常职院仪器分析测试技术课件5-5高效液相色谱法：分离原理

kDO」任务5高效液相色谱法分离原理~液相色谱分析法模块之pus业主□:田TO怕口口1米T王IX器幻軌》精品课程〜能力目标□理解已知分析方法中采用的色谱类型□能够正确解释色谱分离过程□能够根据组分性质选择合适的色谱类型〜课程引入IX器幻軌》精品课程口归一化法测定分析纯甲苯试剂的纯度色谱柱:4.6mmx150mm固定相：十八烷基硅烷键合相(ODS)流动相:水:甲醇=15:85口外标法测定叶酸片中叶酸的含量色谱柱:4.6mmx250mm固定相：十八烷基硅烷键合相(ODS)流动相:磷酸二氢钠缓冲液:甲醇=80:20〜课程引入IX器幻軌》精品课程口液相色谱是如何完成混合物的分离?混合物中各组分在固定相和流动相之间会发生吸附、溶解或其他亲和作用，这种作用存在差异，从而使各组分在色谱柱中的迁移速度不同得到分离A石油醚色素-＞碳酸钙颗粒玻璃柱＜0〜液液分配色谱IX器幻軌》精品课程口液液分配色谱法实例：归一化法测定分析纯甲苯试剂的纯度色谱柱:4.6mmx150mm固定相：十八烷基硅烷键合相(ODS)流动相:水:甲醇=15:85〜液液分配色谱IX器幻軌》精品课程口液液分配色谱法0固定相___◊将特定的液态物质涂于担体表面如c18

(十八烷基硅烷)、c8

(辛烷基)、氨基键合硅胶0固定相类型◊极性固定相：正相色谱以极性有机基团如胺基(-NH2)、腈基(-CN)、醚基(-0-)等键合在硅胶表面制成的◊非极性固定相：反相色谱反相色谱法最常用的固定相是C18、C8和苯基键合相的填料，在分离极性很大的化合物时，也可以采用氨基、氤基等极性基团键合固定相。〜键合相色谱一固定相IX器幻軌》精品课程匕口使用条件0为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值,但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5〜7.5（2~8）。0太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。口特点0使用过程中不流失0均一性和化学稳定性好0重现性好分离效率高0适于梯度洗脱0传质阻抗小〜键合相色谱一流动相IX器幻軌》精品课程口反相色谱0常见流动相流动相洗脱强度顺序：水V甲醇V乙睛V乙醇V四氢吠喃V丙醇V二氯甲烷（与水不混溶）若采用含一定比例的甲醇或乙睛的水溶液作流动相，可用于分离极性化合物•:•若采用水和无机盐的缓冲液为流动相，则可分离一些易离解的样品，如有机酸、有机碱、酚类等0常见固定相反相色谱法最常用的固定相是C18、C8和苯基键合相的填料，在分离极性很大的化合物时，也可以采用氨基、氰基等极性基团键合固定相。〜反相色谱法的分离机理1IX器幻軌》精品课程口疏溶剂理论：当溶质分子进入极性流动相后，即占据流动相中相应的空间，而排挤一部分溶剂分子；当溶质分子被流动相推动和固定相接触时，溶质分子的非极性部分或非极性分子）会将非极性固定相上附着的溶剂膜排挤开，直接和非极性固定相上的烷基官能团相结合（吸附）形成缔合物，构成单分子吸附层；当流动相极性减小时，这种疏溶剂斥力下降，会发生解缔，并把溶质分子释放而被洗脱下来溶剂膜表示缔合物的形成非极性烷基键合相，溶质分子的*機性官能团0表示缔合物的解缔溶质分子的非极性部分VWW〜反相键合相色谱法的分离机理2、IX器幻軌》精品课程口影响溶质保留的三个主要因素：___0溶质分子中非极性部分的总表面积溶质和固定相接触的总表面积愈大，保留值愈大，所以溶质的极性愈弱,疏水性越强，保留值越大。0键合相上的烷基总面积烷基键合固定相的作用在于提供非极性的作用表面。随着碳链的加长，烷基的疏水特性增强，溶质的保留值也随烷基碳链长度的增加而增大。0流动相的表面张力流动相的表面张力愈大，介电常数愈大，极性亦愈强；溶质和烷基键合相的缔合作用愈强，流动相的洗脱强度弱，导致溶质的保留值大。〜分离机理实例IX器幻軌》精品课程例：反相键合色谱中，键合相碳链越长，分离效果越好。固定相：C162345亠1丨II1IIIII02468固定相：C8固定相：C18时间，min0246810121416182022241-尿嘧啶；2-苯酚；3-乙酰苯；4-硝基苯；5-苯甲酸甲酯；6-甲苯〜液液分配色谱IX器幻軌》精品课程正相色谱法反相色谱法1.极性固定相1.非极性固定相聚乙二醇、氨基与睛基键合相G8（简称ODS）、C82.相对非极性流动相2.极性流动相正已烷、环已烷水或缓冲液3.极性调节剂3.极性调节剂乙醇、四氢吠喃、三氯甲烷甲醇、乙睛、四氢吠喃4.分离中等极性和极性较强化合物.4.分离非极性和极性较弱化合物酚类、胺类、羰基类及氨基酸类占整个HPLC应用的80%左右5.组分流岀顺序5.组分流岀顺序极性小先洗岀极性大先洗岀〜其他类型色谱法IX器幻軌》精品课程口其他类型色谱法按分离机制分类：0液固吸附色谱法0离子色谱法0凝胶色谱法（分子排阻色谱法）（空间排阻色谱法）〜液固吸附色谱实例口氯化噻吩嗪四种异构体的分离异构体具有不同的空间排列方式，因此吸附剂对它们的吸附能力有所不同，从而得到了分离。氯化噻吩嗪四种异构体的分离色谱图〜液固吸附色谱口液固吸附色谱法固定相：吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5-10卩m流动相：有机溶剂适用于分离分子量200-100。的组分，大多数用于非离子型化合物的分离，常用于分离同分异构体。□各组分的岀峰顺序极性较小组分，吸附力较弱，容易解吸，先流岀。极性较大组分滞留作用大，后流岀。饱和烃<烯<芳烃<醚<醛酮<酸、IX器幻軌》精品课程TH口口l米枉頌液固吸附色谱分离机理口液固吸附色谱法分离机理吸附溶剂（流动相）脱附再吸附V再脱附分离过程是一个吸附-脱附的平衡过程。〜离子色谱法实例IX器幻軌》精品课程口离子交换色谱法0油田水质中的阴离子分析固定相：薄壳型阴离子交换树脂（3x250mm）流动相：0.003molL1NaHCO3

/0.0024mol-L-1Na2CO3〜离子交换色谱法IX器幻軌》精品课程口离子交换色谱法固定相:离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架,______在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基阳离子交换树脂________在表面未端芳环上接上季胺基月离子交换树脂____流动相：电解质溶液、有机弱酸或有机弱酸盐溶液CO32-HCO3〜离子交换色谱法分离机理口离子交换色谱法0分离原理___树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换而分离。0应用离子交换色谱法主要用于分析阴，阳离子，凡是在溶剂中能够电离的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。0分析物质有机酸、氨基酸、多肽及核酸。、IX器幻軌》精品课程〜凝胶色谱法实例IX器幻軌》精品课程口凝胶色谱（分子排阻色谱法）0油田用驱油剂聚丙烯酰胺损失量的测定?色谱柱：150mmx46mm固定相：二醇基键合相，孔径200A,粒径5u流动相:甲醇/0.05mol/LNQH2PC>41-聚丙烯酰胺__2-原油+石油磺酸盐+氯化钠凝胶色谱分离示意图□凝胶色谱：(分子排阻色谱法)分离机理-以凝胶(gel)为固定相。它类似于分子筛，但凝胶的孔径比分子筛要大得多。-小分子量的化合物可以进入孔中，__滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流岀。-常用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。〜凝胶色谱分离机理IX器幻軌》精品课程固定相〜色谱类型选择IX器幻軌》精品课程口正确地选择色谱类型尽可能多的了解样品性质0化学结构0极性和稳定程度0水中和有机溶剂中溶解度0相对分子质量的大小0熟悉各种色谱类型主要特点应用范围〜色谱类型选择业主a;田xn怕口口1米枉素液相色谱分萬类型选择参考表样品—L低极性一反相，含水移动相非高子型一相对分子质量<1离子型一一碱性一阳离子交换L溶于水——排阻色谱，水为流动相排阻色谱，非水流动相I-中高极性一液固或正相F酸性一阴离子交换相对分子质拭>2000*—不溶于水IX器幻軌》精品课程〜液相色谱法实例□按固定相与流动相相对极性的不同，液液分配色谱可分为哪两类方法？现在有