电泳法测定品种纯度的原理

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种子生产与经营专业电泳法测定品种纯度的原理一、蛋白质电泳及其分类

蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术,称为电泳

。电泳的种类繁多。电泳按支持介质可分为薄膜电泳、凝胶电泳（淀粉凝胶电泳、琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳）。二、电泳法测定品种纯度的遗传基础1、目前品种纯度鉴定主要以蛋白质为电泳对象

不同品种的遗传基础DNA不同，其转录、翻译而成的蛋白质也不同。因此，分析蛋白质的差异从本质上说是分析遗传的差异，即品种的差异。

电泳法鉴定种子纯度主要利用电泳技术对品种的蛋白质的组分进行分析，找出品种间差异的生化指标，以此区分不同的品种，测定品种纯度。二、电泳法测定品种纯度的遗传基础2、蛋白质由数条氨基酸长链构成，而氨基酸为两性电解质

pH=pI+OH-pH>pI+H++OH-+H+pH<pI氨基酸的兼性离子阳离子阴离子三、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理作为电泳支持物的聚丙烯酰胺凝胶是丙烯酰胺通过交联剂（N，N-亚甲基双丙烯酰胺）在催化剂作用下聚合而成的高分子胶状聚合物（三维网状结构的凝胶）。

聚丙稀酰胺凝胶电泳（简称PAGE）因其凝胶透明度高、弹性好、无吸附性、浓度易控制，被广泛应用于蛋白质的电泳分离。三、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理1、分子筛效应

由于蛋白质分子的大小、形状不同，在电场作用下通过一定孔径的凝胶时，受到的阻力大小不同，小分子较易通过，大分子较难通过，从而在电泳凝胶上被分开，即所谓的分子筛效应。

凝胶就如同一张多孔的“筛子”，这些“筛子”起着分子筛的作用，经过一定时间的电泳，性质相同的蛋白质就运动在一起，性质不同的蛋白质就得到了分离。三、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理2、电荷效应

蛋白质带的电荷多少不同，受电场的作用力不同，带电荷多的分子受到的作用力大，移动较快；反之较慢。溶液的PH与蛋白质的PI相差越大，蛋白质带电荷越多。经过一定时间的电泳，性质相同的蛋白质就运动在一起，性质不同的蛋白质就得到了分离。三、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理

不同分子大小和不同电荷蛋白质混合溶液放在凝胶的顶部，贯穿凝胶这一个电场，蛋白质就会因带电荷而开始移动，在电荷效应和分子筛效应作用下样品提取液蛋白质就被分离成一些不连续的谱带。

经过这样的电泳分离后，蛋白质谱带就停留在凝胶板上，肉眼是看不见的，通过染色剂染色，可显示出蛋白质谱带。不同品种电泳分离后所形成的谱带也不同，与对照（标准）品种比较后可判断出其他品种的种子数量，以达到鉴定品种纯度的目的。三、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质的原理

蛋白质为两性电解质，在不同pH条件下所带电荷多少不同。对某一蛋白质来说，总有一个pH，带正电荷与负电荷多少一样，这个pH叫等电点（pI）。当pH＝pI（等电点）：电荷不移动。pH＞pI：碱性条件下，蛋白质将带负电荷。pH＜pI：酸性条件下，蛋白质将带正电荷。

不同的蛋白质由于氨基酸的组成不同，其等电点pI也

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