酶类-葡萄糖6磷酸酶

病理检验技术

特殊染色

酶类葡萄糖-6-磷酸酶

葡萄糖-6-磷酸酶

葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase)分解糖原为葡萄糖进入血流,称为肝糖原的糖化作用。此酶对维持血糖浓度的相对恒定有非常重要的作用,因此是糖代谢的关键酶。当血糖降低时,葡萄糖6-磷酸酶可促进肝糖原转变为血糖,当葡萄糖-6-磷酸酶缺乏时,会造成糖原分解障碍，使糖原积累在肝,肾及心等器官,这种情况称为肝糖原储积病,最常见的为糖原储积病I型。

葡萄糖-6-磷酸酶最适pH为6.5,但pH在6.0-8.0范围内也可进行。若pH低于5.0时,酶就会变性。此酶在反应中不像大多数磷酸酶需要二价金属阳离子作激活剂,但被氟化物、锌和氰离子抑制。此酶是一种膜结合酶,定位于粗面内质网,在肝、肾和小肠黏膜含量最多,是内质网的主要标志酶。需采用新鲜组织低温恒冷切片,如组织经甲醛短时固定,酶即可失活。葡萄糖-6-磷酸酶

硝酸铅法(根据Dachstein和Meisel)(一)试剂配制1.0.125%的6-磷酸葡萄糖二钠盐2.0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷/失水苹果酸缓冲液(pH6.7)3.2%的硝酸铅4.孵育液：0.125%的6-磷酸葡萄糖二钠盐4ml、0.1mol/L三羟甲基氨基甲烷/失水苹果酸缓冲液(pH6.7)4ml、2%的硝酸铅0.6ml、蒸馏水1.4ml，依次混合后过滤5.1%的硫化铵即配即用,不能保存6.10%的中性甲醛葡萄糖-6-磷酸酶

葡萄糖-6-磷酸酶（硝酸铅法(根据Dachstein和Meisel)）(二)染色步骤1.新鲜组织低温恒冷切片(用液氮快速冷冻效果更佳),厚5μm,贴于玻片,取出风扇吹干30分钟。2.切片入预温的孵育液于37℃的恒温箱孵育10~20分钟。干30分钟。3.蒸馏水浸洗2次,每次1分钟。4.1%的硫化铵处理1分钟。5.流水冲水5分钟。6.10%中性甲醛固定10分钟。7.流水冲洗5分钟,再用蒸馏水稍洗。8.甘油明胶封盖。葡萄糖-6-磷酸酶（硝酸铅法(根据Dachstein和Meisel)）(三)结果葡萄糖-6-磷酸酶活性部位呈黄棕色至棕黑色颗粒状沉淀。(四)对照方法配育液时,用等量的蒸馏水代替0.125%的6-磷酸葡萄糖二钠盐,结果应为阴性。切片固定于10%的甲醛液中1小时后再进行孵育,酶被灭活,结果为阴性。葡萄糖-6-磷酸酶（硝酸铅法(根据Dachstein和Meisel)）(五)注意事项1.6-磷酸葡萄糖的钡盐在储存中较钠盐或钾盐稳定,如使用钡盐,需将钡盐转换为钠盐或钾盐,方法如下：取6-磷酸葡萄糖钡盐125mg,溶于蒸馏水5ml,加2mol/L盐酸2~3滴,使钡盐完全溶解。再加入硫酸钠或硫酸钾60mg,此时溶液呈乳白色,于电磁搅拌器搅拌1小时,然后离心15分钟,取其上清液,加入硫酸钠或硫酸钾1小粒,如未出现乳白色混浊,即用蒸馏水稀释至15ml,用lmol/L氢氧化钠调至pH6.7,如加入硫酸钠或硫酸钾1小粒后,仍出现乳白色混浊,表明对钡盐转换不够,需再加入适量硫酸钠或硫酸钾,然后再搅拌、离心,如无乳白混浊出现即可使用。2.1%的硫化铵配后不久会自行分解而失效,因此每次要临时小量配制,一般取蒸馏水4ml加入硫化铵1滴即相当于1%。硫化铵用后要塞紧保存,否则容易失效。葡萄糖-6-磷酸酶（硝酸铅法(根据Dachstein和Meisel)）(六)染色机制葡萄糖-6-磷酸酶分解底物6-磷酸葡萄糖,释放出磷酸,磷酸与铅离子结合,在酶活性部位形成磷酸铅,后者经硫化铵处理,形成棕黑色的硫化铅沉淀在酶活性处。(七)应用常用于确诊冯吉尔克(V