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文档简介

种子生产与经营专业《作物育种技术》目的基因重组质粒的构建掌握质粒的含义熟悉最常用的质粒掌握质粒重组的基本步骤教学目标一、质粒（一）质粒的含义质粒是一种细胞染色体外能够自主复制的很小的环状DNA分子，在基因工程中，质粒被用来当做目的基因的运载体，也是一种运输工具。获得的目的基因只是为利用外源基因提供了基础，还需连接到载体上才能进行自我复制。将目的基因与载体结合的过程就是对目的基因进行体外重组的过程。一、质粒（二）最常用的质粒目前在植物基因工程中，最常用的载体系统是Ti质粒，它是根瘤土壤杆菌细胞中存在的一种环形双链DNA分子。农杆菌侵染植物后，Ti质粒中的T-DNA区段脱离质粒而整合到受体植物的染色体上。因此，如果把外源基因插入T-DNA中，就有可能携带进入受体植物并整合到染色体上。一、质粒（二）最常用的质粒T-DNA中的Shi和Roi基因与这个质粒的毒性区段中的几个基因合作，能导致植物产生冠瘿瘤，这些基因不但与运载外源基因无关，而且还有害于植物。经过改良的Ti质粒保留了它的插入植物染色体、自我复制，转录mRNA等功能以及其固有的起标志作用的合成Opines（罂粟碱）的基因，并且容许目的基因插入其中，这种改良的Ti质粒可以侵染烟草、矮牵牛、马铃薯和向日葵等许多双子叶植物，并且能有效地转移外源基因。

二、质粒重组的基本步骤质粒重组的基本步骤包括：对目的基因的载体进行改造利用限制性内切酶将载体切开连接酶把目的基因连接到载体上获得DNA重组体二、质粒重组的基本步骤已经分离的目的基因一般都保存在大肠杆菌内的一类辅助质粒中，常用的有pBR322系列、pUC以及pBluescriptK+(—)系列等。在进行外源基因转移前还必须将外源基因重组到合适的载体上，具体采用哪种载体要根据转基因的方法和目的而定。二、质粒重组的基本步骤二、质粒重组的基本

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