细胞病理学基本检验

病理检验技术

细胞病理学基本检验一、细胞病理学检验技术概述（一）常用细胞学标本的采集、制片标本采集原则1.采集标本必须保持新鲜,以免细胞自溶,影响细胞着色和正确诊断。2..采集方法应简便,以减轻患者痛苦,且不至于引起严重的“并发症”或促使肿瘤扩散。3.正确选择取材部位,尽可能由病区直接采取细胞并获取丰富有效的细胞成分。4.绝对避免错号和污染。5.针吸穿刺操作时有两人配合完成采集标本较好,并了解病情和影像学资料,选择恰当的体位及穿刺点。制片方法1.推片法

适用于稀薄的液体标本,如血液、尿液和浆膜腔积液等。离心后取沉淀物置玻片一端,用推片作30°夹角轻轻推制而成。

2.涂抹法适用于较黏稠的标本,如痰液标本等。用竹签挑取标本在玻片上以顺时针方向转圈涂抹,涂抹要均匀,不能重复。

3.喷射法

适用于各种吸取的标本。使用配备细针头的注射器将标本反复均匀地从左到右喷射在玻片上。4.印片法

是活体组织检查的辅助方法。将切取的病变组织块用手术刀切开,立即将切面平放在玻片上,轻轻按印即可。

5.液基细胞学技术

适用于妇科标本和非妇科标本,是一种自动标本处理新技术,是将刷取或灌洗法采集的标本,放在特殊的运送液或保存液中,刮片毛刷在小瓶内搅拌数十秒钟,再通过高精密度过滤膜过滤后,将标本中的杂质分离,取滤后的上皮细胞制成直径为20mm薄层细胞于载玻片上。机器自动完成涂片固定、染色步骤。（二）常规细胞学染色方法细胞学染色方法有多种,主要有常规染色、特殊染色(或称细胞化学染色)和免疫细胞化学染色。可根据不同的检验要求和研究目的加以选择应用;特殊染色和免疫组织化学染色方法。常规染色法有巴氏(Papanicolaou)法、HE法和迈格林华吉姆萨染色(MGG染色)法等。巴氏染色起初仅用于阴道上皮雌激素水平的测定以及检测生殖道念珠菌、滴虫等病原体的感染。染色方法经过不断改良后,胞质染色液分别有EA36、EA50和EA65。目前主要用于妇科细胞学涂片染色,多采用EA36和EA50染色液,是用来筛查宫颈癌及癌前病变的常用细胞学染色方法。巴氏染色也适合胸、腹水、痰液等非妇科标本的染色,常采用EA65染色液。染色操作流程(1)涂片用95%的乙醇-冰醋酸固定液固定10~15分钟。(2)95%的乙醇、80%的乙醇、70%的乙醇、蒸馏水分别浸泡1分钟。(3)改良Lillie-Mayer苏木精染液染色5~10分钟。(4)自来水中冲洗多余染液。(5)1%的盐酸乙醇液分化约4秒。(6)1%的碳酸锂水溶液蓝化1分钟,自来水洗5分钟。(7)依次置入70%的乙醇、80%的乙醇、95%的乙醇(1)和95%的乙醇(Ⅱ)各1分钟。(8)橘黄G液染色1-2分钟(此步可省略)。(9)依次在95%的乙醇(I)、95%的乙醇(Ⅱ)漂洗去掉多余橘黄G染液。(10)EA36染液染色3~5分钟。(11)依次用95%的乙醇(1)、95%的乙醇(Ⅱ)、无水乙醇(1)和无水乙醇(Ⅱ)脱水各1分钟。(12)二甲苯透明,中性树脂封片。结果

角化细胞胞质呈粉红色,全角化细胞胞质呈橘黄色,角化前细胞胞质呈浅蓝色或浅绿色,细胞核呈蓝紫色,核仁呈橘红色,白细胞核呈蓝色,胞质呈淡蓝淡绿,红细胞呈橙红色。苏木精-伊红(HE)染色方法染色操作(1)涂片从95%的乙醇-冰醋酸固定液内取出,80%的乙醇浸泡1分钟。(2)蒸馏水洗1分钟。(3)改良Lillie.-Mayer苏木精染液染色5~10分钟。(4)自来水冲洗1分钟。(5)0.5%的盐酸乙醇液分化3-5秒。(6)自来水冲洗促蓝10分钟中,80%的乙醇浸洗1分钟。(7)0.5%的伊红Y乙醇液染色1分钟。(8)80%6的乙浸洗1分钟。(9)依次用95%的乙醇(1)、95%的乙醇(Ⅱ)、100%的乙醇(I)和100%的乙醇(Ⅱ)脱水各1分钟。(10)二甲苯透明,中性树胶封片。染色结果胞质呈淡红色,胞核呈紫蓝色,核仁呈红色。迈格林华-吉姆萨染色(MGG染色)法染色操作(1)涂片固定后蒸馏水洗2ml。(2)迈格林华染液滴染15分钟。(3)倒弃涂片上的染液,用自来水冲洗干净。(4)吉姆萨染液滴染15分钟。(5)倒弃涂片上的染液,用自来水冲洗干净。(6)甩干水分,镜检。必要时干燥后用中性树胶封片。染色结果细胞核呈紫红色,细胞质和核仁呈深浅不同的蓝色。（三）细胞病理学检查的质量控制1.标本采集

标本采集是脱落细胞学诊断的关键环节。所采集的细胞能否代表病变组织或器官的细胞群体,是脱落细胞学诊断结果准确和可靠的前提。满意的标本要具有足够数量的有效细胞成分。如痰涂片内,须有一定数量的肺泡吞噬细胞,如尘细胞,才能说明是来自肺深部的痰。胸腹水的涂片内应有特征性的间皮细胞。2.涂片制作

包括涂片、固定、染色等几个环节。满意的涂片应厚薄适宣,细胞分布均匀、染色后细胞结构清晰。标本制好后应立即固定,否则易造成误诊。3.阅片诊断

根据阅片原则仔细阅片。所有患者细胞学诊断应与手术、活检和临床表现相符合,诊断时需要加强与临床的沟通联系。对恶性肿瘤细胞分型诊断,常规染色很难判断时,要运用新的检验技术如流式细胞仪、兔疫细胞化学、原位杂交等获取新的信息。4.继续教育

鼓励技术人员经常参加细胞学继续教育项目,熟练掌握细胞学理论知识使其具有扎实的病理学基础,才能对千变万化的脱落细胞形态作出正确的判断。5.复查会诊

对涂片进行复查或会诊是脱落细胞学诊断质量控制的一个重要措施。复查会诊的情况有:①涂片内仅有少量异常细胞,很难作出结论性判断的病例。②标本内细胞变性或坏死严重,难以肯定诊断或分型的病例。③细胞学诊断与临床诊断明显不符的病例。④涂片取材不适当或制片技术不佳。6.定期随访

对细胞学诊断阳性或出现异常细胞的病例,均要进行定期随访观察。7.诊断原则

在没有充分的证据时,不要轻易下阳性的肯定诊断,可报告为可疑、高度可疑或建议重新取材检查等。二、脱落细胞学检查基本知识（一）基本概念脱落细胞学检验是采集人体各部位管腔器官表面的细胞,经染色后在显微镜下观察细胞的形态,并作出细胞学诊断的一门临床检验学科又称诊断细胞学或临床细胞学。脱落细胞学检验是基于光学显微镜的诊断,在作出正确的诊断前,不仅应掌握脱落细胞学的正常形态、良性病变以及恶性病变时细胞学的基本知识,而且应掌握标本的涂片制作、固定及染色等基本技术,这是脱落细胞学诊断结果准确与否的关键。（二）正常脱落上皮细胞形态根据功能主要分为4种：鳞状上皮细胞(

squamous

epithelium

cell)柱状上皮细胞(

columnar

epithelia

cell)移行上皮细胞(

transitional

epithelia

cel)间皮细胞(

mesothelial

cel)复层鳞状上皮细胞：由底层到表层分为：基底层、中层、表层1基底层细胞：（1）内底层细胞：单层立方或柱状，很少脱落。（2）外底层细胞：2～3层2中层细胞3表层细胞（1）角化前细胞（2）不全角化细胞（3）完全角化细胞柱状上皮细胞：类型：单层柱状上皮、假复层纤毛柱状上皮、复层柱状上皮主要分布于鼻腔、鼻咽、气管,肺、胃、肠道、子宫颈管、子宫内膜及卵巢等部位。涂片中常见：

1纤毛柱状上皮细胞

2黏液柱状上皮细胞

3储备细胞移行上皮细胞主要分布在肾盂、输尿管、膀胱等处,是介于复层鳞状上皮和假复层柱状之间的一种特殊类型细胞,其细胞形态可随器官的充盈状态而发生变化,所以也称变形细胞。当器官充盈时,细胞膜展开拉平,细胞变薄,体积增大。当呈收缩状态时,细胞层次多,可达6~7层,细胞变厚,体积变小。可分为基底层、中间层和表层。间皮细胞是附着于胸腔、心包腔和腹腔表面的单层上皮细胞,是一种起源于中胚层的特殊上皮。根据成熟程度及脱落时间长短分为幼稚型(嗜碱性)间皮细胞、成熟型(嗜酸性)间皮细胞以及退化变性型间皮细胞。（三）良性病变的上皮细胞形态1.细胞变性：是指细胞内或间质内出现某些异常物质或原有物质沉积过多,如细胞水肿、空泡变性、脂肪变性等,是可逆性病变,一旦病因去除,即可恢复。2.细胞死亡：是一种不可避免的结果，程序性死亡称为凋亡，发生于某种特定疾病的死亡称为坏死。3.增生一般指慢性炎症或理化因素刺激所引起基底层细胞分裂增殖能力加强,数量增加,常伴有体积增大。＊共同特点：胞浆嗜碱性、胞浆相对减少，核浆比略大、核增大可见核仁，核染色质细颗粒状。核分裂活跃，可见双核或多核4.再生上皮细胞在慢性炎症或其他理化因素刺激所致局部细胞损伤和死亡,最终由邻近组织的同类细胞增殖补充的过程称为再生。再生细胞核大染色深，染色质结块及有丝分裂，核仁大、多，浆略嗜碱性，见双核多核，常见炎细胞。5.化生：是指一种成熟的上皮组织在某些因素的作用下,被另一类型的成熟上皮组织所取代的过程。通常是柱状上皮被鳞状上皮取代,这种过程叫鳞状上皮化生简称鳞化。常见于炎症、机械创伤等损伤或慢性刺激的过程。6.异常角化又称角化不良、不成熟角化、细胞内角化。是指鳞状上皮细胞的核与胞质发育失去平衡，胞质分化超过核的分化程度，呈现核分化正常而胞质显示过度成熟的现象。若表层角化前细胞的胞质红染称为假角化；若中、底层细胞的胞质红染则称为早熟角化。7.上皮细胞不典型增生又称核异质细胞,是指上皮细胞的核异常。该细胞为处于癌细胞与正常细胞间的异常细胞,属于癌前病变。表现为:核增大、形态异常、染色质增多、分布不均、核膜增厚、核染色较深,细胞质尚正常。根据核异质细胞形态改变程度,可分为轻度核异质、中度核异质和重度核异质。8.各种炎症时的细胞形态炎症是组织对损伤的一种常见反应，根据时间不同分为急性、亚急性和慢性。在胞学涂片上,上皮细胞以变性、坏死为主,可见中性粒细细胞增多,出现细胞碎片、无结构的呈网状或团块状的纤维蛋白、红细胞和白细胞等坏死物质,伴少量淋巴细胞。炎症按照病程可分为急性、亚急性、慢性三种类型。（四）肿瘤细胞学基础恶性肿瘤细胞的一般形态特点在细胞学涂片上,根据细胞的大小、形态、细胞群的分布、细胞质和细胞核等特征来识别肿瘤细胞的起源和类型。一般来说,确定恶性肿瘤细胞主要是根据细胞核的改变:要区分肿瘤类型则要考虑细胞质的改变和细胞群的变化。

1．细胞大小癌细胞与相同起源的正常细胞大小不同。癌细胞大小变化多超出生理性范围，体积大者超过多核巨细胞，小者极小。在一个癌细胞群体中，大小不一很常见。在空气干燥固定涂片中，癌细胞大小不一更明显。但是，在缺乏细胞核异常的情况下，不能仅凭细胞大小就诊断为癌。

癌细胞大小不一（大细胞肺腺癌，细针吸取涂片）

2．细胞形态恶性细胞形态异常不常见，特别是进展期肿瘤，多数与正常细胞形态类似。有时，恶性细胞形态呈各种畸形怪状。但是，良性肿瘤也可见畸形细胞，特别是增生的结缔组织或上皮组织。在诊断前，必须考虑细胞核特征。

3．细胞黏附性黏附性差是癌细胞主要形态学特征之一。在细针吸取细胞学涂片上，癌细胞多单个散在或疏松聚集，而良性肿瘤细胞多紧密排列，呈有序的聚集，且细胞边界清晰。分化差的恶性细胞比分化好的恶性细胞的黏附性差。故恶性淋巴瘤和肉瘤细胞倾向于单个散在，罕见成堆。

癌细胞排列疏松（疏松聚集的肺腺癌细胞）

4．细胞核核异常是癌细胞主要形态学特征之一。主要变化有：①细胞核增大，特别是核质比增大。②细胞核的形态和轮廓不规则。③染色过深、染色质呈粗颗粒状。④女性出现异常的性染色质小体。⑤核膜异常。⑥核仁异常。⑦有丝分裂异常。⑧其他变化。

有2个性染色体的乳腺癌细胞

恶性肿瘤细胞与核异质细胞的鉴别细胞结构恶性核异质核大小不一畸形明显轻～中度核膜明显增厚不均轻度增厚染色质结块或粗颗粒，其间有透明间隙有时呈墨水滴状多呈细颗粒状，少数结块，无墨水滴状核仁大而多1～2个，轻度