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文档简介
关于溶菌酶的溶菌作用第1页,课件共13页,创作于2023年2月溶菌酶的溶菌作用
实验原理
溶菌酶(lysozyme)又称胞壁质酶(muramidase)或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramideglycanohydrlase),是正常体液与分泌液中所含的一种小分子碱性蛋白质。它能水解革兰阳性菌细胞壁中的肽聚糖成分(作用于β-1,4糖苷键),使细胞壁崩解。溶菌酶还可与带负电荷的病毒蛋白直接结合,与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐,使病毒失活。因此,该酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。是非特异性免疫中一种重要的体液物质。
第2页,课件共13页,创作于2023年2月实验材料与器材
1、人的唾液(含有溶菌酶)、溶菌酶标准品、生理盐水。
2、细球菌(M.Lysodeikticus)。
3、1.0%盐水琼脂管(7-8mL/管)、灭菌的1mL吸管、毛细吸管、打孔器、平皿、竹签和橡皮乳头等。第3页,课件共13页,创作于2023年2月
注:①唾液②生理盐水(阴性对照)
③溶菌酶(阳性对照)
实验步骤:1、取灭菌的小平皿一个,用灭菌1mL的吸管吸取0.5mL(9亿/mL)细球菌活菌菌液注入平皿内。2、取已溶化并冷却至45℃-55℃的生理盐水琼脂管一支,倾注于上述平皿内,迅速水平混匀,平放待凝。3、用打孔器(孔径为6mm)打孔,用竹签挑出孔中琼脂。4、先用清水漱口,略待片刻将唾液吐于灭菌平皿内,用毛细吸管吸出(注意不要有气泡,不要溢出),并分别加入生理盐水和溶菌酶标准品。置37℃,18h后观察结果。31第4页,课件共13页,创作于2023年2月预测实验结果阳性结果:加在唾液空周围出现一圈很明显的溶菌环。注意事项
在实验中应该注意无菌操作,否则杂菌生长会影响溶菌环的观察第5页,课件共13页,创作于2023年2月小吞噬实验实验原理
机体内具有吞噬功能的细胞可分为两大类,即小吞噬细胞和大吞噬细胞。小吞噬细胞一般指血液中的中性粒细胞。中性粒细胞(neutrophilicgranulocyte)在瑞氏染色血涂片中,胞质呈无色或极浅的淡红色,有许多弥散分布的细小的(0.2~0.4微米)浅红或浅紫色的特有颗粒。细胞核呈杆状或2~5分叶状,叶与叶间有细丝相连。其颗粒表面有一层膜包裹,颗粒中含髓过氧化物酶、酸性磷酸酶、吞噬素、溶菌酶、β葡糖苷酸酶、碱性磷酸酶等。中性粒细胞具趋化作用、吞噬作用和杀菌作用。第6页,课件共13页,创作于2023年2月实验材料与器材:1、表面葡萄球菌菌液(9亿/mL)。2、3.8%枸櫞酸钠或肝素(25U/mL)。3、毛细吸管、凹玻片、载玻片、牙签、甲醇、瑞氏-姬娒萨染料、PH6.4PB、酒精、棉球、采血针等。第7页,课件共13页,创作于2023年2月实验步骤:
1、取厚凹玻片一张,在凹孔中滴加一滴(0.4mL)3.8%枸櫞酸钠或肝素(25U/mL)。
2、酒精棉球消毒手指后,用采血针从消毒部位采取2大滴(约0.2mL)加入凹孔中混匀。
3、加表皮葡萄球菌菌液1滴(0.02-0.04mL),然后用牙签轻轻搅匀。第8页,课件共13页,创作于2023年2月4、将玻片放湿盒内,置37℃孵箱中40-50min。5、作用完毕,取出1滴制成薄片,自然干燥。6、置瑞氏液1min,置PH6.4PB中3min,置瑞氏-姬娒萨染料染5-10min,蒸馏水洗,待干镜检。第9页,课件共13页,创作于2023年2月预测实验结果
胞浆呈淡蓝色或淡红色,细菌呈深蓝色或紫色,红细胞呈褐色,细胞核呈紫红色。注意事项
1、个体差异、年龄、健康状况的不同,其吞噬能力亦不同。
2、涂血片时不宜太厚,否则不宜观察。结果第10页,课件共13页,创作于2023年2月谢谢!第11页,课件共13页,创作于2023年2月
胞质呈无色或极浅的淡红色,有许多弥散分布的细小的(0.2~0.4微米)
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