种苗快繁脱毒技术脱毒苗的繁殖和保存

种子生产基础《种苗快繁脱毒技术-脱毒苗的繁殖和保存》目录CONTENTS一脱毒苗的繁殖脱毒苗的保存二脱毒苗的繁殖一、脱毒苗的繁殖

脱毒苗的培育是很不容易的，因此一旦培育获得脱毒苗植株，就应尽快繁殖扩大以应用于生产。通常的繁殖方法是将得到的脱毒植株在无菌条件下切段繁殖，利用腋芽在离体培养条件下，诱导形成大量脱毒小苗。一、脱毒苗的繁殖离体条件下采用切段繁育获得的大量脱毒苗，应种植在防虫网室内，一般以使用300目的网纱为好，网眼为0.4～0.5mm大小的规格，可以防止昆虫类介体进入。栽培苗床的土壤应进行消毒，周围环境也要整洁，及时打药灭菌，保证种植的脱毒苗在远隔病毒传染源的条件下生长发育。有条件的地方可以找合适的海岛或高冷山地，气候凉爽，虫害少，有利于脱毒植株的生长、繁殖。

马铃薯良种生产体系（一）生产原原种利用脱毒苗生产无任何病害的原原种，是良种生产体系的核心。生产原原种可利用脱毒苗移栽法，但目前最经济有效的方法是用脱毒苗在温室（网室）中切段扦插。其优点有三：①节省投资。②繁殖速度快。③方法简单。一、脱毒苗的繁殖

（二）生产原种原原种生产成本高，生产的种薯数量有限，远不能用于生产，所以需要把原原种扩大繁殖，生产一级和二级原种。原种的生产规模比原原种大得多，不可能全用温室或网室。虽然如此，但仍需要生产高质量的种薯，特别是一级原种应接近完全健康。因而生产原种需要选择适当的地点。一、脱毒苗的繁殖

（二）生产原种原种生产田应具备的条件：①地势高寒，蚜虫少。②雾大、风大，有翅蚜虫不易飞迁、降落的地方。③天然隔离条件好，如森林中间的空地，四周环山的高地，海边土质好的岛屿等。④无传播病毒和细菌性病害的土地。一、脱毒苗的繁殖

（三）生产良种良种来自一级原种或二级原种。第一次用原种生产的种薯为一级良种，一级良种再种一次即为二级良种。一级原种的种薯量大时可直接用来生产一级良种，一级良种的种薯量大时可直接向种植户提供种薯。种植户生产的马铃薯只能供市场销售食用，不作种薯。但如果一级原种或一级良种的种薯量少，均可再繁殖一次到二级原种时才生产一级良种，把一级良种再繁殖一次的种薯供给种植户生产上用。一、脱毒苗的繁殖脱毒苗的保存二、脱毒苗的保存

（一）隔离保存应将脱毒原原种苗种植于防虫网室、栽在盆钵中保存。栽培基质应事先消毒处理。除去网室周围的杂草和易滋生蚜虫等传播媒介的植物，保证环境清洁，并定期喷药剂防虫杀菌。凡接触脱毒苗的工具应消毒并单独保管专用，操作人员也应穿消毒的工作服。若有条件，最好将脱毒苗母本园建在相对隔离的山上。对隔离保存的脱毒种苗要定期检测有病毒感染，及时将再感染的植株淘汰或重新脱毒。若管理得当，材料可保存5~10年。

（二）离体保存将无病毒苗原种的器官或幼小植株接种到培养基上，在低温下离体保存，是长期保存植物无病毒原种及其他优良种质的方法。

1．低温保存

2．超低温保存二、脱毒苗的保存1．低温保存茎尖或小植株接种到培养基上，置低温（1～9℃）、低光照下保存。低温下材料生长极缓慢，只需半年或一年更换培养基一次，此法又叫最小生长法。二、脱毒苗的保存2．超低温保存超低温主要指液氮（－196℃）及液氮蒸汽相条件。冷冻和化冻过程最易引起材料的伤害。原因主要有两个方面：一是细胞内部结冰，造成细胞结构的破坏，细胞死亡。二是细胞内溶质的浓缩。细胞质最初是高渗透压的，故一般先致细胞外结冰，增加了细胞外溶液的浓度，导致细胞膜内外的渗透压梯度发生反转，即细胞失水，并逐渐变为脱水状态。二、脱毒苗的保存植物材料在超低温下长期保存，并在解冻后正常地进行细胞分裂和分化，在冰冻过程中要避免细胞内水分结冰，在解冻过程中防止细胞内水分的次生结冰。冷冻保护剂有二甲基亚砜、聚乙二醇（PEG）、甘油及多种糖类等。二、脱毒苗的保存

（三）生长抑制保存

通过高渗、生长抑制剂以及其他一些措施达到延缓离体培养材料生长发育，延长继代转接时间，从而达到保存离体培养材料的目的。二、脱毒苗的保存1．生长抑制剂保存法是在培养基中加入生长抑制剂以减缓培养材料生长，达到长期保存种质材料的保存方法。常用的生长抑制剂有ABA、青鲜素、矮壮素（CCC）、多效唑、烯效唑、B9等，它们可以有效控制和延缓培养材料的生长速度，延长继代培养周期，而且可以使其生长健壮、叶色浓绿、移栽成活率极大提高。

二、脱毒苗的保存2．抑制生长的其它保存法（1）饥饿法从培养基中减去1～2种营养元素，使培养植株由于营养缺乏而处于最小生长量。（2）矿物油覆盖法利用矿物油覆盖培养材料使其与空气隔绝，延缓生长。如胡萝卜愈伤组织在覆盖一层植物油的试管中培养，26℃下，5个月继代一次，可以保存活力达3年。二、脱毒苗的保存2．抑制生长的其它保存法（3）低温、低光照培养法在低温条件下，适当减弱光照强度、缩短光照时间可以减缓试管苗生长。如16℃～20℃，光强1000lx的条件下（培养基加入1%甘露醇），草莓试管苗只能保存7个月。但在10℃、500lx光强下，草莓试管苗可以保存15个月，而且存活率在80%以上。二、脱毒苗的保存

（4）低压保存通过降低培养材料周围的气压，导致所有气体分压被降低，达到抑制生长的目的。低压保存包括低气压和低氧压两种。低氧压系统是在正常气压下，加入氮气等惰性气体，使氧分压降至较低水平。二、脱毒苗的保存（5）高渗保存法利用培养基的高渗透压来抑制离体培养材料生长的方法。如甘露醇、蔗糖、PEG等，它们是一类非代谢活性物质，可以有效提高培养基渗透压，抑制培养物对水分的利用，达到抑制培养材料生长的目的。高渗保存配合低温则具有良好效果，显著延长种质保存时间，提高存活率。如6℃～10℃低温下，培养基中加人4%甘露醇，可不转接连续保存马铃薯1～2年，存活率最高达90%以上。二、脱毒苗的保存

脱毒带来的好处可能被寄主植物对于致病性更强的病毒或真菌感病性的增加部分地抵消。病毒交叉保护现象（一种病毒的存在可使寄主植物有能力抵抗另一种病毒）现在已受到广泛的注意，不含PVX的马铃薯块茎在地上部分收割之后，若留在土中2～3周，对镰孢菌干腐病的敏感性比相应的受PVX侵染的块茎更强。二、脱毒苗的保存在日本，用通过茎尖培养得到的脱毒原种取代了受PVX