菊花的组织培养课件

专题3植物组织培养课题1：菊花的组织培养目前一页\总数三十六页\编于十七点一、基础知识1、植物的组织培养（1）细胞的分化①概念：在个体发育中，相同细胞的后代在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程目前二页\总数三十六页\编于十七点（3）植物组织培养细胞离体①必要条件：一定的营养物质、激素和其他外界条件②原理:细胞的全能性从活植物体上切下进行培养的那部分组织或器官③相关概念:外植体：目前三页\总数三十六页\编于十七点由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再分化。细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞。愈伤组织：脱分化：再分化：目前四页\总数三十六页\编于十七点目前五页\总数三十六页\编于十七点目前六页\总数三十六页\编于十七点2、影响植物组织培养的因素（1）植物材料的选择烟草和胡萝卜的组织培养较为容易枸杞愈伤组织的芽诱导比较难同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝目前七页\总数三十六页\编于十七点目前八页\总数三十六页\编于十七点（2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置不同的培养基MS培养基主要成分包括：A、大量元素:N、P、S、K、Ca、Mg等B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co等C、有机物、植物激素目前九页\总数三十六页\编于十七点讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞对特殊营养的需求。微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养。

目前十页\总数三十六页\编于十七点①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素生长素类：2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA）细胞分裂素类：激动素（KT）、6－苄基嘌呤（6－BA）、玉米素（ZT）赤霉素类：赤霉酸（GA3）（3）植物激素的影响目前十一页\总数三十六页\编于十七点②生长素和细胞分裂素作用植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势使用顺序实验结果先使用生长素，后使用细胞分裂素有利于细胞分裂，但不利分化先使用细胞分裂素后使用生长素细胞既分裂也分化同时使用分化频率提高目前十二页\总数三十六页\编于十七点生长素细胞分裂素：>有利于根的分化生长素细胞分裂素：<有利于芽的分化，抑制根的分化生长素细胞分裂素：＝促进愈伤组织生长③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响（4）pH、温度、光照pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日光灯照射12h目前十三页\总数三十六页\编于十七点3、植物组织培养过程:植物体脱分化细胞分裂素≈生长素愈伤组织芽根细胞分裂素>生长素细胞分裂素<生长素再分化植物细胞培养不需要光需要光离体组织、器官或细胞目前十四页\总数三十六页\编于十七点1、培育无病毒植株2、培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法4、植物组织培养的应用：3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题目前十五页\总数三十六页\编于十七点人工种子目前十六页\总数三十六页\编于十七点二、实验操作（一）制备MS固体培养基MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4℃保存配制好的培养基母液来制备。1、配置各种母液目前十七页\总数三十六页\编于十七点①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存。②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液。③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。目前十八页\总数三十六页\编于十七点2、配置培养基分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml。①配制培养基（固体）②调PH③培养基的分装由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。目前十九页\总数三十六页\编于十七点3、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒2、消毒①流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右。目前二十页\总数三十六页\编于十七点②酒精处理用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。③消毒液处理取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液。目前二十一页\总数三十六页\编于十七点（三）接种污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭擦洗工作台并用紫外线照射20分钟。1、接种室消毒2、无菌操作要求操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。3、材料的切取和接种目前二十二页\总数三十六页\编于十七点目前二十三页\总数三十六页\编于十七点4、接种注意事项①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种。②外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，每瓶接种6－8块外植体。③插入时应注意方向，不要倒插。目前二十四页\总数三十六页\编于十七点思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实验吗？答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养，用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。目前二十五页\总数三十六页\编于十七点（四）培养接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养，培养期间应定期消毒。培养温度控制在18-22℃，并且每日用日光灯光照12小时。目前二十六页\总数三十六页\编于十七点（五）移栽移栽生根的菊花试管苗之前，应先打开培养瓶的封口膜，让试管苗在培养间生长几日。1、打开封口膜2、清洗转移用流水清洗根部的培养基，将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境下生活一段时间。目前二十七页\总数三十六页\编于十七点（六）栽培3、移栽珍珠岩：固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培。幼苗长壮后，移栽到土壤中。幼苗移栽后，每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。目前二十八页\总数三十六页\编于十七点目前二十九页\总数三十六页\编于十七点三、课题延伸1、一般来说，容易进行无性繁殖的植物，也容易进行组织培养。2、实例：芦荟、豆瓣绿、秋海棠、月季目前三十页\总数三十六页\编于十七点目前三十一页\总数三十六页\编于十七点基础知识（一）植物组织培养的基本过程植物的组织培养技术目前三十二页\总数三十六页\编于十七点不同的植物组织同一植物的不同材料营养、环境条件植物激素（二）影响植物组织培养的因素目前三十三页\总数三十六页\编于十七点制备MS固体培养基

1、配制母液2、配制培养基3、灭菌外植体消毒接种培养移栽栽培实验操作目前三十四页\总数三十六页\编于十七点结果分析与评价（一）对接种操作中污染情况的分析（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化（三）是否进行了统计、对照与记录（四）生根苗的移栽是否合格目前三十五页\总数三十六页\编于十七点课后习题：1、F2代紫色甜玉米的基因型组成可能为Aasusu或AAsusu。如果运用常规育种方法，将F2代中的紫色甜玉米分别自交，分别收获紫色甜玉