BPG层析柱标准装柱流程规范

word文档精品文档分享BPG300层析柱标准装柱流程标准SOP-BPG-001操作标准目的：为了使BPG300层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好的柱效，故建立此操作标准。X围：配合?KTAprocess系统进展有效的蛋白质纯化操作。责任人：层析工序操作人员标准操作程序：1根本术语概念填料因子〔PackingFactor,PF〕对填料进展沉降压缩得到的调料高度和最后装柱完成时填料高度〔柱高〕的比值，GEHC生产的各种常见填料的PF参见?GEHCAxiChrom300-1000columnsUserManual28-9562-89EditionAA线性流速〔linearflowratecm/h表示；体积流速〔volumeflowrate单位时间内液体流经的空间容积，常用ml/min表示；1word文档精品文档分享BPG300层析柱标准装柱流程标准SOP-BPG-001换算：2准备工作2.1检查层析柱的完整性，所带配件，是否水平〔用水平仪矫正〕，是否清洁〔如有污染应进展清洗〕。2.2确定所用填料及其特性、浓度等以DEAESepharoseFastFlow填料为例，其填料因子〔PF〕为1.15，新填料〔slurry〕浓度为75%〔保存于20%。2.3确定放大后的工艺参数以XX生化制药股份的放大工艺为例，中试工艺参数：柱高h=10cm；体积流速v1=3ml/min；柱内径d=1.6cm.即，线性流速v2=v1/s柱=3/(3.140.82)cm/min=1.5cm/min；样品与填料接触时间t=h/v2=10/1.5min=6.67min；在工艺的线性放大中、v2和t均不变，那么可保证样品出峰的位置〔洗脱时间〕和形状不变。使用BPG300层析柱进展放大的工艺参数：装柱体积V柱=S柱h=3.141.521L=7L；装柱需要slurry体积Vslurry=V柱×slurry以DEAESepharoseFastFlow为填料，那么，Vslurry×；装入柱中的slurry高度Lslurry=Vslurry/S柱=10.73/(3.14.52)dm=1.52dm=15.2cm.3管路安装3.1层析柱管道和配件安装3.1.1卸下柱子顶部和底部的盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或20%乙醇充分浸润柱内壁和柱头O型圈；3.1.2用扳手对称卸下支持杆连接到法兰的螺丝，并通过旋转高度调节手柄将柱头旋至最高处，在柱头顶部依次安装压力表和四路二通阀，在柱底安装四路二2word文档精品文档分享BPG300层析柱标准装柱流程标准SOP-BPG-001通阀；3.1.3在顶部四路二通阀上横向连接一根细管，另一端连至?KTAprocess上端连接口COLUMNTOP，同时从柱底四路二通阀横向接出一根细管至?KTAprocess的下端连接口COLUMNBOTTOM。图1、BPG300层析柱安装示意图3.2层析柱下端筛网排气泡3.2.1连接两根足够长的细管到?KTA进样泵的A1和B1进口，两管另一端均放入纯水中；3.2.2从A1泵入纯水：翻开UNICORN软件，在systemcontrol窗口点击manual→→InletA，选择inletA1，insert；InletB，选择，；3word文档精品文档分享BPG300层析柱标准装柱流程标准SOP-BPG-001Column，选择upflow，；Pump→Flow，设定流速60L/h，点击execute运行程序充水至BPG柱中2-3cm左右，pause，去除下端筛网中的空气，用注射器吸出筛网中残留的气泡。4装填料4.1准备填料所用填料为DEAESepharoseFastFlow，装置的是保存于20%乙醇中的新slurry；4.2卸下柱头，用搅拌棍引流参加混匀的slurry至15.2cm处，再参加纯水至40cm左右，充分搅拌混匀，同时防止挤压筛网和柱壁，静置使填料界面至少低于；4.3在systemcontrol窗口点击manual→→InletA，选择inletA1，；InletB，选择closed，；Column，选择downflow，；Pump→Flow，设定流速60L/h，点击execute运行程序将柱头上端筛网充满水以除去气泡，再装上柱头，用密封调节器固定柱头，拧紧螺丝；4.4在systemcontrol窗口点击manual→Pump→Flow，设定流速为42L/h〔14cm左右，将密封调节器旋至全松，将柱头快速调至距离填料3-4cm处，将密封调节器旋至半松，将柱头快速调至滤网距离填料，旋严密封调节器，再设定高流速〔如150L/h继续压缩填料，最后再调节柱头至10cm。整个过程一直有流速，泵速不能停。5柱效测定4word文档精品文档分享BPG300层析柱标准装柱流程标准SOP-BPG-001图2、柱效测定示意图5.1平衡将A1接口细管放入0.4MNaCl溶液中，将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在systemcontrol窗口点击manual→valves→InletA，选择inletA1，insert；InletB，选择closed，；Column，选择downflow，insert；Pump→Flow，再设定高流速〔如150L/h运行，排气泡，再将阀调至管路与柱头相连状态，平衡3-5个柱体积至电导曲线稳定，点击END；5.2上样5.2.1将B1接口细管放入2MNaCl溶液，柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在systemcontrol窗口点击→valves→InletA，选择，；InletB，选择InletB1，insert；Column，选择downflow，；Pump→Flow，设定高流速〔〕点击execute运行，排气泡，pause；5.2.2在systemcontrol窗口点击manual→→End_Timer，选择Acc.Volumn,Timeout设上样量为70mL〔1%Pump→Flow，设定上样流速60L/h，点击的同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连，完成上样；5.3洗脱5word文档精品文档分享BPG300层析柱标准装柱流程标准SOP-BPG-0015.3.1将柱顶端四路二通阀调至管路与大气相连状态，在systemcontrol窗口点击manual→→InletA，选择inletA1，insert；InletB，选择closed，；Column，选择downflow，insert；Pump→Flow，设定高流速〔150L/h〕点击execute运行，排气泡，同时将管路充满0.4MNaCl溶液，调流速至21L/h〔5.3.2待流速稳定后，在systemcontrol窗口点击→valves→InjectionMark，，点击execute的同时将柱顶端四路二通阀调至管路与柱头相连，开场洗脱，在一个柱体积左右，电导检测下将产生目的峰。5.4测柱效在Evaluation窗口中，选择实验保存的结果，在结果图中点击鼠标右键，选择Properties，点击，并选中Cond_102，点击OK。回到Evaluation窗口，选择积分按钮，在弹出窗口中，选择Cond_102，peakwindow中调整积分的X围，并在Reject中，填Peakmustbeoneof1；确定后，在积分结果窗口，点击右键，选择Properties，在peaktable选项中，勾选PlateHeight〔HETP〕和Asymmetry。确定后即可计算得到计算理论塔板高度HETP和对称因子As。6word文档精品文档分享BPG300层析柱标准装柱流程标准SOP-BPG-0011WhencalculatingtheamountofmediatobepackedusetheCompressionFactor1.1insteadoft