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B41备案号：34651-2012DB442012-06-04发布2012-09-15实施本标准起草单位：中国水产科学研究院南海水产研究所、咸阳师范学院、武汉工业学院、西北农1本标准规定了鱼类血样的采集、血液非特异性免疫指标的检测项目和检测本标准适用于鱼体的血液非特异性免疫指标检测，其他水产养成品可下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。SC/T7014水生动物检疫实验技术规范3.2将鱼迅速捞入浓度为200mg/L的间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐(MS-222)中做0.5min～1min3.3每份血样分为两份，一份以肝素抗凝，另一份以3000r/min转速在4℃下离心10min,获得血清，置4℃冰箱备用，尽早检测，放置时间不超过一周。血液溶菌酶活性、血液杀菌活性、血液白细胞吞噬活性、血液白细胞压积、血液红细胞压积、血5检测方法按分光光度计法进行，测定波长为540nm。用0.5%NaC1溶液配制浓度为0.2mg/mL的溶壁微球菌 (Microcococcuslysodeikticus)菌液。取5风血清加入3mL菌液中，反应0.5min后记录吸光值OD,4.5min后记录吸光值OD₂,以1min内吸光值下降0.001为1个活性单位(U),按公式(1)计算。5.2血液杀菌活性检测在无菌条件下，用0.5%NaCl溶液将河弧菌(Vibrofluvialis)配成10⁶个/mL的菌悬液。50风血清加入到等量菌悬液中，22℃孵育5h后，将混合液做10倍、100倍、1000倍稀释，不同稀释度各取10替50血清加入等量菌悬液作为阳性对照。结果用杀菌百分率表示，按公式(2)计算。2X——为杀菌百分率，单位为百分比(%);5.3血液白细胞吞噬活性检测取抗凝血以600r/min离心10min,收集白细胞层，用RPMI1640细胞培养液将浓度调整至1.0×10⁵100个白细胞中吞噬细菌的白细胞数及所吞噬的细菌总数，按公式(3)和公式(4)分别求出吞噬百分吞噬百分率(%)=(吞噬细菌的白细胞数/100)×100 吞噬指数=100个白细胞所吞噬的细菌总数/100 5.4血液白细胞压积和红细胞压积检测将抗凝血吸入压积管中，置水平离心机内，以2000r/min转速在22℃下离心30min,小心取出压积管，用游标卡尺量出白细胞和红细胞压积的厚度，分别计算其占总血全长的百分比，即为白细胞压积值和红细胞压积值。按公式(5)和公式(6)计算。白细胞压积值(%)=(白细胞压积厚度/总血全长)×100 红细胞压积值(%)=(红细胞压积厚度/总血全长)×100 5.5血液淋巴细胞计数检测取50风抗凝血用Giemsa染液做30倍稀释，XB

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