第三吸光光法演示文稿

第三吸光光度法演示文稿目前一页\总数三十一页\编于十七点优选第三吸光光度法目前二页\总数三十一页\编于十七点吸光光度法

根据物质的吸收光谱（λυ）及光的吸收定律，对物质进行定性、定量分析的一种方法。目前三页\总数三十一页\编于十七点第一节物质的吸收光谱一、物质对光的选择性吸收

光的互补:若两种不同颜色的单色光按一定的强度比例混合得到白光，那么就称这两种单色光为互补色光，这种现象称为光的互补。目前四页\总数三十一页\编于十七点可见光3红橙黄绿青青蓝蓝紫650-760

nm600-650

nm580-600

nm500-580

nm490-500

nm480-490

nm450-480

nm400-450

nm单色光:具有同一波长的光复合光:由不同波长的光组合而成的光目前五页\总数三十一页\编于十七点完全吸收完全透过吸收黄色光光谱示意表观现象示意复合光Why???6颜色与光的关系目前六页\总数三十一页\编于十七点

物质选择性地吸收白光中某种颜色的光，物质就会呈现其互补色光的颜色。

物质的电子结构不同，所能吸收光的波长也不同，这就构成了物质对光的选择吸收基础。溶液颜色的深浅，取决于溶液中吸光物质浓度的高低。

目前七页\总数三十一页\编于十七点二．物质的吸收光谱(A-λ图）

以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，可得一曲线，即为吸收光谱(absorptionspectrum)或称吸收曲线(absorptioncurve),右图为不同浓度时三(邻二氮菲)合铁(II)配离子的吸收光谱。目前八页\总数三十一页\编于十七点定性分析基础不同的物质具有不同的分子结构，因而具有不同的吸收曲线，可以根据吸收曲线的形状和最大吸收波长的位置，对物质进行定性分析。KMnO4溶液的吸收曲线(cKMnO4:a<b<c<d)

同一物质，浓度不同，其吸收曲线的形状和λmax的位置不变。目前九页\总数三十一页\编于十七点二、物质的吸收光谱将不同波长的单色光依次通过有色溶液，测量溶液的吸光度A(absorbance)。以波长为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，得吸收曲线，或称吸收光谱。吸收光谱中，吸光度最大处的波长为最大吸收波长，用max表示。目前十页\总数三十一页\编于十七点特点:①具有最大吸收波长。②不同物质,λmax不同，λmax是定性分析的依据。③λmax几乎不随物质的浓度而变。④λmax附近，A最大，并与浓度c呈正比关系----定量分析依据。⑤远离λmax的光,物质几乎不吸收光（A→0）,这些光的A与物质的c无直接关系----不作定量分析依据。注意：物质对光的吸收越多，呈颜色越深，溶液浓度越浓。目前十一页\总数三十一页\编于十七点一、透光率和吸光度入射光I0

吸收Ia透射It

I0=Ia+It透射光的强度It与入射光强度I0之比称为透光率(transmittance)，用T表示透光率的负对数称为吸光度，用符号A表示。A愈大，溶液对光的吸收愈多。第二节

分光光度法

基本原理

目前十二页\总数三十一页\编于十七点T取值为0.0%~100.0%全部吸收T=0.0%全部透射T=100.0%入射光

I0透射光

It

T↗，溶液对光的吸收↘；

T↘，溶液对光的吸收↗。目前十三页\总数三十一页\编于十七点二

Lambert―Beer定律当I0一定时，A只与液层厚度（b）和溶液浓度C有关：①Io，c一定,A∝b

②Io，b一定,A∝c∴A=εbcorA=abr注意：Beer定律仅适用于单色光。目前十四页\总数三十一页\编于十七点单位：

b----cm。

a为吸光系数：Lg-1cm-1,c单位:g/L。

ε为摩尔吸光系数：L·mol-1·cm-1，c单位：mol/L，

a与ε的关系:ε=aM

M表示被测物质的摩尔质量。

由Lambert―beer定律

可知吸光度与溶液浓度之间为正比关系，而透光率与溶液浓度之间为指数函数关系：-lgT=

bc

T=10-bc目前十五页\总数三十一页\编于十七点a.比例系数ε与吸光物质的性质、入射波长及温度有关。b.吸光度A具有加和性。溶液中有几种吸光物质，彼此间不发生化学反应，则可：注意：12目前十六页\总数三十一页\编于十七点例13-1：已知某化合物的相对分子质量为251，将此化合物用乙醇配成浓度为0.150mmolL-1的溶液，在480nm波长处用2.00cm吸收池测得透光率为39.8%，求该化合物在上述条件下的摩尔吸光系数及质量吸光系数a。解：目前十七页\总数三十一页\编于十七点例13-2：测试酶与腺苷酸(AMP)体系的吸光度如下A(280nm)=0.46，A(260nm)=0.58，试计算每一组分的浓度。已知：酶的(280nm)=2.96104Lmol-1cm-1

(260nm)=1.52104Lmol-1cm-1

AMP的(280nm)=2.4103Lmol-1cm-1

(260nm)=1.5104Lmol-1cm-1吸收池厚度为1.00cm。目前十八页\总数三十一页\编于十七点第三节可见分光光度法一分光光度计分光光度计仪器型号很多，但其基本原理相似，其主要部件用方框图示意如下光源→单色光器→吸收池→检测器→讯号处理及显示器目前十九页\总数三十一页\编于十七点一、分光光度计主要部件光源单色光器吸收池检测器讯号处理及显示器光源：钨灯，发出320~3200nm的连续光谱，单色光器：以棱镜或光栅分光，提供单色光。吸收池：分光光度计中用来盛放溶液的容器。检测器：通过吸收池的光转换为光电流，再经放大输入指示器，然后显示。目前二十页\总数三十一页\编于十七点二、测定方法

可见分光光度法常用于定量测定，根据Lambert-Beer定律，在一定波长条件下，吸光度与浓度成正比，因此在分光光度计上测出吸光度，就可以通过下列方法即可求出被测物质含量:目前二十一页\总数三十一页\编于十七点二、测定方法标准曲线法取系列浓度标准溶液，测定吸光度A，作吸光度A对溶液浓度c的图，得过坐标原点的直线。在相同条件下，测量被测溶液的吸光度，在标准曲线上查得溶液浓度。维生素B12的标准曲线

目前二十二页\总数三十一页\编于十七点

1.标准曲线法

在测定溶液吸光度时，为了消除溶剂或其它物质对入射光的吸收，以及光在溶液中的散射和吸收池界面对光的反射等与被测物吸收无关的因素的影响，必须采用空白溶液(又称参比溶液)作对照。常用的空白溶液有下列三种。①溶剂空白②试剂空白③试样空白目前二十三页\总数三十一页\编于十七点2.标准对照法先配制一个与被测溶液浓度相近的标准溶液(其浓度用cs表示)，在max处测出吸光度As，在相同条件下测出试样溶液的吸光度Ax，则试样溶液浓度cs可按下式求得：cx=csAx/As目前二十四页\总数三十一页\编于十七点第四节提高测量灵敏度和准确度的方法一、分光光度法的误差溶液偏离Beer定律偏离Beer定律，A-c曲线弯曲。主要原因：化学因素吸光物质发生解离、缔合、溶剂化等现象；光学因素复色光引起对Beer定律的偏离。两种不同吸光系数的混合光对Beer定律的偏离目前二十五页\总数三十一页\编于十七点一、分光光度法的误差仪器测定误差光电管灵敏性差、光源不稳定及读数不准。透光率误差T引起浓度误差c：透光率20%~65%，A为0.2~0.7时，浓度相对误差较小。测量误差和透光率的关系目前二十六页\总数三十一页\编于十七点二选择合适的显色剂合适的显色剂必须具备的条件：

1.灵敏度

2.选择性高

3.生成的有色物质有确定的组成

4.生成的有色物质要稳定

5.显色剂在测定波长处无明显吸收。目前二十七页\总数三十一页\编于十七点三、选择合适的测定条件

1.波长的选择（入max）；

2.显色剂的用量要适量；

3.酸度（A–pH曲线）；

4.显色时间（A–t曲线）；

5.溶液浓度控制在A=0.2~0.7范围;

6.掩蔽干扰离子。目前二十八页\总数三十一页\编于十七点本章小结分光光度法是根据物质的吸收光谱及光的吸收定律，对物质进行定性、定量分析的一种方法。以入射光的波长()为横坐标，溶液的吸光度(A)为纵坐标画出的曲线，即吸收光谱，吸收光谱中吸光度最大的波长，为最大吸收波长，用max表示。目前二十九页\总数三十一页\编于十七点本章小结

1、分光光度法测定物质含量的依据是Lambert-Beer定律，即A=bc，此处c为物质的量浓度，称为摩尔吸光系数，若用质量浓度代替物质的量浓度c，则相应地改为a，A=ab，a为质量吸光系数