肌肉植入试验

肌肉植入试验第1页，共21页，2023年，2月20日，星期四动物的选择

短期植入（12周以内）试验首选动物为大鼠、兔。长期植入（12周以上）可选择兔、狗、羊、山羊、猪等寿命相对长的动物。我们目前选择的动物为新西兰白兔，体重》2kg

第2页，共21页，2023年，2月20日，星期四对于短期植入，动物选择与植入周期如下：

植入周期第3页，共21页，2023年，2月20日，星期四植入周期对于长期植入，动物选择与植入周期如下：第4页，共21页，2023年，2月20日，星期四试验目的采用植入后局部反应试验，评估受试物植入家兔肌肉组织后的刺激和毒性反应。

第5页，共21页，2023年，2月20日，星期四植入样品的制备1.固体材料（不包括粉剂）植入物应该经过与最终产品相同的制造、处理、清洁和灭菌过程，确保植入物未被损坏并且是无菌的。规格要求：长10mm，宽1－3mm，边缘光滑。第6页，共21页，2023年，2月20日，星期四植入样品的制备2.非固体材料（包括粉剂、液体、半固体等）植入物应该经过与最终产品相同的制造、处理、清洁和灭菌过程。无菌条件下将样品填充至两端开口的PP、PE、或者PTFE空心小管内，填充物与管口齐平，并防止中间有空气。第7页，共21页，2023年，2月20日，星期四对照样品的制备对照样品的尺寸、形状、表面条件应尽可能与试验样品一致。对照样品的处理、清洗及灭菌方式应尽可能与试验样品一致。第8页，共21页，2023年，2月20日，星期四动物的麻醉

10%水合氯醛耳缘静脉注射，2ml/kg

氯胺酮肌肉注射，50mg/kg

戊巴比妥钠耳缘静脉注射，30mg/kg

实际麻醉过程中，由于动物体质状况等的差异，需适量调整剂量。第9页，共21页，2023年，2月20日，星期四固定兔，去除背部肌肉上方约10×20cm面积的兔毛。用碘伏和75%乙醇清洁暴露皮肤。水合氯醛麻醉。将载有对照样品的穿刺针与表面皮肤呈45º角插入肌肉，当回抽穿刺针时,用细探针将样品留于肌肉中。每只家兔左侧肌肉植入四个对照样品；右侧直接用样品肌肉注射四个点，每点0.2ml。较大的不能用穿刺针植入的样品，用外科手术方法植入。植入过程中需注意无菌。

植入完成后注射适量青链霉素防止感染。植入过程第10页，共21页，2023年，2月20日，星期四植入后临床观察植入后每天观察动物的一般状况，如精神状态、被毛光泽、眼神、反应等。植入后每天观察植入点皮肤反应，有无出血、红肿、坏死和试验样品排出等异常现象。第11页，共21页，2023年，2月20日，星期四于四周后，将家兔无痛处死，解剖并观察植入部位有无皮下和肌肉异常病变，在低倍放大镜下观察组织反应（包括出血肿、水肿、囊肿和增生），并记录。

解剖观察第12页，共21页，2023年，2月20日，星期四取出脊柱两侧肌肉，切取包裹试样周围0.5～1.0cm的肌肉组织，然后放置于10％福尔马林溶液中固定。组织保存第13页，共21页，2023年，2月20日，星期四组织学观察固定之后，肌肉组织标本经修整、包埋、切片等步骤，再进行常规HE染色。于光学显微镜下观察，比较供试品与对照品周围的组织反应，纤维囊腔厚度，炎症细胞和其他细胞存在情况及试样/组织界面处的其他异常情况等。

第14页，共21页，2023年，2月20日，星期四组织学评价体系评分01234嗜中性粒细胞0极少,1-5/phf5-10/phf大量浸润大量堆积淋巴细胞0极少,1-5/phf5-10/phf大量浸润大量堆积浆细胞0极少,1-5/phf5-10/phf大量浸润大量堆积巨噬细胞0极少,1-5/phf5-10/phf大量浸润大量堆积巨细胞0极少,1-5/phf5-10/phf大量浸润大量堆积坏死0轻微轻度重度严重新生血管0局灶性毛细血管增生1-3个小芽4-7支毛细血管增生并有成纤维细胞支持大量毛细血管增生并有成纤维细胞支持毛细血管广泛增生并有成纤维细胞支持纤维化0窄束中等厚度较厚广泛纤维化脂肪浸润0极少脂肪浸润和纤维化少量脂肪浸润和纤维化植入部位大量堆积脂肪细胞脂肪细胞完全包裹植入物phf=每高倍视野（400×）第15页，共21页，2023年，2月20日，星期四评分标准无刺激0.0–2.9轻度刺激3.0–8.9重度刺激9.0-15.0重度刺激>15

样品组得分减去阴性对照组得分即为试验样品的最终得分。第16页，共21页，2023年，2月20日，星期四参考文献医疗器械的生物学评价第6部分:植入后局部反应试验ISO10993-6:2007医疗器械的生物学评价第12部分:样品制备和参照样品ISO10993-12:2007医疗器械的生物学评价第2部分:动物保护要求ISO10993-2:2006第17页，共2