2023学年完整公开课版藻种分离

生物饵料

培养技术

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藻种分离水产养殖技术专业教学资源库意义：

为了要进行某种藻类的科学研究或大量培养，有必要把某种藻类与其他生物分离。因为在培养和生产过程中要受敌害生物的污染，只有分离出”纯种”进行培养，才能获得好效果。藻种分离主要有以下四种。离心法趋向运动法稀释法平板分离法将混合藻液放入离心管中离心，水中不同藻类和微生物都向离心管底部下沉，但下沉的速度不一样，可将藻类分开。把不同时间下沉到管底的藻体取出镜检，选定含所需藻类较多的沉淀物，加培养液再离心，多次反复上述操作，可以获得具有一定纯度的所需藻种，但难以得到单一纯度。1.离心法（1）优点（2）缺点可消除细菌，并增加纯粹分离的可能性，至少可作为藻种平板培养的准备工作。另外，在水液中藻体含量较少时，可用此法集中藻体。不能做到使不同藻类完全分离。水产养殖技术专业教学资源库

离心法某些藻类具有趋向性。在用光照射时，就会向光照处集中，这时即可把集中的藻体取出而移入另一容器中。对于有鞭毛的或具游动孢子的种类，如衣藻、盐藻、扁藻等，都可利用此特性来分离藻种。将第一次获得的藻体部分，移入已消毒的培养液中，再反复利用这种方法来分离，结果可得到有一定纯度的藻体。这种分离效果较好，但只能用于运动型微藻。2.趋向运动法

把含有需要分离的藻类而又混杂有其他生物的水样，取其一定量，用培养液稀释。通过稀释到适宜程度的方法，达到把原混杂生物单个分离培养的目的。3.稀释法

稀释法用已消毒的试管5根，第一管中装培养液9毫升，第2-5管中各装9毫升，高压蒸汽灭菌冷却后，向第一管中加入1毫升混合藻液，充分震荡，使均匀稀释。用灭过菌的吸管自第一管中吸取）1毫升混合液移入第2管中，震荡使均匀稀释。同法依次移入第3-5管中，并都充分震荡均匀稀释，将5个试管中的藻液分别取1毫升加入5个已灭菌的培养皿中，然后把加热灭过菌冷却而尚未凝固的琼脂培养基加入培养皿，将加了培养基的培养皿顺时针转三次，逆时针转三次，前后摇动两次，使藻液和培养基混匀。待凝固后，将培养皿放在漫射光下培养，一直到出现藻群落为止，一般来说，在20℃左右，约10天即可出现藻群落。此法操作比较简单，容易成功。

稀释法这个方法的培养基制备和分离方法，与菌类的平板分离法基本相同，只是培养基配方不同。也可将稀释藻液装入消毒过的小型喷雾器中（可使用医用喉头喷雾器），打开培养皿盖，把藻液喷射在培养基平面上，形成分布均匀的薄层水珠。接种后，盖上盖，放在适宜的光、温条件下培养。一般经过十余天，就可在培养基上发生互相隔离的藻类群落，通过显微镜检查，寻找需要的纯藻群落，然后用消毒过的接种环移植到另一平板培养基培养，也可直接移植到装有培养液并经过灭菌的试管或小三角烧瓶中，加消毒棉花塞子，进行培养。培养过程中每天轻轻摇动1-2次，摇动时避免培养液沾湿棉花塞。经过一段时间培养，藻类生长繁殖数量较多，再经一次显微镜检查，如无其他生物混杂，才达到分离的目的。如还有其他生物混杂，则再分离，直到获得单种培养为止。4.平板法水产养殖技术专业教学资源库（1）平板培养基制备选择恰当的无机培养液，加入1％琼脂（剪成细条）放在培养液中浸泡加热融化，搅拌，并且补充蒸发掉的水分分装：冷却后分装在培养皿中，约0.3～0.5cm厚灭菌：高压蒸气灭菌，间歇蒸气灭菌（2）喷雾法喷雾法：在无菌条件下用经消毒的培养液把水样稀释到合适的浓度，装入消毒好的医用喉头喷雾器中，打开培养皿盖，把水样喷射到培养基平面上，使水样在培养基平面上形成分布均匀的一薄层水珠。盖上盖，放在合适的培养条件下培养。（3）水样稀释程度水样稀释程度水样喷射的培养基平面上必须相隔1厘米以上才有一个生物（或一个藻细胞），将来生长繁殖成一群体后容易分离取出。稀释不够，将来生成的藻细胞群落距离太近，不容易分离。（4）划线法水样不用稀释，取金属接种环在酒精灯火焰上灭菌后，在液体培养基中冷却，蘸取水样轻轻在培养基上做第一次平行划线3条，转动培养皿约70度，将接种环上剩余物烧掉，通过第一次划线部位做第二次平行划线，用同法再做第三次和第四次划线。主要划线部位不可重叠。由于沾到接种环上细胞较多，在第一次划线部分藻细胞群落密集分离不开，但在第三、四次划线部分，可分离出孤立的藻类群落。选直径5mm的细玻璃管在酒精喷灯上拉成极细的微吸管（口径0.008～0.16mm），将稀释的藻液置于凹玻片上（或将水样在载玻片上滴成绿豆粒大小的一些水滴，这样可使每个水滴中有很少生物而便于分离）在解剖镜下用微吸管吸出所需要的藻种放入另一凹玻片上（用蒸馏水或平衡矿物质溶液冲洗数次），镜检这滴水中是否达到纯的要求如不纯要反复数次，直至达到分离的目的为止，然后移入灭菌的培养液中进行培养（先导入有培养基的小培养皿中培养，待生长旺盛后，再扩大培养）。5.微吸管法此种方法适合于大型藻类和浮游动物。技术操作要求高，细心，吸取一个细胞要反复几次才能成功。用微吸管吸取稀释适度的藻液，滴到消毒过的载玻片上，水滴尽可能小，能在镜下（低倍）看到整个视野的全部水滴或大部分，一个载玻片上放2～4滴，作直线排列，水滴间要有一定的距，如果一滴水内有1至几个所需要的同种藻细胞