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文档简介
种子生产与经营专业玉米种子盐溶蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳操作程序
从玉米种子中提取的盐溶蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应、浓缩效应和电泳系统的电荷效应作用下得到良好的分离，通过显色显示蛋白质谱带类型。
不同玉米品种由于遗传基础不同，种子内所含的蛋白质种类也有差异，这种差异可利用电泳图谱加以鉴别，从而对品种真实性和纯度进行鉴定。一、样品制备
从送验样品中随机数取玉米种子100粒在单粒粉碎器中单粒粉碎后，分别收集到1.5ml离心管中，按体积比约1:1的量加入样品提取液，摇匀，放置5min后，再摇一次，30min后，用离心机离心15min，取上清液点样。一、样品制备一、样品制备二、凝胶制备
1、胶室制备
将洗净晾干的两块玻璃板装入胶条中，然后将胶条固定在电泳槽内，保持水平，短板向正极，拧紧螺栓，备用。二、凝胶制备2、封底缝
根据电泳槽大小，取适量分离胶溶液于烧杯中，用微量进样器加入适量3%的过氧化氢溶液（一般5ml胶液，加20μl3%的过氧化氢溶液）迅速摇匀，并从长玻璃板外侧沿玻璃板倒下，放正电泳槽震动几下，5min后胶液凝固，将底缝封住。二、凝胶制备
3、灌分离胶
量取分离胶混合液适量，加入3%过氧化氢溶液（一般每15ml分离胶液，加20μl3%的过氧化氢溶液）迅速摇匀，将电泳槽倾斜，将分离胶混合液倒入两玻璃板之间，高度距短玻璃板上沿1.2cm，放正电泳槽并在实验台上振动几下后，迅速用预先准备好的注射器沿玻璃板上沿注入正丁醇溶液（注意：动作要轻，不能冲坏胶面）。5~10min后胶凝固，用注射器吸出胶面上的正丁醇溶液，并用去离子水冲洗胶面2~3次，倒出去离子水，用滤纸吸干二、凝胶制备
4、灌浓缩胶
量取浓缩胶混合液适量，加入3%过氧化氢溶液（一般每5ml浓缩胶液，加40μl3%的过氧化氢溶液）迅速摇匀，倒入两玻璃板之间，马上插好样品梳，用夹子夹住。二、凝胶制备三、点样
小心拔出样梳，吸去样品槽中的水，用微量进样器吸取5~20μl玉米蛋白质提取液上清液，依次在样品槽中按粒点样，每点一次后，要用去离子水清洗进样器2~3次。四、电泳
1、注入电极缓冲液（上槽浸没样品槽，下槽超过铂丝）。2、打开电泳仪电源，将电压调到500v。3、甲基绿指示剂绿线下移至胶底部边缘0.5~1.0cm处时，关闭电泳仪。四、电泳五、染色1、卸板
到出电极缓冲液，将玻璃板和密封胶条一同取出，卸下密封胶条，用不锈钢刀撬开玻璃，用拨板针剥离凝胶板，剥离完后将凝胶板进入染色液中。2、染色
染色时间12h。3、洗板
将染色过的胶板放入白磁盘中，用刷子沾取的0.5%洗衣粉水洗刷胶板表面，然后用水冲洗干净。五、染色六、鉴定
不同品种的电泳图谱可按其数目、宽窄、颜色、深浅、相对迁移率等进行鉴别。
根据醇溶
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