色谱法固定相和流动相的选择

职业教育医学检验技术专业教学资源库吸附柱色谱法的固定相和流动相选择宜春职业技术学院王宜萍吸附柱色谱法的固定相和流动相选择知识回顾色谱分离过程的实质：是溶质在不互溶的固定相和流动相之间进行的一种连续多次的交换过程，它借助溶质在两相间分配行为的差别而使不同的溶质分离。色谱体系固定相流动相待分离溶质性质决定分离效果1固定相吸附柱色谱法的固定相和流动相选择以固体吸附剂作固定相，应具备以下特点：粒度均匀，粒度要细，使用方便0403良好的稳定性（化学惰性），且不溶于洗脱剂01较大的比表面和一定的吸附能力常用：氧化铝、硅胶、聚酰胺、大孔吸附树脂等02较好的选择性吸附柱色谱法的固定相和流动相选择常以SiO2·XH2O表示，是多孔性的硅氧交链结构。其骨架表面的硅醇基，能吸附大量水分，硅胶的活性与含水量有关。硅氧交链硅胶硅醇基①硅胶吸附柱色谱法的固定相和流动相选择吸附机制失活活化适用范围粒度100~200目具微酸性，适于酸性和中性物质105-110℃加热30min水与硅醇基结合使其失去活性表面的硅醇基，与物质形成氢键吸附柱色谱法的固定相和流动相选择氧化铝的吸附活性来源于铝原子上未成键电子对。氧化铝的活性也与含水量有关，含水量越低，活性越大，吸附力越强。无水氧化铝吸附活性特别强。根据氧化铝的含水量可将活性分为五级。②氧化铝吸附柱色谱法的固定相和流动相选择硅胶含水量%15525038活性级别ⅢⅡⅣⅠⅤ氧化铝含水量%6310015吸附剂的活性和含水量有一定的关系：（1）含水量愈高，其吸附活性愈低，（2）活性级数愈大，吸附力就愈弱。吸附柱色谱法的固定相和流动相选择适用于碱性和中性化合物的分离碱性氧化铝(pH9～10)适用范围广，分离生物碱等，及酸碱不稳定成分中性氧化(pH7.5)适于分离酸性化合物，及对酸稳定的中性物质酸性氧化铝(pH5～4)氧化铝具有分离能力强、活性可以控制等优点。通常分为：吸附柱色谱法的固定相和流动相选择小结-----氧化铝：强极性吸附剂活化温度：200~400℃分类：碱性、中性和酸性吸附机制：碱性位置、Al-OH吸附柱色谱法的固定相和流动相选择③聚酰胺分离机制：主要是氢键吸附适用对象：酚类、酸类、硝基、黄酮类商品名：锦纶、尼龙-6,白色多孔的非晶型粉末不溶于水和有机溶剂，易溶于甲酸、酚、浓酸吸附柱色谱法的固定相和流动相选择吸附性：是由于范德华力或产生氢键吸附。筛选性：是来源于它的多孔性网状结构。主要应用于：水溶性化合物的分离提纯。④大孔吸附树脂其是一种不含交换基团，具有大孔网状结构的高分子吸附剂，其工作原理是利用吸附性和筛选性原理相结合的分离材料。2流动相------液体又称洗脱剂吸附柱色谱法的固定相和流动相选择

流动相洗脱的过程实质：就是流动相分子与被分离的组分分子竞争占据吸附剂表面吸附活性中心的过程。流动相的要求纯度高稳定

对样品溶解度大粘度小吸附柱色谱法的固定相和流动相选择按“相似相溶原则”,当分离极性较大的组分时，宜选择极性较大的溶剂作洗脱剂，而分离极性小的溶剂作洗脱剂,宜选择极性较大的溶剂作洗脱剂。流动相的洗脱能力主要由流动相的极性决定3选择原则吸附柱色谱法的固定相和流动相选择常用溶剂的极性顺序为：常用吸附剂的极性顺序为：增大增大为要提高分离效果，必须同时充分考虑试样、洗脱剂和吸附剂三者关系。3、选择原则吸附柱色谱法的固定相和流动相选择＜二甲胺＜酯类＜酮类＜醛类＜硫醇＜胺类＜醚＜硝基化合物烷烃＜烯烃＜酰胺类＜醇类＜酚类＜羧酸类小极性大多糖、蛋白质等大分子、生物碱盐苷类（皂苷、黄酮苷、蒽醌苷）黄酮、蒽