细胞病理学检查的基本技术

第二节细胞病理学检查的基本技术永州职业技术学院杨晓斌第二节细胞病理学检查的基本技术标本采集原则尽量减少受检者的痛苦，取得合作避免引起严重并发症，防止癌细胞进一步扩散方法简便、实用、经济尽量取得足够供诊断的细胞成分及时快速送检立刻制片绝对避免污染标本号标记清楚标本采集方法直视采集法直接用刮片刮取、吸管吸取、刷洗液体标本的采集痰涂片、尿液涂片、前列腺液涂片、乳头溢液涂片穿刺吸取法浆膜腔关节腔积液，淋巴结、软组织、甲状腺、肝摩擦法鼻咽、食管、胃灌洗法空腔器官、盆腔或腹腔制片要求1标本要新鲜2操作要轻柔：分布均匀；薄厚适当,勿挤压摩擦，以免细胞损伤变形；3玻片要清洁4涂片要牢固5涂片数量6标号准确制片方法推片法涂抹法喷射法印片法对粘性小的标本如尿液，可在载玻片上先涂上粘附剂如蛋清甘油后再涂片。涂片操作要轻柔，尽量减少对细胞机械性损伤。涂片要均匀，厚薄要适宜。常用粘附剂：蛋清、明胶、PEG、多聚赖氨酸、乳白胶、大蒜汁等固定目的：保持细胞的自然形态，防止细胞自溶、长菌；沉淀和凝固蛋白质，破坏溶酶体，使细胞结构清晰易于着色，固定愈快，细胞愈新鲜，染色效果愈好固定液乙醚乙醇固定液：乙醇、乙醚和冰乙酸，渗透性强，固定效果好95%乙醇固定液：大规模防癌普查。简单，渗透能力较差固定方法带湿固定干燥固定固定时间15～30min。粘液较多的标本固定时间要延长；不含粘液的固定时间可缩短注意事项：巴氏染色，涂片勿在空气中干燥后染色；固定时间不短于15分钟（48h内进行巴氏染色）；固定液要达到90％以上；液体标本离心后涂片，待干后再固定，宫颈的刮片、痰涂片、拉网涂片、内窥镜的刷片、针吸涂片应立即固定。染色细胞的化学组成不同，对染料的亲和力不同，而显示不同的颜色H-E染色染色效果好，胞质色彩不丰富，不能观察雌激素水平。操作简易，易配制巴氏染色色彩鲜艳，结构清晰，效果好，可观察雌激素水平对阴道上皮细胞的影响。操作复杂瑞-吉氏染色适用于血片、淋巴穿刺激和胸腹水涂片染色方法酸性染料碱性染料H-E染色伊红苏木素巴氏染色桔黄G、伊红、亮绿、俾士麦棕（EA36、EA50、EA65）苏木素（也有用硫堇的）瑞-吉氏染色伊红美蓝（天青）染色过程固定乙醇等固定剂染核苏木素等染浆伊红、EA36等透明二甲苯等巴氏染色95％乙醇固定（15min）加水：80%、70%、50%乙醇各1min苏木素染液（3-5min）清水冲洗三次分色：稀HCL过2次，3秒，水洗，涂片转为浅红色蓝化：稀碳酸锂中蓝化核1min，使涂片转为灰蓝色脱水：50%、70%、80%、95%乙醇1min橘黄G6染液中染色2—5分钟95%乙醇洗2次EA染色2—5分钟95%的乙醇冲洗5次结果判定：胞核呈紫蓝色，核仁红色，底层细胞、中层细胞和表层角化前细胞为淡蓝色，不全角化细胞（角化前细胞）呈粉红色，角化细胞呈桔黄色。常规巴氏制片与液基薄层制片比较巴氏液基薄层制片10～20％标本移至玻片100％标本收集至保存液中干固定湿固定制片技术不稳定，不能重复技术稳定，可重复易受血黏液炎性渗出物覆盖去除血黏液和大量炎性遮盖物细胞分布不均匀，易重叠细胞分布均匀集中，不易重叠镜下观察费力，易漏诊镜下观察省力，不易漏诊成本较低成本较高涂片观察及报告方式涂片观察方法1.涂片观察前要认真核对涂片编号，了解送检申请单上填写的全部资料。2.由于涂片范围较大，癌细胞又分散，故显微镜检查主要在低倍镜下观察，当发现有异常细胞时，再换用高倍镜辩认，必要时用油镜观察。3.将玻片自左到右、自上到下按顺序移动，全面、仔细地观察整个涂片的每一部分。如发现异常细胞，应作标记，以利复查。报告方式直接法根据细胞形态，对有特异性细胞学特征的、较容易确认的疾病可直接作出诊断，如脂肪瘤等分级法三级分类法Ⅰ级

阴性Ⅱ级

可疑。涂片发现核异质细胞。Ⅲ级

阳性。找到典型的癌细胞。可进一步分类。四级分类法Ⅰ级

阴性。Ⅱ级

核异质。少量轻度核异质细胞Ⅲ级

可疑。涂片中有重度核异质细胞Ⅳ级

阳性。涂片中可见典型的癌细胞。五级分类法Ⅰ级

正常细胞和一般炎症变性细胞。Ⅱ级

少量轻度核异质细胞。Ⅲ级

较多重度核异质细胞，不能肯定为恶性。Ⅳ级

大量重度核异质细胞，提示为恶性肿瘤Ⅴ级

可见典型癌细胞，并能作出初步分类。TBS报告系统未见癌细胞或癌前病变细胞病原体：滴虫、霉菌、细菌、单疱反应性细胞改变上皮细胞异常细胞病理学检查的质量控制1.标本采集标本采集是质控的先决条件。如宫颈刮片应采集宫颈口的柱状上皮细胞和鳞状上皮交界线；痰涂片须见到一定数量的肺泡吞噬细胞，方能证明来自肺深部的痰液；胸腹水涂片应该有明确的间皮细胞。2.涂片制作包括涂片、固定和染色环节。质量良好的涂片是细胞学诊断的基础。良好的涂片应具备：①涂片厚薄适当，细胞分布均匀。②涂片中细胞结构清晰。③无人为因素所致细胞形态变化，湿片要在干燥前固定，以保持细胞离体前原有的形态。④红细胞过多的涂片，应溶解红细胞，使涂片更为清晰。3.阅片和诊断制备2～3张涂片，细致观察每张涂片，不能放过一处可疑之处，