自身免疫性疾病及其免疫检测

常见自身免疫性疾病的自身抗体检测

自身抗体（autoantibody）是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗体(谱)

分类:

脏器特异性自身抗体

脏器非特异性自身抗体目前一页\总数六十三页\编于二十二点自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关参与免疫病理性损伤一、自身抗体的特性目前二页\总数六十三页\编于二十二点自身抗体免疫球蛋白补体淋巴细胞细胞因子自身免疫性疾病的主要实验检测目前三页\总数六十三页\编于二十二点

1948年Haragraves等发现LE细胞现象

1957年Holborow等应用IIF检测ANA1961年Beck等发现ANA不同荧光染色模型

60–70年代IIF、ID、CIE应用新的自身抗体

1979年Towbin等应用免疫印迹技术检测自身抗体

80年代IB、RIP应用蛋白多肽水平认识自身抗原

1987年DNA基因重组技术开始应用自身抗体研究近十年应用分子生物学技术自身抗体研究发展简史目前四页\总数六十三页\编于二十二点抗核抗体（ANA）抗可提取性核抗原抗体（ENA）抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）类风湿因子（RF）抗角蛋白抗体（AKA）抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）抗心磷脂抗体（ACLA）常检测的自身抗体目前五页\总数六十三页\编于二十二点标志抗体相关疾病dsDNASLESmSLESSBSS着丝点抗体PSS（局限型）Scl-70抗体PSS（弥漫型）AKA、抗CCP抗体RAJo-1抗体PM/DM（进行性系统性硬皮病）高滴度RNP抗体MCTD肝肾微粒体抗体（LKM-1）Ⅱ型自身免疫性肝炎平滑肌抗体（SMA）Ⅰ型自身免疫性肝炎AMA（M2）PBC常见自身免疫性疾病的标志抗体目前六页\总数六十三页\编于二十二点间接免疫荧光法（IIF）ELISA免疫印迹法（Western-blot）酶免疫斑点法检测自身抗体常用的方法目前七页\总数六十三页\编于二十二点

抗核抗体::以真核细胞（如HEp-2细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。二、抗核抗体的检测与应用目前八页\总数六十三页\编于二十二点抗核抗体谱目前九页\总数六十三页\编于二十二点以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗体等；以相关疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗体等；以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；以抗原的化学名称分类命名，如抗DNA、抗RNP、抗组蛋白抗体,抗核小体抗体等。抗核抗体谱的分类和命名目前十页\总数六十三页\编于二十二点间接免疫荧光法（indirectimmunofluorescence,IIF）酶免疫斑点法ELISA免疫印迹法

（Western-blot）

抗核抗体检测方法目前十一页\总数六十三页\编于二十二点间接免疫荧光法示意图HEp-2细胞肝组织切片荧光标记抗体病人血清（待检抗体）目前十二页\总数六十三页\编于二十二点

细胞核细胞浆细胞骨架细胞周期

均质型核糖体型肌蛋白型中心体型斑点型线粒体型波形纤维蛋白型纺缍体型核仁型高尔基体型细胞角蛋白型纺缍丝型着丝点型溶酶体型原肌球蛋白型中间体型周边型颗粒型纽带蛋白型PCNA型核点型(dots)IIF检测ANA荧光染色模型目前十三页\总数六十三页\编于二十二点斑点型（nRNP/Sm）

高滴度的抗U1-nRNP为MCTD的特征。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性。斑点型（SSA/SSB）抗SSA最常出现于SS及新生儿红斑狼疮（100%）。抗SSB抗体几乎仅见于女性，可出现于SS和SLE。目前十四页\总数六十三页\编于二十二点均质型

抗dsDNA抗体抗组蛋白抗体(histone)抗ssDNA抗体抗核小体抗体(nucleosome)目前十五页\总数六十三页\编于二十二点周边型

可见于胶原病、PBC、CAH等患者

目前十六页\总数六十三页\编于二十二点核点型（DOTS）

见于SLE、SS、PBC、风湿病

抗着丝点型

PSS局限型标志抗体目前十七页\总数六十三页\编于二十二点抗原纤维蛋白型

仅见于5%～10%的PSS，男性高于女性

抗RNA多聚酶Ⅰ型抗体

仅见于硬皮病患者，阳性率为4%目前十八页\总数六十三页\编于二十二点抗PM-Scl（PM-1）抗体

见于重叠综合征（多发性肌炎PM/皮肌炎DM/弥漫性PSS）

目前十九页\总数六十三页\编于二十二点抗Scl-70型

PSS弥漫型的标志抗体目前二十页\总数六十三页\编于二十二点增殖细胞核抗原Ⅰ型（PCNA）

SLE特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关目前二十一页\总数六十三页\编于二十二点抗核糖体P蛋白（rib-P）抗体抗线粒体抗体（AMA）SLE标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体目前二十二页\总数六十三页\编于二十二点抗Jo-1抗体抗高尔基体抗体多发性肌炎（PM）标志抗体偶见于SLE和SS目前二十三页\总数六十三页\编于二十二点抗肌动蛋白抗体见于自身免疫性慢性活动型肝炎

目前二十四页\总数六十三页\编于二十二点抗双链DNA抗体

抗dsDNA抗体与细胞核DNA（外围区）脱氧核糖磷酸框架结合。

抗dsDNA抗体是SLE患者的特征性标志抗体。其抗体滴度与疾病的活动程度有相关性，抗体滴度的动态测定为监控治疗提供了有效的实验室手段。抗双链DNA抗体目前二十五页\总数六十三页\编于二十二点检测方法及应用间接免疫荧光检测，是目前国内外临床常规检测抗dsDNA抗体最常用的方法。抗dsDNA抗体诊断SLE的特异性可达95%～100%，但其敏感性仅为30%～50%，因此抗dsDNA抗体阴性不能排除SLE的诊断。检测方法及应用目前二十六页\总数六十三页\编于二十二点

抗dsDNA抗体SLE特异性抗体，与病情活动度相关。目前二十七页\总数六十三页\编于二十二点抗核小体抗体

核小体（nucleosome）是真核生物细胞核染色质的基本单位。凋亡细胞是核小体的重要来源，当SLE患者的吞噬细胞对凋亡细胞的清除能力受损或降低，导致核小体在患者体内大量存积，激活B细胞产生抗核小体抗体（Antinucleosomeantibody,AnuA）。

目前二十八页\总数六十三页\编于二十二点检测及应用AnuA的检测通常采用ELISA检测法。AnuA具有同抗ds-DNA抗体相同的诊断特异性，可达到95%，在系统性硬化（SSc）病中可有20%～50%低浓度阳性率，其他自身免疫性疾病中该抗体均为阴性。AnuA的表达与SLE病情活动分数相关。检测及应用目前二十九页\总数六十三页\编于二十二点

抗ENA抗体谱:可提取核抗原抗体的总称

临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括：

抗Sm抗U1-RNP抗SSA抗SSB抗Jo-1抗Scl-70抗rib-P蛋白三、抗ENA抗体谱的检测与应用目前三十页\总数六十三页\编于二十二点抗可提取性核抗原（ENA）抗体目前三十一页\总数六十三页\编于二十二点

双向免疫扩散（ID）对流免疫电泳（CIE）免疫印迹法（Western-blot）

ELISA酶免疫斑点法ENA检测方法目前三十二页\总数六十三页\编于二十二点免疫印迹法

SDS电泳转移电泳酶免疫检测免疫印迹法目前三十三页\总数六十三页\编于二十二点目前三十四页\总数六十三页\编于二十二点抗可提取性核抗原（ENA）抗体抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%~30%）抗nRNP抗体：MCTD95%~100%（高滴度）抗SSA抗体：PSS60%~75%，其它CTD抗SSB抗体：

PSS10%~40%，其它CTD抗Scl-70抗体：SSc25%~75%,标记性抗体抗Jo-1抗体：PM/DM25%，标记性抗体抗rRNP抗体：

SLE特异性抗体（10%~30%）目前三十五页\总数六十三页\编于二十二点抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA）是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。

四、与小血管炎相关的自身抗体检测与应用目前三十六页\总数六十三页\编于二十二点

荧光染色型

靶抗原

胞浆型(cANCA)

蛋白酶3（PR3）杀菌/通透性增高蛋白（BPI）

核周型(pANCA)髓过氧化物酶（MPO）组织蛋白酶G（Cath-G）乳铁蛋白（LF）白细胞弹性蛋白酶（HLE）

非典型型(aANCA)兼有两种特性ANCA荧光染色型与靶抗原目前三十七页\总数六十三页\编于二十二点周边型抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCA）主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）目前三十八页\总数六十三页\编于二十二点胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA)主要见于Wegener’s肉芽肿及微小多动脉炎目前三十九页\总数六十三页\编于二十二点

ANCA临床应用

髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管炎、坏死性新月体型肾小球肾炎、过敏性肉芽肿性血管炎相关杀菌/通透性增高蛋白（BPI）主要见于肺部炎症性疾病并与长期慢性绿脓杆菌感染有一定关系

蛋白酶3（PR3）与Wegener’s肉芽肿（WG）密切相关。仅cANCA诊断WG的特异性大于90%，联合PR3可超过95%，活动期几乎100%阳性。

组织蛋白酶G(Cath-G)白细胞弹性蛋白酶(HLE)乳铁蛋白(LF)可见于SLE、IBD、PBC、PSC等目前四十页\总数六十三页\编于二十二点RA早期诊断相关自身抗体

抗角质层蛋白抗体（AKA）：1979年Young等报告靶抗原：filaggrin（40KD）抗核周因子（APF):1964年Nienhuis等报告靶抗原：profilaggrin（37-41KD）及其降解产物抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）：1993年Simon等报告靶抗原：filaggrin（40KD）抗Sa抗体：1994年Despres等报告靶抗原:50/55KD非酰基多肽，半抗原-瓜氨酸抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）：1998Schellekens五、与RA相关自身抗体的检测与应用目前四十一页\总数六十三页\编于二十二点

类风湿因子（rheumatoidfactor,RF）为抗变性IgGFc的自身抗体，主要是IgM型

致病机理：RF与体内变性IgG结合形成免疫复合物，激活补体或被吞噬细胞吞噬，产生炎性介质导致组织炎性损伤，使患者发生骨关节炎及血管炎。目前四十二页\总数六十三页\编于二十二点1.胶乳颗粒凝集实验定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定IgM-RF

2.速率散射比浊法（ARRAY、IMAGE）定量、准确、快速，测定IgM-RF

3.ELISA定量、准确，可测定不同类型的RF检测方法目前四十三页\总数六十三页\编于二十二点

（1）RF在RA、SLE、PSS等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。疾病阳性率（%）RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25临床应用目前四十四页\总数六十三页\编于二十二点（2）RF滴度与RA患者临床表现呈正相关，

IgM-RF效价>80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。

（3）IgG-RF与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节

症状密切相关，常伴随IgM-RF同时出现，在正常人及非RA患者中很难检出。

（4）IgA-RF与RA患者关节症状的严重程度及骨质破坏有显著相关性。目前四十五页\总数六十三页\编于二十二点AKA主要见于RA，阳性率36%~59%，特异性95%~99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的RA类型。抗角蛋白抗体（AKA）目前四十六页\总数六十三页\编于二十二点常用方法：ELISA临床意义：RA特异性自身抗体，敏感性65%~85%，特异性为94%~98%；高浓度抗CCP抗体是RA发生关节侵蚀的危险因子之一，定量检测有助于判断预后。抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）目前四十七页\总数六十三页\编于二十二点自身免疫性肝病是与自身免疫密切相关的特殊类型的肝病，其诊断和治疗完全不同于一般的慢性病毒性肝炎

自身免疫性肝炎(AIH)

原发性胆汁性肝硬化(PBC)

原发性硬化性胆管炎(PSC)

重叠综合征六、与自身免疫性肝病相关自身抗体的检测与应用目前四十八页\总数六十三页\编于二十二点

在多种累及肝胆疾患的自身免疫疾病中，自身抗体在发病机制中起重要作用自身免疫性肝病具有相对特异性自身抗体谱自身抗体检测对自身免疫性肝病的诊断及鉴别诊断具有重要意义自身免疫性肝病与自身抗体目前四十九页\总数六十三页\编于二十二点自身免疫性肝病及其自身抗体谱疾病类型相关自身抗体

自身免疫性肝炎（AIH）

Ⅰ型AIHANA/ASMAⅡ型AIHanti-LKM-1anti-LC-1Ⅲ型AIHanti-SLA(可溶性肝抗原)

原发性胆汁性肝硬化（PBC）

AMA(M2/M4/M8/M9)anti-gp210，sp100ACA

原发性硬化性胆管炎（PSC）pANCA

自身免疫性肝病及其自身抗体谱目前五十页\总数六十三页\编于二十二点

抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）抗促甲状腺素受体抗体（TSH-RAb）七、与桥本甲状腺炎相关自身抗体的检测与应用目前五十一页\总数六十三页\编于二十二点重症肌无力（MG）自身抗体谱：

抗骨胳肌抗体（ASA）、抗乙酰胆碱受体(AchR)抗体多发性硬化（MS）自身抗体谱：

抗髓鞘碱性蛋白（MBP）抗体、抗脑苷脂抗体、抗神经结苷脂抗体急性炎症性脱髓鞘性多发性神经病（格林―巴利综合征）自身抗体谱：抗髓鞘糖脂抗体、抗髓鞘硫脂抗体

八、与神经系统自身免疫性相关自身抗体的检测与应用目前五十二页\总数六十三页\编于二十二点

大多数自身免疫患者血清中可测到高效价的自身抗体，特别是有些自身抗体的检测已纳入某些自身免疫性疾病的诊断标准中，自身抗体检测已是临床免疫检测的一项重要的实验室指标。第五节自身抗体检测的临床应用目前五十三页\总数六十三页\编于二十二点

筛查性试验与确诊性试验项目的合理组合选择相关的自身抗体检测项目切忌盲目的全面检测实验中应同步设置阳性和阴性对照一、自身抗体检测的一般原则目前五十四页\总数六十三页\编于二十二点

95%～99%可排除SLE

（－）SLE治疗缓解病情特重（大量IC沉积消耗抗体）（＋）低滴度常见于RA等其它自身免疫性疾病高滴度可作为诊断SLE的依据ENA抗体谱检测（－）不能排除抗dsDNA、Sm、rib抗体（＋）可帮助诊断ANA初筛二、实验室方法的选择及结果的确认目前五十五页\总数六十三页\编于二十二点自身免疫性疾病ANA阳性率（%）SLE80~100MCTD95~100RA20~40PSS85~95PM/DM30~50SS70~80溃疡性结肠炎26慢性活动性肝炎30~40其它风湿病20~50ANA在自身免疫性疾病中的检出率

目前五十六页\总数六十三页\编于二十二点第六节自身免疫性疾病的相关实验检测在自身免疫病患者体内，因有多种自身抗原的存在，自身抗体的种类也可有交叉重叠现象，故实验中检测出多种自身抗体阳性时还必须结合临床症状进行综合分析。目前五十七页\总数六十三页\编于二十二点自身抗体↑→免疫球蛋白↑II型及III型自身免疫病消耗补体↑→补体↓→监测病情一、免疫球蛋