按照mRNA指令由氨基酸高效且精准地合成多肽链,是蛋白质合成场所。大亚基,小亚基原核核糖体:70S(30S,50S)真核核糖体:80S(40S,60S)*蛋白质合成:原核生物核糖体中有四种与RNA分子结合位点,其中一个是与mRNA结合位点,另三个是与tRNA结合位点。A位点(Asite),P位点(Psite),E位点(exitsite,Esite)详细步骤:1、氨基酸活化和转运(活化氨基酰tRNA)2、肽链合成开启(开启复合体)3、肽链延伸(进位、转肽、脱落、移位)4、链合成终止(终止因子)。多聚核糖体意义核酶:一些rRNA具备酶功效,能够自我剪接。将具备酶功效RNA称为核酶。线粒体(mitochondrion)是细胞内氧化磷酸化和形成ATP主要场所。含丰富心磷脂和较少胆固醇是线粒体在组成上与细胞其余膜结构显著差异。线粒体内、外膜在化学组成上主要区分是脂类和蛋白质百分比不一样,内膜上脂类与蛋白质比值低(0.3:1),外膜中比值较高(靠近1:1)。细胞呼吸:在线粒体内,在O2参加下分解各种大分子物质,产生CO2;与此同时,分解代谢所释放能量储存在ATP中,这一过程称为细胞呼吸,也称为生物氧化或细胞氧化。呼吸链(电子传递链):一系列能够可逆地接收和释放H+和e-化学物质所组成酶体系在线粒体内膜上有序地排列成相互关联链状氧化磷酸化偶联机制:化学渗透假说(内膜上呼吸链起质子泵作用)、ATP合成(结合变构机制)线粒体半自主性线粒体有独自遗传系统和独自蛋白质翻译系统,mtDNA主要编码线粒体tRNA、rRNA及一些线粒体蛋白质线粒体中大多数酶和蛋白质仍由核编码与细胞核遗传系统组成一个整体。(三)、细胞骨架、细胞核(3个英文选择)细胞骨架定义:指真核细胞中蛋白纤维交织而成立体网络体系,是细胞主要组成部分。广义:膜骨架、细胞质骨架、核纤层、核骨架、细胞外基质,组成细胞内外一体化网络结构。狭义:指细胞质骨架,位于细胞质中,由微丝、微管、中间纤维组成纤维型网络结构。弥散性、整体性、变动性共同特点:由蛋白质亚基组成线性多聚体、动态,可组装和去组装、高度保守微管(中心粒、鞭毛、纤毛、纺锤体)由13根原纤维呈纵向平行排列而成微管蛋白(tubulin):a微管蛋白、b微管蛋白(结合GTP,可水解为GDP)异二聚体异二聚体聚合首尾相连原纤维微管(13)微管相关蛋白是一类可与微管结合并与微管蛋白共同组成微管系统蛋白,主要功效是调整微管特异性并将微管连接到特异性细胞器上。踏车现象:微管蛋白、GTP浓度达成一定浓度时,在正端结合上去微管蛋白与负端释放出来速度相同时,出现现象。微管组织中心(microtubuleorganizingcenter,MTOC):微管在生理状态或试验处了解聚后重新装配发生处。功效(功效控制位点):在细胞质微管装配过程成核步骤起主要作用(提供关键,两种作用)。如中心体、有丝分裂纺锤体极、基体微管功效:1支架作用2细胞内运输3鞭毛、纤毛运动4.有丝分裂5.物质运输微丝(microvilli、contractilebundle、filopodia、ruffle、contractilering)由actin蛋白纤维组成实心纤维细丝,双股螺旋结构,细胞膜内侧影响微丝聚合与解聚特异性药品与离子:细胞松弛素cytochalasin(解聚)、鬼笔环肽phalloidin(稳定)、ATP和Ca2+、低浓度单价离子(Na+、K+等)溶液(趋向解聚)、Mg2+和高浓度Na+、K+离子溶液(趋向聚合)微丝功效组成细胞支架,维持细胞形态作为肌纤维组成成份,参加肌肉收缩参加细胞分裂参加细胞运动参加细胞内物质运输参加细胞内信号转导中间纤维:具备组织特异性肿瘤细胞转移后仍保留源细胞中间纤维。中间纤维功效1、为细胞提供机械强度支持(交联成束、成网到质膜或其余骨架成份上)2、参加细胞连接(桥粒、半桥粒)3、维持细胞核形态稳定性(核纤层)4、参加细胞运输(神经丝)细胞核真核细胞中由双层单位膜包围核物质形成多态性结构;细胞内最大、最主要细胞器;遗传信息储存、DNA复制和RNA转录场所;细胞代谢、生长、增殖和分化等生命活动调控中心。核孔复合体(nuclearporecomplex,NPC)是细胞核内外膜融合形成小孔,直径约为70nm,是细胞核与细胞质间物质交换通道(mRNPs、tRNA和核糖体亚基以及细胞质中所合成全部细胞核所需蛋白质)。核定位信号(NLS):引导蛋白质进入细胞核一段信号序列。受体为importin。核纤层(nuclearlamina)是位于核膜内表面纤维网络作用:1.支持核膜,保持核形态;2.参加核膜、染色质破解和组装;3.参加基因表示调控。染色质和染色体是同一个物质在不一样时期表现形式主要化学组成:DNA(贮存遗传信息生物大分子,结构性质稳定、数量恒定基本成份)组蛋白(H1,H2A,H2B,H3,H4)(富含精氨酸和赖氨酸碱性蛋白,带正电荷,对维持结构和功效完整性起关键作用。其与DNA结合可抑制DNA复制和转录。)非组蛋白(含天冬氨酸、谷氨酸等酸性蛋白,带负电荷,促进复制和转录。)少许RNA(新合成各类RNA前体,与DNA模板有联络。)异染色质(heterochromatin):着色深,靠近于核膜,从结构上来看,其螺旋化程度高,从功效上看,基本上不进行转录功效。常染色质(enchromatin):着色浅,位于核内部,从结构上来看,其螺旋化程度低,从功效上看,是具备转录功效染色质区域。核仁组织区(nucleolarorganizingregion,NOR)是细胞核特定染色体次缢痕处,含有rRNA基因一段染色体区域,与核仁形成关于。端粒是染色体末端特化部位。有极性。由高度重复短序列组成,高度保守。维持染色体结构稳定。核型是指染色体组在有丝分裂中期表型,是染色体数目、大小、形态特征总和。nuclearmatrix或称核骨架(nuclearskeleton),为真核细胞间期核内网络结构,指除核被膜、染色质、核纤层及核仁以外核内网架体系。(四)细胞连接与细胞外基质、细胞内膜系统细胞连接分类细胞外基质:细胞合成并分泌到细胞外完整蛋白质分子;由多个大分子成份组成高度有组织网络结构;不起结构性作用成份,都不是细胞外基质成份作用:1、连接不一样类型细胞,组成组织和器官,进而组成完整机体。2、对细胞起支持、保护和营养作用。3、参加细胞生理活动:分裂、分化、通讯、运动等。4、参加病理过程:组织修复、肿瘤转移、胶原病、老年病等。组成细胞外基质大分子:胶原\非胶原糖蛋白\氨基聚糖与蛋白聚糖\弹性蛋白细胞与细胞外基膜相互作用一、细胞外基质具备复杂、多样生物学作用1.影响细胞存活与死亡(上皮细胞和内皮细胞脱离ECM会发生凋亡)2.决定细胞形状(细胞在ECM上,会发生铺展)3.调整细胞增殖(贴壁依赖性生长:细胞在ECM粘附和铺展,细胞周期运行)4.控制细胞分化(乳腺细胞在适当ECM,才具备分化表型;肿瘤细胞转移是异常分化结果)5.影响细胞迁移(ECM控制细胞迁移速度和方向)二、在细胞表面存在各种细胞外基质成份特异性受体内膜系统(endomembranesystem)位于细胞内,在结构、功效乃至发生上有一定联络膜性结构总称。包含:内质网、高尔基复合体、溶酶体、过氧化氢体及核膜等。内质网功效(一)粗面内质网功效:1、粗面内质网与蛋白质合成和转运信号肽假说2、蛋白质加工与修饰(折叠、二硫键形成、糖基化)3、膜质合成(二)滑面内质网功效1、脂类合成2糖类代谢:糖原合成和分解3解毒作用4肌细胞中是Ca++贮存场所5、与水和电解质代谢关于6、与胆汁生成关于7、机械支持作用高尔基复合体是由一层单位膜包围而成复杂囊泡系统,电镜下由小囊泡、扁平囊和大囊泡组成高尔基复合体功效1、高尔体复合体与细胞中糖蛋白合成、加工、分泌关于⑴蛋白质糖基化⑵溶酶体酶磷酸化⑶分泌性蛋白水解2、蛋白质运输与分选3、膜转换(五)SignalTransduction(问答英文)ReceptorsDefinition:Anyproteinthatspecificallybindstoanothermoleculestomediatecell-cellsignaling,adhesion,endocytosisorothercellularprocess.Mostlycommonlydenotesaproteinlocatedintheplasmamembraneorcytoplasmthatisactivatedbybindingaspecificextracellularsignalingmolecule(ligand),therebyinitiatingacellularresponse.分膜受体、胞内受体BindingandeffectorSpecificity,Saturation,reversibility,andhighaffinityAproteinkinaseisanenzymethatmodifiesotherproteinsbychemicallyaddingphosphategroupstothem(phosphorylation).Thisusuallyresultsinafunctionalchangeofthetargetprotein(substrate)bychangingenzymeactivity,cellularlocation,orassociationwithotherproteins.第二信使:是在细胞内多由胞外信号分子转导产物,同时又能够介导下一步信号转导。如cAMP,NOG蛋白偶联受体:。。。。。。ThemajorsignalingpathwaysactivatedbyGPCRsandRTKsSignalingthroughEnzyme-linkedreceptors1receptortyrosinekinasepathway2Cytokinereceptorspathway3TGFbreceptorspathway还有EPO转导路径。(六)细胞增殖和细胞周期、细胞分化(选择英文)减数分裂前期I①细线期(leptotene)②偶线期(zygotene)联会③粗线期(pachytene)重组④双线期(diplotene)交叉端化(terminalization)⑤终变期(diakinesis)偶线期同源染色体配正确时期,这种配对称为联会(synapsis);这一时期同源染色体间形成联会复合体(synaptonemalcomplex,SC);联会复合体(SC)由两条同源染色体沿纵轴形成,外观呈梯子状;能够帮助交换(DNA重组)完成;形成于偶线期,成熟于粗线期,消失于双线期.*有丝分裂与减数分裂比较减数分裂前期有同源染色体配对(联会);减数分裂遗传物质交换(非姐妹染色单体片段交换);减数分裂中期后染色体独立分离,而有丝分裂则着丝点裂开后均衡分向两极;减数分裂完成后染色体数减半;分裂中期着丝点在赤道板排列有差异:减数分裂中同源染色体着丝点分别排列于赤道板两侧,而有丝分裂时则整齐地排列在赤道板上细胞周期由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历过程。分期:G1期(gap1)S期(synthesisphase)G2期(gap2)M期细胞周期室-cellcyclecompartment在DNA含量改变原因及RNA及染色质凝集程度等不一样条件下,处于G1、S、G2期细胞均能够分别处于增殖活性、静止或分化等状态;比如RNA及触发蛋白含量可决定G1期细胞是否能由G1A态进入G1B态(增殖活性状态),即是否能继续进行增殖细胞周期调控---cyclins-CDKs-CKIs系统细胞周期调控研究方法免疫组化法:特异性抗体检测细胞周期调控相关蛋白表示显微注射法:将需要研究物质注入周期特定阶段细胞,了解上述物质在周期调控中作用细胞融合:了解与细胞周期某一特定活动相关调整原因,在时间及亚细胞水平定位当DNA发生损伤,复制不完全或纺锤体形成不正常,细胞将不能经过检验点,而使周期被阻断;检验点(checkpoint)1.G1/S检验点:在哺乳动物中称R点(restrictionpoint),控制细胞由静止状态G1进入DNA合成期,相关事件包含:DNA是否损伤?细胞外环境是否适宜?细胞体积是否足够大?2.S期检验点:DNA复制是否完成?3.G2/M检验点:是决定细胞一分为二控制点,相关事件包含:DNA是否损伤?细胞体积是否足够大?4.中-后期检验点(纺锤体组装检验点):任何一个着丝点没有正确连接到纺锤体上,都会抑制后期促进因子(APC)活性,引发细胞周期中止。细胞增殖(cellproliferation)细胞经过生长和分裂使细胞数目增加,使子细胞取得和母细胞相同遗传特征过程.是细胞生命活动基本特征之一。细胞分化(celldifferentiation);在个体发育中,细胞后代在形态、结构和功效上发生稳定性差异过程;这种稳定性改变过程是不可逆转,是一个渐变、持久、稳定改变过程。特点:分化状态稳定性;定向性;条件可逆性;普遍性细胞决定(celldetermination);(定向性表现)1.在许多情况下,一个细胞分化前,就有了一个预先确保细胞怎样分化时期,这个时期确定了细胞分化方向,这一阶段统称细胞决定2.也即细胞从分化命运确定到出现特定形态过程.去分化(条件可逆性)在特定条件下,分化细胞基因活动模式能发生可逆改变,又回到未分化状态,称去分化转决定:果蝇成虫盘细胞经过移植之后未按已决定命运分化成为一定器官而分化为成体其余器官现象。转决定为去分化一个方式。(干细胞普遍性)特定条件下,能够发生横向分化(trans-differentiation)-一个组织细胞可分化为其余组织功效细胞(造血干细胞--肝细胞)受精四个过程精子获能(capacitation)精子头外表糖蛋白被降解,受体暴露,顶体酶原转化为有活性顶体酶顶体反应(acrosomereaction)精子经过头前部(顶体区)质膜表面ZP结合蛋白(配体-卵结合蛋白)与卵母细胞透明带上精子受体-ZP发生识别,完成结合过程,诱发顶体反应;即顶体以外排方式释放出水解酶,将卵子透明带和卵黄膜溶解,形成精子穿过通道;过程:1、顶体破开,释放水解酶;2、精子前端与受体结合;3、入卵皮层反应(corticalreaction)去极化使精子受体失活;卵细胞膜下皮层颗粒外排,引发透明带“硬化”,形成受精膜。原核形成和融合细胞分化实质是细胞基因差异表示(differentialexpression)细胞分化机制自发机制:胚胎发育中早期细胞分离由受精卵中细胞质控制诱导机制:细胞之间经过信号系统协调分裂、分化和细胞行为主要机制一、细胞不对称分裂(高度异质性)二、诱导机制(一部分细胞诱导其它细胞向特定方向分化现象)级联信号、梯度信号、拮抗信号、组合信号、侧向信号三、细胞数量控制(受外界信号调整、细胞凋亡)四、细胞行为细胞行为分类:(9)定向分裂(directedmitosis)、差异生长(differentialgrowth)、细胞凋亡(apoptosis)、细胞迁移(migration)、区分粘附(differentialadhesion)、细胞收缩(contraction)、基质膨胀(Matrixswelling)、细胞连接(gapjunction)、细胞融合(fusion)五、细胞结构改变细胞分化与细胞增殖关系1、增殖信号和分化信号同时作用于干细胞,表现为边分化边增殖(反之亦然);2、增殖和分化分别独立进行,一部分干细胞只增殖不分化,另一部分同类干细胞则进入终末分化3、细胞分化与分裂平行进行:如许多干细胞都进行不对称分裂,产生子细胞一个保持原有干细胞特征,一个则进入终末分化。细胞分化潜能---全能性(totipotency)在一定条件下,细胞表示其全部遗传信息,并进而发育成完整充分分化机体能力。多能性(pluripotency)当胚胎深入发育,有细胞具备分化出多个组织潜能,但却失去了发育成完整个体能力单能性(monopotency)在成体中,有干细胞只能分化出一个细胞(七)干细胞和组织工程、细胞工程干细胞是机体内一类能够进行自我更新和分化细胞统称。1、具备长久分裂能力和自我更新能力,2、不具备特定形态和功效,3、在一定条件下能分化成特定形态和功效成熟细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞。干细胞增殖对称分裂(增殖分裂、分化分裂)、不对称分裂(更新分裂)细胞工程是指应用当代细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学理论与方法,按照人们需要和设计,在细胞水平上遗传操作,重组细胞结构和内含物,以改变生物结构和功效。即经过细胞融合、核质移植、染色体或基因移植以及组织和细胞培养等方法,快速繁殖和培养出人们所需要新物种生物工程技术。包含基因工程、染色体工程、染色体组工程、细胞融合工程、细胞拆合工程、细胞培养基因工程(DNA重组技术或分子克隆)基因操作基本过程包括过程可用分/合成、切、连、转、选、鉴六个字表示*体外DNA重组技术得主要步骤:获取目标基因(从生物基因组中分离、逆转录合成、人工合成、从基因组文库及cDNA文库中筛选取得、PCR扩增)将目标基因进行必要得改造选择和修饰克隆载体将目标基因与载体连接取得含有目标基因得重组载体重组载体导入对应宿主细胞(在原核细胞导入—转化(transformation)在真核细胞导入—转染(transfection))筛选出含有重组DNA得细胞(遗传学表型如抗药性、核苷酸序列分析)表示产物后续处理(分离蛋白质)2.用于基因工程载体:指能够携带目标基因进入宿主细胞工具。特点:具备自我复制能力和较多拷贝数,易于宿主细胞染色体DNA分开,分子相对较小,具备足够接纳目标基因容量,有较多单一限制性核酸内切酶位点,有筛选标识,具备较高遗传稳定性。种类:质粒、噬菌体、噬菌粒、粘粒、病毒和人工染色体基因工程惯用酶:限制性核酸内切酶、DNA连接酶、DNA聚合酶Ⅰ、反转录酶基因工程有两个基本特点∶分子水平上操作和细胞水平上表示。(八)cellsenescenceandcelldeath细胞衰老又称老化,指细胞伴随年纪增加,机能和结构发生退行性改变,趋向死亡不可逆现象。Necrosis细胞突发性病理性死亡或生理环境急剧改变(如高热、缺氧等)所致细胞死亡。Programmedcelldeath(PCD)是多细胞有机体为调控机体发育、维护内环境稳定,由基因编码程序细胞主动死亡过程。Apoptosis是细胞在生理和病理条件下,由本身基因调控下细胞自杀活动。apoptoticbody:在细胞凋亡后期,细胞质膜反折包围核染色质、细胞器而形成泡状或芽状突起。一、衰老细胞形态结构和生化改变特征(一)形态学改变主要表现:细胞皱缩;膜通透性减小、脆性增加;核膜内折;细胞器数量降低,尤其是线粒体;胞内出现脂褐素等异常物质沉积(二)分子水平改变DNA:DNA氧化、断裂、缺失和交联,甲基化程度降低。RNA:mRNA和tRNA含量降低Protein:含成下降,稳定性、抗原性,可消化性下降酶分子:酶失活脂类:不饱和脂肪酸被氧化,引发膜脂之间或与脂蛋白之间交联,膜流动性降低。二、细胞衰老学说(一)遗传论学派认为衰老是遗传上程序化过程,其推进力和决定原因是遗传基因组复制性衰老replicativesenescence细胞增殖能力和寿命是有限决定细胞衰老原
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