动物细胞培养和核移植技术

关于动物细胞培养和核移植技术PPT第1页，课件共24页，创作于2023年2月动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、单克隆抗体动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。提问：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养,植物体细胞杂交第2页，课件共24页，创作于2023年2月一、动物细胞培养原理：1、动物细胞培养过程细胞增殖（有丝分裂）2．2．1动物细胞培养和核移植技术第3页，课件共24页，创作于2023年2月

从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。一、动物细胞培养1、动物细胞培养的概念第4页，课件共24页，创作于2023年2月动物胚胎或幼龄动物的组织、器官（剪碎）细胞悬浮液无限增殖（细胞发生突变）单个细胞培养瓶中培养培养液稀释制备原代培养传代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶出现贴壁生长，接触抑制约10代以内细胞（正常的二倍体核型）约10-50代细胞（部分细胞核型改变）胰蛋白酶第5页，课件共24页，创作于2023年2月细胞悬浮液细胞贴满瓶壁50代细胞原代培养传代培养⑴原代培养:

将动物组织经胰蛋白酶等处理后的初次培养。⑵传代培养:

对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。第6页，课件共24页，创作于2023年2月动物组织单个细胞细胞悬液贴壁生长分瓶培养10代细胞50代细胞不死细胞原代培养传代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶剪碎加培养液接触抑制少数癌变少数动物细胞培养技术流程失去接触抑制现象细胞核型不变第7页，课件共24页，创作于2023年2月

当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖—细胞出现接触抑制。哪些细胞失去了接触抑制？

传代培养时，少数超过50代的细胞，由于遗传物质发生改变，可无限增殖，并失去了接触抑制——肿瘤细胞。⑶接触抑制第8页，课件共24页，创作于2023年2月动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞50代细胞细胞株无限传代（不死性）细胞系遗传物质改变遗传物质未改变第9页，课件共24页，创作于2023年2月例1、正常细胞在分裂时，只要和相邻细胞接触，就停止活动，不再分裂。这一现象称为“接触抑制”。对这一事实的有关推测，正确的有（）A．动物体细胞培养过程中，在遗传物质发生变化以后，只能形成单层细胞。B．癌细胞在体外培养时，不可能成为隆起的多层细胞。C．癌细胞不受“接触抑制”，这可能与它的细胞表面发生变化有关。D．单细胞生物分裂产生的子细胞，彼此间也存在“接触抑制”。C第10页，课件共24页，创作于2023年2月多细胞生物的细胞膜上存在着糖蛋白，细胞之间的信息识别功能使细胞间存在“接触抑制”。单细胞生物分裂产生的子细胞，能独立进行生命活动，不存在“接触抑制”。第11页，课件共24页，创作于2023年2月4、动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和PH

36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、气体环境：

O2和CO2（95%空气和5%CO2）

O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。保证细胞顺利的生长增殖维持培养液的PH第12页，课件共24页，创作于2023年2月

4、应用①、生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）。②、作为基因工程中的受体细胞。③、培养正常细胞或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究。④、培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。检测有毒物质毒性大小，原理是动物细胞经该物质处理后，根据变异率判断（畸变细胞所占的比例越大，说明该物质毒性越大）。第13页，课件共24页，创作于2023年2月思考：2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基2、成分中有动物血清等因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体第14页，课件共24页，创作于2023年2月小结：植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的全能性细胞增殖培养基性质固体培养基液体培养基培养基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖动物血清培养结果植物体细胞株、细胞系培养目的快速繁殖、培育无病毒植株获得细胞或细胞分泌蛋白第15页，课件共24页，创作于2023年2月二.动物细胞核移植技术和克隆动物

将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）。

分类胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易；细胞分化程度高，恢复全能性不容易1.动物细胞核移植概念：（难度高）第16页，课件共24页，创作于2023年2月卵母细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵母细胞第17页，课件共24页，创作于2023年2月电激处理使供体核进入受体卵母细胞构建重组胚胎卵母细胞采集、培养MⅡ中期卵母细胞供体牛供体细胞注入去核卵母细胞代孕母牛克隆牛体细胞培养去核卵母细胞去核胚胎移植2.体细胞核移植过程

（体细胞克隆动物）原理：动物细胞核具有全能性显微操作第18页，课件共24页，创作于2023年2月3.体细胞核移植技术的应用前景：1.加速家畜遗传改良的进程2.保护濒危物种3.生产医用蛋白质及组织器官的移植4.了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病第19页，课件共24页，创作于2023年2月4、体细胞核移植技术存在的问题P173（1）成功率非常低（2）克隆动物以表现早衰、生理缺陷等健康问题成功率低，绝大多数克隆动物存在健康问题并表现出遗传和生理缺陷：如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。第20页，课件共24页，创作于2023年2月在动物细胞培养的有关叙述中正确的是（）A.细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中B.动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等C.动物细胞培养的目的是获得大量的细胞D.动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理D第21页，课件共24页，创作于2023年2月治疗性克隆有希望最终解决供体器官的短缺和器官移植出现的排异反应。下图表示治疗性克隆的过程，下列说法正确的是第22页，课件共24页，创作于