2018年四川省临检中心临床微生物检验培训班 15-刘小平-皮肤软组织培养

内容前言3.13.1皮肤软组织、伤口感染培养检验前Ι

概要Ⅱ

样本采集、样本运送、处置Ш

材料培养基匀浆器检验后Ⅵ

报告结果Ⅶ

解释Ⅷ

局限伤口/脓和软组织感染培养检验中Ⅳ

质控Ⅴ

培养程序安全操作接种需氧孵育条件标本涂片革兰染色的重要性培养处置仅供个刘

小

平北

京

大

学

深

圳

医

院人学习皮肤与软组织感染皮肤与软组织感染感染种类

常见病原菌首选抗菌药物备选抗菌药物感染种类

常见病原菌首选抗菌药物备选抗菌药物毛囊炎金黄色葡萄球菌，

无需全身用药；局部念珠菌，蠕形螨属

治疗，加强卫生急性淋巴结

Ａ、Ｂ群链球菌，金黄色青霉素，大环内酯类怀疑金葡菌感染可用氯唑西林或头孢一代炎葡萄球菌疖，痈，

金黄色葡萄球菌，

苯唑西林，氯唑西林

大环内酯类，克林霉化脓性指

表皮葡萄球菌头炎，头孢一代素。重症感染（伴脓毒症）可用万古霉素急性淋巴管

A群链球菌炎青霉素化脓性汗腺

金黄色葡萄球菌，肠杆菌金黄色葡萄球菌，肠道杆菌科细菌，假单胞菌，厌氧菌（类杆菌）复发性疖

金黄色葡萄球菌病苯唑西林，氯唑西林

鼻孔涂抹2%莫匹罗星软膏有助于清除定植细菌，减少复发炎科细菌，假单胞菌，厌氧菌（类杆菌），头孢一代坏死性筋膜

常有多种细菌：Ａ、Ｃ、青霉素或广谱青霉素＋氨基糖苷类＋甲硝唑（或克林霉素）重症可用碳青霉烯类＋甲硝唑炎Ｇ群链球菌，肠道杆菌（大肠埃希菌，肠杆菌），厌氧菌（梭状芽胞杆菌，消化链球菌）蜂窝织炎

金黄色葡萄球菌，

青霉素，苯唑西林。重

对青霉素过敏者：轻症用症用氯唑西林，阿莫西

大环内酯类，克林霉素；A族链球菌林/克拉维酸或头孢一

重症用万古霉素代气性坏疽产气荚膜梭状芽胞杆菌，其他梭状芽胞杆菌静滴克林霉素＋大剂量青霉素头孢曲松，大环内酯类丹毒A族（化脓性）乙型

青霉素，头孢一代，大

左氧氟沙星，加替沙星，（溶血性）链球菌

环内酯类，克林霉素，

莫西沙星新生儿皮下

金黄色葡萄球菌坏疽苯唑西林，氯唑西林头孢一代皮肤与软组织感染皮肤与软组织感染感染种类皮肤炭疽常见病原菌炭疽杆菌首选抗菌药物口服环丙沙星备选抗菌药物感染种类常见病原菌首选抗菌药物备选抗菌药物左氧氟沙星，加替沙星，莫西沙星犬咬伤

出血败血性巴斯德菌阿莫西林-克拉维酸

克林霉素＋氟喹诺酮（成人）金黄色葡萄球菌类杆菌梭状芽胞杆菌糖尿病足初期：金黄色葡萄球菌，

轻症初期：口服头孢一代或克林肠球菌

霉素慢性迁延期：多种细菌：

慢性：氨苄-舒巴坦或替卡-克拉G+球菌，G-杆菌（大肠埃

维酸或哌拉西林-三唑巴坦或头孢

丙沙星或左氧氟沙希菌等），厌氧菌（类杆

哌酮-舒巴坦星克林霉素＋头孢三代（头孢曲松，头孢噻肟），或用环克林霉素＋复方新诺明

（小儿）猫咬伤

出血败血性巴斯德菌金黄色葡萄球菌阿莫西林-克拉维酸

头孢呋辛酯或多西环素菌等）重症（威胁肢体或生命）：碳青霉烯类＋万古霉素人咬伤

草绿色链球菌表皮葡萄球菌预防：口服阿莫西

克林霉素＋氟喹诺林-克拉维酸

酮（成人）进展性细菌

多种细菌：厌氧链球菌，

广谱抗生素协同性坏疽

其他厌氧菌，金黄色葡萄

反复作坏死组织细菌培养，指导金黄色葡萄球菌类杆菌棒状杆菌消化链球菌侵蚀艾肯菌球菌，G-杆菌等针对性用药治疗：替卡-克拉维

克林霉素＋复方新酸，或头孢西丁,或

诺明

（小儿）哌拉-三唑巴坦，或非结核分支

龟分支杆菌，脓肿分支杆

克拉霉素，阿奇霉素，左氧氟沙杆菌感染菌，偶发分支杆菌等星，阿米卡星，妥布霉素，利福布汀（rifabutin）头孢哌酮-舒巴坦主张联合用药，疗程常需１２年皮肤和伤口伤口的分类（按受伤原因

损伤

颜色

时间分）伤口是指皮肤组织的完整性受到破坏，并常伴有机体物质的缺失，同时皮肤的正常功能受损。2.按皮层损伤的深度

浅伤

指不累及皮肤全层，有残存毛囊1.

按原因

机械性或创伤性伤口

热损伤伤口

半层损伤

全层损伤真皮层蔓延到皮下脂肪，深及筋膜和肌肉，甚至侵犯肌腱和骨骼等

化学性损伤伤口

溃疡性伤口

放射性损伤伤口3.按颜色分红

黄

黑

混合4.按时间急性慢性手术

创伤

咬伤褥疮

足腿

部溃疡外科手术部位感染（

Surgical

Site

Infection，SSI）SSI

感染类型切口浅部组织的SSI手术部位感染包括手术切口、手术入径以及手术脏器的感染，是位居第2的医院感染。

大约2%-5%非腹部清洁手术(如:胸外手术、整形外手术等)

20%腹部手术患者会发生手术部位感染。切口深部组织的SSI器官/腔隙SSI发生手术部位感染者较未发生感染的患者留住重症监护病房时间增加60%,需再次住院治疗的可能性增加5倍，死亡的危险性增加2倍，治疗费用亦显著增加－抗感染药物在外科领域的预防性应用指南(美国)切口类型及SSI发生的危险度不同种类手术SSI发生率手术类别手术数量109364056264SSI数45631829感染率%4.2切口类型标准SSI发生的危险度1.5%-4.2%冠脉搭桥术血管手术Ⅰ类清洁手术未进入感染炎症区，未进入呼吸、消化及泌尿生殖道，以及闭合性创伤手术符合上述条件者。7.8胃手术11.012.52.4Ⅱ类清洁-污染手术进入呼吸、消化或泌尿生殖道但无明显污染。例如无感染且顺利完成的胆道、胃肠道、阴道、口咽部手术。<10%肝胆胰脏手术胆囊切除术小肠手术120158226466610.29.7Ⅲ类污染新鲜开放性创伤手术；手术进入急性感染炎症但未化脓区域；胃肠道内容物有明显溢出污染；术中无菌技术有明显污染(如开胸心脏按压）者。10%-20%大肠手术711691172123190830259子宫切除术骨折开放复位术截肢术71272978128426781133522.44.114.83.1Ⅳ类污秽-感染有失活组织的陈旧创伤手术；已有临床感染或脏器穿孔的手术。20%-40%人工髋关节置换术人工膝关节置换术1.9美国Altemier

4类区分法神经外科HAISSI对预后的影响作者杨维年限例次

CNS/切口

呼吸道

泌尿道

血液

其他地区广东广东浙江江苏浙江天津河北福建广西吉林湖南北京SSI7.8%29%非SSI1997

19294837435170421461513341821683231519112陈进华

1998

104

3110病死率3.5%18%6d蒋小杰

1999

42龚秋菊

2000

47褚正民

2000

138安丽娜

2001

55赵桂荣

2002

35林国文

2002

146张小容

2003

851723621152222入住ICU住院日92717311d69625122412453医疗费用再次住院700041%40007142413228郭宏川

2003

128

30王利军

2003

107

24天坛2004

186415.652.8

15.4

2.313.9SSI主要病原菌II标本采集、转运和处理程序概述正确消毒后进行标本采集对标本进行标记和识别运送标本验收真菌？分支杆菌？不接收注射器运送的样本厌氧菌？…A.概述Ⅱ标本采集原则5.容器标本采集原则.概述a.小块组织用厌氧转运瓶送检。b.大块组织放入灭菌杯内，用不含抑菌剂的盐水浸湿网垫，保持湿度。1.对于存在临床感染征象或病情恶化或长期难以愈合的伤口，应在开始抗生素治疗前采集标本。c.伤口和脓穿刺液2.清洁皮肤或粘膜表面。将穿刺液放入不含抗凝剂的无菌采血管内厌氧培养的样本放在含预还原厌氧灭菌培养基的灭菌管内因锐器及生物风险，注射器和针头不接收。盖上螺口帽的注射器同样不接收。转运泄露可能会致操作污染d.

可将针吸活检样本放入带卡盖的微量离心管肉汤中，这样不仅易于观察标本情况，而且方便在实验室用无菌玻璃棒捣碎标本。a.对于闭合性伤口和穿刺液，先皮肤消毒b.开放性外伤在采集标本前应彻底清创并用灭菌盐水清洗。3.采集感染的活的组织，而非浅表组织碎片。4.用穿刺或活检方法采集标本，尽量避免用拭子采集。穿刺或活检如未采集到标本，拭子可采集深部损伤的渗出物e.常规拭子培养应用Stuart或Amies转运培养基送检。保湿并中和拭子的抑菌活性。

CultureSwab

EZ

II和esSwab最适合一个标本既做需氧又做厌氧培养标本采集。Stuart

淋球菌的采取和转运

Amies致病菌的转运和保存1.伤口拭子B.标本采集2.脓肿B标本采集a.浅表伤口须用拭子采集标本培养,取材伤口仅限于慢性和未愈合临床感染注

未外排的闭合性脓肿应穿刺送检脓液a.用注射器穿刺采集感染性标本。b.浅表或深部伤口包括咬伤培养限于化脓、慢性引流或不愈合b.初次穿刺失败时，可经皮下注射不含抑菌剂的灭菌盐水，再行穿刺。c.在近伤口有脓或炎症组织的部位轻轻滚动拭子5次c.

将穿刺液放入灭菌容器或不含抗凝剂的无菌采血管中送检。厌氧培养标本需放在含有PRAS培养基的灭菌管送检d.所有类型深部感染和咬伤感染表明需做需氧和厌氧培养注

因锐器和风险，注射器和针头不接收。注射器用Leur-Lok盖上同样不接收，可致转运泄露和操作污染注

烧伤时微生物分布不均，需不同区域多点采样，血培养可检测患者状态d.接收术中和引流过程采集的活检样本脓肿包膜和组织*预还原无氧灭菌培养基（pre-reduced

anaerobically

sterilized

medium）3.引流B标本采集4.组织和活检标本标本采集a.组织活检应采集感染区域和邻近组织。采集足量组织（采集3-4mm的活检标本）。引流管不送培养。腹腔、胸腔和T胆管引流物常送检。送检引流液不能从收集袋采集。b.厌氧培养标本需放在含有PRAS培养基的灭菌管送检。a.消毒引流管表面穿刺引流液采集引流区域新鲜液体。b.灭菌、防渗漏容器送检c.引流液不接种血培养瓶。引流液分离菌需要确认与革兰染色的相关性当组织或穿刺液难以获得时，可用拭子采集标本。a.对于具有临床感染征象的伤口或慢性、难以愈合的伤口，尽量不用拭子采集标本。b.用不含抑菌剂的无菌盐水彻底冲洗和清洁患处，移除表面碎片。如果伤口相对干燥，采集前将两个棉拭子用盐水蘸湿。c.轻柔地在伤口表面旋转拭子五次，重点采集脓液或炎性组织。d.如果需要做需氧和厌氧培养，采集标本后立即将拭子放入厌氧转运管中或CultureSwab

EZ

II送检。若只做

需氧培养，则将拭子放入需氧转运管中或CultureSwab

EZ

II中送检。注：在烧伤伤口中微生物并非均匀分布，采集标本时应多点取材。应做血培养以监测患者病情。5.针吸活检

fine

needle

aspirationB标本采集C.标本标记待用Ⅱ标本采集原则a.将针头刺入组织，如可以，变换方向采集标本。标记内容应包括①患者一般资料，②标本种类（深部组织、浅表组织、褥疮、导管部位、疖子、脓肿、蜂窝组织炎、穿刺液、脓液、引流液、手术切开部位等）

，③

解剖部位（臂、腿等

）、

④

采集日期和时间，

⑤

临床诊断（感染源、临床表现），

⑥

抗生素使用情况，

⑦

选择检验项目（包括厌氧培养）b.如果穿刺量大，移去针头，用Leur-Lok盖上注射器后送检。c.如果穿刺量少，上下抽提注射器推送杆，将穿刺液完全注入盛有肉汤的带扣塞的无菌微量离心管中。注

为避免需时一周以上的真菌培养的过度应用，实验室可缩短真菌培养的时间（2-4天）。该方法对于院内感染、异物感染、术后感染的诊断不仅有效，而且效价比高，因为此类感染的病原体多为细菌、念珠菌或曲霉菌。念珠菌或曲霉菌在普通细菌培养基上一周内即可生长，而真菌选择性培养基一般只用于混合性感染。长时间的真菌培养一般用于慢性感染的诊断，由其是暗色和双相真菌的感染，而且此方法仅用于除拭子外的送检标本。注：使用安全持针装置，不要将针头送检至实验室D.标本运送保存E.拒收标准Ⅱ标本采集原则Ⅱ标本采集原则送检标本的容器内含有福尔马林。1.

穿刺物和组织采集后应30分钟内送至实验室2.

保持组织湿度以保留细菌活性。当标本，尤其是拭子采集的标本，经革兰染色后见到大量鳞状上皮细胞时应拒收。若存在感染征象，需要重新采集标本转运前或转运中，切勿冷藏或孵育标本。如果延迟送检，可放置室温，因为低温可加速氧的溶解，造成厌氧菌死亡。临床不能通过送检标本来推测是否存在感染。若未采用培养拭子EZII系统或不含运送培养基，转运超过1小时的拭子标本拒收。当标本量过少，临床又要求做多项检查时（抗酸染色，真菌、细菌和病毒检测），应与临床医师联系，确认最为重要的项目进行检测，其它检查项目则注明标本量不足拒收。质量

运送时间A.培养基B.

组织匀浆器手术刀和皮氏培养皿Ⅲ材料Ⅲ材料血平板巧克力平板研钵和杵。疑有厌氧菌感染时，需在厌氧箱中使用，因为研磨时产生气体MAC或EMB(Eosin

Methylene

Blue)PEA（苯乙醇琼脂培养基）或CNA

（G+菌选择培养基）T-M或类似选择性培养基拍打式匀浆装置厌氧培养基特殊培养基，用于某种苛养菌或少见菌的复苏肉汤商用一次性使用塑料研磨装置，比玻璃手持研磨器安全a.添加或不添加酵母浸出液、含0.1%琼脂的厌氧BHI或TSB。b.专性厌氧菌肉汤。c.布鲁氏肉汤。d.THI0（硫乙醇酸盐培养基）：标本中需氧菌或酵母菌量少时尽量不使用。但对厌氧菌复苏非常有效。C.革兰染色试剂B.

组织匀浆器Ⅲ材料Ⅲ材料安全柜内玻璃塑料研磨装置Ⅳ

质量控制Ⅴ

操作程序A.根据现行NCCLS

M22文件要求，确保培养基在有效期内并符合各项质控参数。详见操作程序14.2和3.3.1，尤其是自制培养基时。A.所有微生物标本，应在生物安全柜或厌氧箱中进行标本接种。B.接种B.对每批次巧克力平板（参见3.3.1）和淋病奈瑟菌选择培养基（参见3.9.3）选择合适的菌株进行质控。C.根据现行NCCLS

M22文件和本书第14章节，进行其他使用者质控。培养基的性能验证1.组织a.挑取感染区域和边缘部分活检组织培养B.接种B.接种c.如果组织易于分离（如肺、肾、脑组织），用无菌刀片、棒或剪刀将其分成多个小块，或用无菌棒轻柔地将其撕开。（保留一块切下未撕碎的组织用于涂片）。将每一块组织分别接种于一块培养基中。b.首先做厌氧培养，在厌氧箱中进行。如果组织块足够大，将组织块放在培养皿或标本杯中，用小刀将其一分为二，随后从其中一块标本上切取一小块，并迅速将切面放置在厌氧平板的接种区，然后将组织放入肉汤培养基中，最好划线接种厌氧平板。d.如果组织较坚硬（如骨头、皮肤）用无菌手术刀仔细地将骨头切成小块。或者，从骨头活检分出的活性组织和超声碎骨放在一个平板或者，将部分组织放入研磨器中，加入0.5ml肉汤培养基进行研磨。如果组织块较小，将组织块放入THIO或其它还原肉汤中研磨使之均质化。即刻孵育。均质化后，用无菌吸管吸取均质化标本接种平板，将余下组织放入肉汤培养基中。

注：不时检查是否有任何软组织存留，若有，用无菌手术刀仔细切除，单独处理。B.接种B.接种e.用拍打式匀浆机对难以撕开的组织进行研磨f.革兰染色①②③④⑤将一部分标本放入无菌袋中。接种完成后常规涂片，接种前吸头或拭子勿触碰玻片。将标本袋夹在搅拌器的门和踏板式桨叶中间，袋子上缘高于门上缘4cm。将把手前拉关紧门，开机1-5分钟。关机，抓紧袋子，上提把手开门，取下袋子。用无菌吸管从袋中取出标本，接种培养基切下新鲜组织，将其在玻片上涂抹制成涂片。如组织过硬不能粘附于玻片上，可将组织块放于两张玻片之间，压紧，然后再将两张玻片拉开。g.如果组织够大，可将一块完整的标本冷藏于冰箱中至7天，如需更长时间则需冷冻储存。图3.13.1-3替代图组织压片2.穿刺液和脓液B.接种3.拭子B.接种a.如需进行厌氧培养，应首先接种厌氧平板。b.将拭子放入1-2ml肉汤中涡旋振荡。a.将标本混匀，每个培养基上滴加一滴标本。b.如果送检标本足够，将侵入性操作采集的标本1：10接种于肉汤中，如果标本量过少，省去肉汤培养。c.在肉汤管壁上挤压拭子去除多余液体,弃去拭子。d.接种需氧平板，涂片革兰染色。c.将一滴标本滴加在玻片上制成薄层涂片，革兰染色。如果穿刺液清亮，用细胞离心机浓集标本后涂片。e.或者，用拭子直接进行平板接种，先接种抑制剂含量少的培养基，再接种抑制剂含量多的培养基f.将肉汤冷藏保存至7天备用。d.如果标本足够，将一部分标本冷藏储存至7天备用。注：浅表伤口或脓肿的拭子标本不必肉汤培养。C.需氧孵育条件厌氧培养Ⅴ

操作程序平板温度气体环境孵育时间重要部位深部伤口、脓和组织应做厌氧培养BAPPEACANCHOCMACEMB35-37℃

5%CO2

开放性至少48小时，侵入性标本若未生长孵育至3-4天脑脓肿、脑、肺、肝组织、深部伤口、脓肿脑穿刺液、角膜组织7天真菌7天标本革兰染色显示化脓（多形核细胞）、多种细菌形态35-37℃

大气肉汤

35-37℃

大气3-4天

7天BAP（血平板）PEA（苯乙醇琼脂培养基）

CNA

（革兰阳性菌选择培养基）CHOC（巧克力平板）

MAC

（麦康凯）EMB(Eosin

MethyleneBlue)D.所有标本革兰染色，培养结果评估Ⅴ

操作程序1.

涂片和染色。2.

记录白细胞、上皮细胞相对数量，细菌和真菌形态。①

注：梭菌常产生大量磷脂酶和脂酶破坏宿主细胞，涂片时并不能见到特征性细胞。a.

有重要临床意义的病原体时（通常来自无菌部位），应立即电话报告给医护人员。当无菌部位手术留取的标本中见到任何细菌时都要报告。一些具有临床意义的细菌如下：①软组织感染标本或穿刺液中见到梭菌样革兰阳性杆菌，即使未见到大量完整的多形核细胞。②脓肿或组织内见到大量多形核细胞和聚集成团排列、疑似葡萄球菌的革兰阳性球菌。侵袭性酶：卵磷脂酶、纤维蛋白酶、透明质酸酶和胶原酶等③④脑脓肿标本中见到细菌。在子宫内膜组织标本中见到链状革兰阳性球菌，有可能是产后A群链球菌败血症。b.

如果涂片见到多种形态，而未接种选择性培养基，应将标本补种CNA、PEA、EMB或MAC。上

产气荚膜梭菌形态

革兰染色，10X100疱肉培养基中的产气荚膜梭菌下

扫描电镜照片E.

培养的处置Ⅴ

操作程序1.

每天观察平板和肉汤生长情况2.

当对淋巴结进行培养时，因其中可能含有病原体，如弗朗西斯菌属、分枝杆菌和布氏杆菌，具有一定的危险性，应在生物安全柜内观察3.

常见病原体、培养监测及鉴定按照程序进行4.

若存在以下情况之一，鉴定三种以内微生物a.直接涂片见到多形核细胞b.无菌部位留取的标本c.标本质量很好（如：无或很少上皮细胞）。d.直接涂片见到细菌E.

培养的处置E.

培养的处置5.非侵入性操作留取的标本，若存在以下情况之一，仅只用最少测试显示微生物群（组）的类型即可（type

ofmicobiota）。a.涂片见到中量-大量上皮细胞。8.葡萄球菌a.金黄色葡萄球菌①

侵入性操作采集的标本或其它来源的标本，涂片示标本质量很好，并见到感染证据时（如多形核细胞，少或无上皮细胞，革兰染色见到葡萄球菌），AST。b.涂片无感染证据（未见多形核细胞），无临床感染迹象。c.培养生长≥3种细菌。但出现图3.13.1-6中所示特殊细菌时应该报告。注：保存所有生长微生物的培养平板数天，备用。通常7天即可，但如果空间有限，将分离株短期保存到培养管中。②

排除住院标本MRSA可能性，除外患者曾有MRSA阳性。如果感染征象不明显，只是MRSA跟踪监测。一旦MRSA出现，告知院感控制人员。6.若只有巧克力平板上生长而血平板上未生长，则应进行鉴定（淋病奈瑟菌、嗜血杆菌、弗朗西斯菌）。鉴定脑膜炎奈瑟菌。b.凝固酶阴性葡萄球菌，若是从侵入性操作留取标本中分离的唯一细菌，或者涂片见到多形核细胞，或多次培养均为该一种细菌时，AST。若是从浅表伤口中分离且为多种细菌混合生长，不论数量多少，或标本中存在大量上皮细胞时，报告为皮肤正常菌群。7.鉴定化脓性链球菌或无乳链球菌。注：分离到化脓性链球菌时要告知医生，因其可致危及生命的坏死性筋膜炎。E.

培养的处置E.培养的处置9.草绿色链球菌或肠球菌10.对于革兰阳性杆菌，若来自于无菌部位或活检标本，排除李斯特菌、丹毒丝菌、蜡样芽孢杆菌、炭疽杆菌、隐秘杆菌、溃疡棒状杆菌、奴卡菌、放线菌的可能性。若生长大量其它革兰阳性杆菌，或涂片为优势菌时，应进行鉴定。否则，报告为皮肤菌群。a.由手术、侵入性操作采集的标本中分离，为单一或优势菌、革兰染色提示存在感染时（见到多形核细胞），至少鉴定到属。b.若为混合生长或非优势生长菌，则为正常菌群。c.若从住院患者、移植或门诊肿瘤患者体内分离到有意义的肠球菌或为感染监控菌株，应进行万古霉素筛选试验。如菌株来自于无菌部位（如骨、脑）纯培养或近乎纯培养，AST。炭疽杆菌蜡样芽孢杆菌11.若酵母菌非大量或优势生长，报告为正常菌群。除非分离自无菌部位，通常只鉴定白色假丝酵母菌到种水平。化脓隐秘杆菌(Corynebacteriumpyogenes)李斯特菌奴卡菌E.

培养的处置E.

培养的处置12.肠道革兰阴性杆菌优势或中到大量生长13.非肠杆菌科细菌a.若只有一到两种生长或优势生长，涂片提示感染，id+ASTa.除外布氏杆菌、嗜血杆菌、巴斯德菌和弗朗西斯菌属的可能性，通常它们不在MAC和EMB上生长，并不罕见于狗或猫咬伤伤口。操作均在生物安全柜内进行。弗朗西斯菌可分离自淋巴结活检标本，传染性强，该菌为小的球杆菌，生长缓慢，触酶阳性或弱阳，氧化酶阴性。发酵葡萄糖，其它生化反应多为阴性。β内酰胺酶试验阳性

腹腔

E.coli

涂片

混合菌，在厌氧平板生长细菌前无需进行大肠埃希菌药敏试验b.若肠杆菌很少或非优势生长，或＞2种菌混杂生长但无优势生长，报告为“混合胃肠道细菌生长”。①

腹腔脓肿标本应除外沙门菌、志贺菌、弯曲杆菌和耶尔森菌属的可能。b.鉴定铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌，若为纯培养或大量生长，涂片提示感染时，AST②

通常保留一个典型平板至7天，备用。c.鉴定氧化酶阳性、吲哚阳性的细菌，可能为气单胞菌或弧菌。对产色素的革兰阴性杆菌也应注意，包括紫色产色杆菌和鞘氨醇杆菌C.咨询实验室主任、术者或医生后方对特殊要求的多种形态肠道革兰阴性杆菌id+AST注

多种革兰阴性杆菌需联合治疗

标本被粪便污染检查对治疗方案无意义d.假单胞菌属和不动杆菌属、非发酵杆菌id+AST图3.13.1-5

需氧培养条件下伤口标本阳性生长结果的初步评估图3.13.1-5

需氧培养条件下伤口标本阳性生长结果的初步评估需氧平板上见到多种细菌革兰染色见到细菌培养未生长平板上单一菌落生长注：如未接种选择性培养基（MAC、CNA），平板大量生长，原始标本或肉汤，接种选择性培养基注：如只一区生长，但涂片见到细菌，

或涂片与生长不符，检查厌氧生长情况；重新孵育；可能需要接种特殊的选择性培养基再次涂片，复查厌氧平板，重新评估培养结果图3.13.1-6列出的病原菌，不拘优势与否图3.13.1-6未列出的细菌（如凝固酶阴性葡萄球菌，草绿色链球菌，棒状杆菌，肠球菌，图3.13.1-6未列出的革兰阴性杆菌）鉴定并报告细菌鉴定和药敏试验；侵入性操作采集标本的阳性培养结果告知临床侵入性操作留取标本或开放性伤口

取材优良开放性伤口取材不良a简单鉴定微生物群对于皮肤菌群（类白喉杆菌、凝固酶阴性葡萄球菌），草绿色链球菌，或肠球菌，在以下情况时进行鉴定1.侵入性操作采集的标本（除外存在平板或采样污染）2.开放性伤口取材合格a，直接涂片见到相应细菌形态或多个培养阳性鉴定一种或两种优势生长病原菌，做药敏试验，除外皮肤菌群。非优势生长病原菌和皮肤菌群极少鉴定。保存平板＞2种病原菌，除外皮肤菌群和无优势菌生长：报告简单鉴定结果。保存平板。a.涂片见白细胞或糖尿病史或免疫系统受损伤仅在巧克力平板上生长流感嗜血杆菌，淋病奈瑟菌，吐拉弗朗西斯菌触酶阳性VI.报告结果溶血血平板上生长不溶血触酶阴性A.

尽快报告革兰染色结果，来自于重点部位的标本应在1小时内报告。A群或B群β溶血性链球菌隐秘杆菌，金氏金氏菌MAC生长MAC不生长B.

报告所有阴性培养结果“培养___天未生长”G+bMAC生长C.

对病原菌逐个报告，内容包括计数、初始报告，最终报告要鉴定到属和种（必要时）。铜绿假单胞菌或气单胞菌和弧菌，紫色产色杆菌MAC不生长溃疡棒状杆菌，金黄色葡萄球菌，炭疽杆菌，李斯特菌D.

以下细菌存在已知致病因素，应报告：1.

β溶血性链球菌氧化酶阳性氧化酶阴性乳糖阴性革兰阴性菌2.

金黄色葡萄球菌3.

铜绿假单胞菌紫色-产色杆菌触酶阴性（限咬伤）腹腔/生殖道：排除肠道病原菌（沙门菌、志贺菌、耶尔森菌)触酶和氧化酶阳性4.

产气荚膜梭菌气味-铜绿假单胞菌双球菌-脑膜炎奈瑟菌吲哚阳性-弧菌和气单胞菌黄色，无动力，尿素阳性，吲哚阴性：鞘氨醇杆菌5.

报告“产色素厌氧菌”，拟杆菌属，“混合厌氧菌生长”，不必进一步鉴定二氧化碳嗜纤维菌侵蚀艾肯菌尿素阳性：布氏杆菌咬伤：巴斯德菌、伯杰氏菌、EF-4和DF-2腹腔：弯曲杆菌（吲哚阳性）

螺杆菌（仅厌氧生长）黄色-嗜麦芽窄食单胞菌念珠状链杆菌图3.13.1-6通常具有临床意义，即使生长量少或混合生长的需氧和兼性需氧菌快速鉴定方法伤口混合培养报告示例微生物检查送检标本示例E.

根据生长的菌量、菌种数量和革兰染色结果，明确地或简单地报告结果。例1-例22+例33+例41+见到多形核细胞见到细菌F.按照流程对革兰阴性杆菌、肠球菌或葡萄球菌应进行药敏试验，对于非优势生长、混合生长或皮肤菌群、无明确感染征象的细菌不必进行药敏试验。若临床医生根据患者病情或出于感染监控目的提出要求时，应对上述细菌进行药敏试验。3+

G-细菌3+

G