四项病原学标志物的核酸检测及检测报告的签发

临床输血检验技术

四项病原学标志物的核酸检测及检测报告的签发1、掌握HIV、HBV、HCV核酸检测的原理、实验有效性的判定、结论的判断。2、知道反应性和非反应性标本保存的方法，熟悉检测结果的复核、报告发布、报告复核、报告审核签发的流程学习目标PCR扩增检测采用TaqMan荧光探针标定技术。人类免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒核酸扩增分别采用不同荧光染料标记的探针，故可对提取的标本和内对照模板同时进行HBV（DNA）、HCV（RNA）、HIV1（RNA）检测。在反转录酶的作用下HCVRNA/HIV1RNA/内对照RNA反转录成cDNA，再与HBVDNA/内对照DNA一同作为模板在TaqDNA聚合酶的作用下扩增病毒核酸的保守区域和内对照特定区域。TaqDNA聚合酶5’—3’外切酶活性切割反应系统中带荧光标记的TaqMan探针产生荧光信号，随着PCR反应的进行，荧光信号不断积累。实时荧光定量PCR仪通过检测达到和超过荧光阈值的信号给出样品的阴阳性结果。病原学标志物的核酸检测原理样本EDTA-K2真空采血管留取血液样本器材与试剂荧光定量PCR扩增仪、HIV、HBsAg、HCV病毒（DNA）核酸扩增荧光检测试剂盒等。病原学标志物的核酸检测分析项目内对照HBVDNAHCVRNAHIV-1RNA备注检测荧光HEXTAMRAFAMROXCY5/阴性对照++---否则重测阳性对照//+++否则重测

阳性对照、阴性对照、内对照结果判定规则病原学标志物的核酸检测分析项目内对照HBVDNAHCVRNAHIV-1RNA结果判定检测荧光HXETAMRAFAMROXCY5检测样本++---HBVDNA/HCVRNA/HIV-1RNA阴性//+//HBVDNA阳性///+/HCVRNA阳性////+HIV-1RNA阳性-----所有结果重新测定-/-//HBVDNA结果重新测定/-/--HCVRNA或HIV-1结果重新测定（1.”/”表示不考虑；2.FAM/ROX/CY5荧光层“-”表示Ct>45orNoCt;“+”表示Ct≤45；3.HEX/TAMRA荧光层“-”表示Ct>40orNoCt;“+”表示Ct≤40）检测样本结果判定规则病原学标志物的核酸检测

实验有效性判定当阴阳性对照与外部质控品（质控品达到预期结果）同时有效时，整批实验有效；否则整批实验无效，需重做。结论的判定a.采用混检（八混一）模式进行核酸检测，当混检结果呈非反应性（-）时，该混检孔内的标本均判为合格标本。b.当混检结果某一项或多项呈反应性（+）时，混检孔内的所有标本均为待查标本，须进行拆分单样本检测。当拆分检测呈非反应性（-）时，则该标本为合格标本；拆分单样本检测某一项或多项呈反应性（+）时，该样本判为不合格。病原学标志物的核酸检测对照检测报告，将检测呈反应性的POOl所对应的标本挑出，放于2～8℃冰箱，留待次日进行样本拆分检测。对照检测记录，将检测呈非反应性的标本按日期，每100个标本作为一个单位放在样本盘上，贴上留样标签，放-20℃冰箱保存。【标本保存】病原学标志物的核酸检测【质量控制】1．PCR扩增板须严格按照编写的扩增板图从左至右顺序摆放。2．PCR扩增板放入PCR仪的扩增槽后，如扩增板少于6条，应取相同数量八连管从右至左摆放与其配平，如扩增板大于6条少于12条，应将剩下的空扩增槽用八连管补齐。3．按《实验室清洁消毒标准操作规程》进行PCR扩增实验室清洁消毒。病原学标志物的核酸检测检测结果复核酶免检测原始记录与微孔板逐一核对取消接收试验结果和发布报告结果与扩增曲线核对核对完整实验过程和关键控制点不一致，不在控核酸检测采取纠正措施分析和查找原因填写复核记录单检测报告的签发酶免试验《血液筛查检测报告》报告发布《酶免试验血液检测过程报告》核酸检测试验其它《核酸检测试验血液检测过程报告》核酸免检放行标本核酸试验组单项试验已发布的标本机采预标本常规试验不合格标本发布总评结果检测报告的签发报告复核核实报告与原始数据是否一致报告的标本数与实际检测标本的数量是否一致留取的待查样本管、不合格样本管是否正确填写报告复核记录检测报告的签发报告审核签发《试验结果原始记录》《血液检测过程报告》《血液筛查检测报告》