慢病毒相关技术介绍

宝日医生物技术（北京）有限公司Clontech

慢病毒相关技术介绍5/15/2023慢病毒相关技术介绍背景简介

病毒载体基因传递

慢病毒载体容易转染物理方法非病毒载体Clontech

慢病毒相关产品可以转染非分裂细胞实现持久有效表达

……

逆转录病毒载体腺病毒载体

……5/15/20232慢病毒相关技术介绍内容介绍1

提高慢病毒滴度的策略2提高转导效率的方法3

Lenti-X慢病毒包装系统

15/15/20233慢病毒相关技术介绍Lenti-X慢病毒包装系统5/15/20234慢病毒相关技术介绍背景简介病毒包装流程示意图5/15/20235慢病毒相关技术介绍第四代包装系统—Lenti-X™HTXLenti-XHTX

将Gag-Pro和RT-IN分离，降低产生具有复制能力病毒的几率，大大提高生物安全性。创新点I5/15/20236慢病毒相关技术介绍第四代包装系统—Lenti-X™HTXLenti-XHTX

引入Tet-Off诱导表达系统，大大提高病毒滴度！创新点II5/15/20237慢病毒相关技术介绍Lenti-X包装系统通过流式细胞仪测定：Lenti-X包装系统获得的病毒滴度高

于108IFU/ml；只需10μl病毒上清即可转导大部

分HeLa细胞。Lenti-XLenti-X5/15/20238慢病毒相关技术介绍Clontech慢病毒系统的优点5/15/20239慢病毒相关技术介绍慢病毒载体的种类cDNA载体pLVX-PuroRNAi载体pLVX-shRNA1pLVX-shRNA2ProteoTuner载体pLVX-PTunerpLVX-PtunerGreen诱导表达载体pLVX-Tet-OnAdvancedpLVX-Tet-OffAdvancedpLVX-Tight-Puro5/15/202310慢病毒相关技术介绍慢病毒载体的种类pLVX-EF1α-IRES-PuropLVX-EF1α-IRES-ZsGreen1/mCherrypLVX-EF1α-AcGFP1-N1&C1EF1α启动子载体荧光标签载体pLVX-DsRed-Monomer-C1&N1pLVX-AcGFP1-N1&C1双表达载体pLVX-DsRed-Monomer-C1&N1pLVX-IRES-ZsGreen15/15/202311慢病毒相关技术介绍慢病毒相关系统1、慢病毒包装系统高效，可获得的病毒滴度高达5X108IFU/ml具有两种假型病毒：泛嗜性（VSV-G）和单嗜性（ECO）Lenti-XHTXPackagingSystem(631247/49)Lenti-XHTXEcotropicPackagingSystem(631251)2、慢病毒cDNA表达系统高效基因传递系统，可用于几乎所有哺乳动物细胞Lenti-XExpressionSystem(632164)Lenti-XBicistronicExpressionSystem(Neo/Hyg/Puro,632181/2/3)3、慢病毒RNAi表达系统可以获得高效率的RNAi，可用于几乎所有哺乳动物细胞Lenti-X

shRNAExpressionSystem(632177)5/15/202312慢病毒相关技术介绍4、慢病毒诱导表达系统可以在几乎所有哺乳动物细胞中精确地诱导基因表达Lenti-XTet-OnAdvancedInducibleExpressionSystem(632162)Lenti-XTet-OffAdvancedInducibleExpressionSystem(632163)5、慢病毒报告系统利用荧光或化学发光检测法研究启动子活性可用于多种类型细胞Lenti-XDDCyan/Green/Red

ReporterSystem(631748/51/53)Lenti-XReady-To-GlowSecretedLuciferaseReporterSystem(631746)慢病毒相关系统5/15/202313慢病毒相关技术介绍提高慢病毒滴度的策略5/15/202314慢病毒相关技术介绍影响慢病毒滴度的因素转染效率转染试剂的类型

转染的DNA量

转染的DNA质量

细胞种类细胞密度

细胞状态包装细胞

测定滴度时细胞

的选择

测定方法的选择测定滴度5/15/202315慢病毒相关技术介绍Clontech提高慢病毒滴度的策略策略使用的病毒载体中包含改善载体性能和

提高病毒滴度的WPRE、RRE和

cPPT/CTS序列——提供多种病毒载体包装组分中含有经过比例优化的5种非病

毒载体——引入Tet-Off诱导表达系统配以Tet系统专用的胎牛血清（FBS）使用高品质的293T包装细胞系——

Lenti-X™293TCellLine使用创新型的转染试剂——Xfect™5/15/202316慢病毒相关技术介绍高品质包装细胞系—Lenti-X™293TTimeoftransfectionHarvestTime5/15/202317慢病毒相关技术介绍Lenti-X293TVS

293FTClontech的293T包装细胞获得的病毒滴度是293FT的2.6倍

！5/15/202318慢病毒相关技术介绍创新型转染试剂Xfect(631317/8)哺乳动物细胞用创新型转染试剂——Xfect应用的细胞类型广泛、转染效率高！由可生物降解的、低细胞毒性的纳米颗粒制备而成。操作流程简便、兼容血清。5/15/202319慢病毒相关技术介绍创新型转染试剂Xfect(631317/8)高效的Xfect低毒性的Xfect实验验证：Xfect转染293T包装细胞的效率高达97%！5/15/202320慢病毒相关技术介绍提高转导效率的方法5/15/202321慢病毒相关技术介绍慢病毒浓缩试剂盒Lenti-X™Concentrator(CatNo.631231&631232)操作简便，无需超速离心可以纯化大体积病毒样品病毒滴度提高100倍，回收率高达90%5/15/202322慢病毒相关技术介绍快速滴度测定Lenti-X™qRT-PCRTitrationKit(CatNo.631235)

基于HIV-1的qRT-PCR法的滴度测定试剂盒

1天内即可完成收获病毒、测定滴度和感染靶细胞

可以获得精确的病毒滴度，为获得稳定的感染效果奠定基础5/15/202323慢病毒相关技术介绍快速滴度测定LentiTM-XGoStixTM(CatNo.631243,631244&631241)阳性结果：病毒滴度>5x105IFU/ml

30秒内即可定性地判断病毒滴度

可以确定收获病毒的最佳时机操作简便5/15/202324慢病毒相关技术介绍快速高效转导相关产品Lenti-X™Accelerator(CatNo.631256,631257&631254)基于磁珠技术适用于包括干细胞在内的敏感细胞类型

操作简单快速，只需25min即可完成高效转导NEW!5/15/202325慢病毒