无菌操作接种前准备

项目二无菌操作园艺技术专业教学资源库模块三组培基本操作技术12CONTENTS外植体选择和处理项目二无菌操作3接种用品准备无菌操作（一）灭菌与消毒的区别灭菌消毒灭菌：用理化方法杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体。消毒：杀死、消除或抑制部分微生物，使之不发生作用。思考：灭菌和消毒有何区别？

一、接种用品准备园艺植物组织培养物理灭菌过滤灭菌热力灭菌辐射灭菌干热灭菌湿热灭菌电离辐射紫外辐射超声波微波灼烧灭菌煮沸灭菌烘烤灭菌高压蒸汽灭菌（二）消毒方法园艺植物组织培养

一、接种用品准备园艺植物组织培养

一、接种用品准备园艺植物组织培养

一、接种用品准备化学灭菌熏蒸灭菌喷雾灭菌涂擦灭菌浸泡灭菌5-8ml/m3甲醛+5g/m3

高锰酸钾；或冰醋酸加热。70%酒精；0.1-0.2%新洁尔灭。各种表面消毒剂同喷雾灭菌园艺植物组织培养

一、接种用品准备园艺植物组织培养

一、接种用品准备

1.环境灭菌◆培养室灭菌◆接种室灭菌（三）组培灭菌方法例举园艺植物组织培养

一、接种用品准备接种室灭菌方法超净台喷雾消毒:75%酒精。紫外灯照射：波长260nm，距离小于1.2m，20-30min。臭氧灭菌机：1-2h。熏蒸灭菌:5-8ml/m3甲醛+5g/m3高锰酸钾；冰醋酸；1-3%高锰酸钾或3%来苏儿。园艺植物组织培养

一、接种用品准备培养室灭菌方法新建培养室用前一定要彻底熏蒸1次。隔2-5d用洗衣粉水或3%来苏水拖地1次，用0.1-1.0%高锰酸钾液擦架1次。园艺植物组织培养

一、接种用品准备

2.培养基灭菌高压湿热灭菌某些激素、维生素采用过滤灭菌园艺植物组织培养

一、接种用品准备1.外桶2.锅盖3.安全阀4.排气阀5.气压表6.内桶7.排气软管8.支架手提式高压湿热灭菌锅园艺植物组织培养

一、接种用品准备手提式高压湿热灭菌方法装锅加水封盖通电加热排冷空气升温保压断电降压出锅冷却园艺植物组织培养

一、接种用品准备

自动高压湿热灭菌锅电源水位指示灯温度、压力显示窗温度压力设置钮压力表放汽阀园艺植物组织培养

一、接种用品准备装锅加水封外盖升温排冷气升温保压降压出锅冷却

自动高压湿热灭菌方法通电设置参数封内盖园艺植物组织培养

一、接种用品准备

培养基高压灭菌所必需的最少时间

容器体积(mL)121℃灭菌所需最少时间(min)

20-5015

100030

250-50025

75-15020园艺植物组织培养

一、接种用品准备

过滤灭菌滤膜Ø0.45um以下1.过滤器先灭菌，灭菌温度不超过121℃。2.溶液先进行初滤(滤膜Ø0.65um)园艺植物组织培养

一、接种用品准备3.培养用品及器具等的灭菌消毒方法玻璃器皿灭菌接种工具灭菌实验服、口罩、滤纸灭菌物体表面灭菌玻璃器皿及量具的清洗消毒园艺植物组织培养

一、接种用品准备玻璃器皿灭菌干热灭菌：160-180℃,1.5-2.0h湿热灭菌：121℃,20-40min接种前用酒精棉球擦试消毒，并灼烧灭菌。园艺植物组织培养

一、接种用品准备接种工具灭菌用前干热灭菌：160-180℃,1.5-2.0h用前湿热灭菌：121℃,20-30min接种前用酒精棉球擦试，浸入95%酒精液中，并灼烧灭菌。园艺植物组织培养

一、接种用品准备湿热灭菌：121℃,20-30min实验服灭菌后置于缓冲间或密封好。实验服、口罩、滤纸灭菌园艺植物组织培养

一、接种用品准备物体表面灭菌灭菌方式：喷雾、涂抹杀菌消毒剂：70%酒精；1-2%来苏水；0.1-2%新洁尔灭；洗衣粉；吐温-80应用：桌面、墙面、双手、材料表面园艺植物组织培养

一、接种用品准备