(SOP)时间分辨荧光免疫分析实验操作指南

时间分辨荧光免疫分析实验操作指南以及注意事项第一节 时间分辨反应过程图TRFIA的操作要点TRFIA件。下面列出TRFIA各个操作步骤的注意要点，严格遵照规定操作.1、样本的采取和保存TRFIAEDTA会影响测值。2℃-8℃3-5－20℃保存，避免482、试剂的准备整个实验过程应尽量在干净无尘的环境下进行实验前应检查试剂盒的出厂日期以确定试剂盒是否过期，一般自产品检验合格出厂日期起有效期为一年。按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。TRFIA试剂盒中的标准品或铕标试剂若是冻干的状态，第一次开盒做实验在加去离10后再开始。板条若未能一次用完，剩余板条用塑料袋（内有干燥剂）封口后密封保存。TRFIA受反应温度的不恒定、操作误差以及铕标记物的稳定性等因素的影响，不同日期的荧光值会有所波动，因此在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。3、加样TRFIA3所加物加在微孔板的底部，避免加在孔壁上部，不可溅出，不可产生气泡。免发生交叉污染。加铕标记和增强液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。连续加样器使用时要连续流畅，并不是加样越慢越好！加样时检测吸嘴是否堵塞，加量是否足够，注意吸头之间是有差异的。12不容易出错。注意按操作步骤计算试剂的量是否充足，特别是使用全自动仪器时！使用干净的一次性容器配制铕标记物。铕标记物的污染是造成实验本底增高的首要原因。注意铕标记物的瓶盖不要与标准品瓶盖混用；所有接触过铕标记物的用品使用完毕应该丢弃，不能重复使用。注意铕标记物原液和工作不要污染实验台面、加样枪及试剂盒中的其他组份。4、孵育TRFIA应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为孵育，或者温育。TRFIATRFIA一定时间的孵育。20-25℃TRFIA程在一个恒温（25℃）的孵育器内完成，荧光值比较恒定。如果使用半自动仪器，孵育过程需要加盖封片，防止污染和液体的挥发。TRFIA的幅度太大、频率太高，微孔板内液体可能溢出，影响实验结果；振荡的幅度太小、频率太低，抗原抗体反应不完全，也可能影响实验的结果。振荡器上的微孔反应板不宜叠加堆放。叠加可能造成反应板的洒落，同时可能造成反应的不均匀。孵育的温度和时间应严格遵照说明书规定。不同的检测项目，待测物质的性质不同，反应的时间是有差别的。5、洗涤TRFIATRFIA抗原或抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物TRFIA洗板机在每天使用时应进行校正注液量和残留量，注意管道是否通畅。洗涤时，确认每孔中的洗涤液都注满微孔，洗涤后，需将板倒扣在无尘吸水纸上拍干，拍干完毕，将反应板对光检查，孔底内外侧均必须无残留液体。注意微孔反应板的底部不要弄脏或划伤，不要用手摸微孔反应板的底部。6、加增强液TRFIA100加增强液时，最好能每次吸取增强液都更换枪头，如果不更换枪头，加增强液时应悬空加入，千万不要让吸头碰到小孔边缘或其中试剂而造成增强液污染。增强液的体积数应严格按说明书的要求；加完后增强液不能洒出；一旦洒出，此次实验无效，需要重做。第二节 时间分辨试剂盒的组成包括包被反应板：一块，96孔。铕标记抗抗体：一瓶，冻干品，用时每瓶以1ml去离子水溶解缓冲液参考标准品：共六瓶。增强液：一瓶，50ml。浓缩洗液25：一瓶，50ml，1:25分析缓冲液：一瓶，50ml。说明书：一份。第三节 时间分辨操作基本步骤(1)标记的二抗→加入增强液→检测例如：TRFIA(AFP)1.试剂的准备去离子水溶解。50ml1200ml1ml1:75液。将所需数量的包被反应条置室温平衡。25la25l所以加样量要求非常准确。b4从而达到吸样时进一步减少误差。c、将样品加入到反应孔中要注意枪要垂直轻轻靠在孔壁上打入样品，要保持一个样品一只枪头，这样可以避免加样污染和孔内包被物不受加样影响。200l1a、剪一张与加样条大小相似的封口膜平稳封上加板条，写上标记。b、将样品板放入震荡器时注意，减速、平稳、轻巧、放入震荡器中。5.用洗涤液冲洗4次。a、洗板时要注意板一定要与洗板机的样品架吻合。200l,1a、铕标是是实验最关键的第二个步骤，所以配铕标时一定要保证，比例准确、充分混匀、加样量准确。6a、洗板时要注意板一定要与洗板机的样品架吻合。8.每孔加增强液200l，振荡孵育5分钟。a、增强液是实验最关键的第三个步骤，虽然增强液是一个不要做任何处理就强液枪头不能碰样品孔、吸增强液手法要轻柔避免液体反压力过大回流到加样器内。9.测定。夹心法，浓度与荧光值成正比。双抗体夹心法标准曲线图1（LOG LOGB拟合方式）（2）竞争法(检测抗体)：例如：TRFIA（TT3)验方法抗原包被、封闭→加入一抗/检测样品→加入Eu3+标记的二抗→加入增强液→检测试剂的准备1ml50ml1200ml1ml1:50液。将所需数量的包被反应条置室温平衡。50μl100μl100μl作液。a50l100l一步，所以加样量要求非常准确。b4而达到吸样时进一步减少误差。c、将样品加入到反应孔中要注意枪要垂直轻轻靠在孔壁上打入样品，要保持一个样品一只枪头，这样可以避免加样污染和孔内包被物不受加样影响。1.5a、剪一张与加样条大小相似的封口膜平稳封上加板条，写上标记。b、将样品板放入震荡器时注意，减速、平稳、轻巧、放入震荡器中。5用洗涤液冲洗6次，拍干。a、洗板时要注意板一定要与洗板机的样品架吻合。200μl，5a、增强液是实验最关键的第二步，虽然增强液是一个不要做任何处理就可以直接使用，但它是一个最形容污染的液体，所以加增强液时一定要注意，加增强液枪头不能碰样品孔、吸增强液手法要轻柔避免液体反压力过大回流到加样器内。测定。竞争抑制法，浓度与荧光值成反比。竞争抑制标准曲线图1（LOG B/Bmax拟合方式）结果判断时，首先核对不同厂