恩施硒茶-锌对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的实验研究

第第页恩施硒茶\锌对D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化作用的实验研究【摘要】目的：观察恩施硒茶、锌对D-半乳糖到衰老小大鼠抗氧作用。方法：将昆明种小鼠随机分为正常对照组（NC）、衰老缺锌组（AZD）、衰老缺锌硒茶组（AZDSeT）、、衰老补锌硒茶组（AZSSeT），测定各组缺锌和补锌对小鼠血清、肝脏、脑组织锌含量的影响及硒茶、锌对血清中MDA、T-AOC、SOD及全血中GSH-PX的影响。结果：衰老模型组与正常对照组比较，血清、肝、脑组织MDA含量均显著高于正常对照组（P

【关键词】硒茶锌；D-半乳糖；抗氧化

THEANTI-OXIDATIVEACTIVITIESOFSELENIUMANDZINCMICEINDUCEDWITHD-GALACTOSE

XUJIAN-an

(MedicalSchoolofHuBeiInstituteforNationalities，Enshi445000，China)

【Abstract】Objective:Toobserveseleniumtea,EnshiandzinconD-galactosetotheantioxidanteffectofagingsmallrats.Methods:Themicewererandomlydividedintocontrolgroup(NC),theagingofzincdeficiencygroup(AZD),seleniumdeficiencyofagingteagroup(AZDSeT),,oldzincseleniumteagroup(AZSSeT),lackofdeterminationineachgroupZincandzincsupplementationonserum,liverandbrainofzincandseleniumcontentofteaandzincinserumMDA,T-AOC,SODandGSH-PXinbloodinfluence.Results:Theagingmodelgroupcomparedwiththecontrolgroup,serum,liverandbrainMDAlevelsweresignificantlyhigherthanthecontrolgroup(P

【Keywords】Seleniumtea;Zinc;D-galactose;Anti-oxidative

恩施硒茶富含微量元素硒，是抗氧化酶谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的重要成份，对体内自由基及过氧化脂质清除起重要作用。有关微量元素锌的抗氧化报道较多，本文着重讨论硒茶中的硒与锌联合对D-半乳糖致衰老小鼠的抗氧化作用，并将二者联合作用与单独的锌及单独的硒茶进行比较，从而为保健食品和医疗领域的应用提供依据。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1硒茶

硒茶(Seleniumtea)购自湖北恩施芭蕉茶厂（用氢化物发生原子吸收光谱法测定Se的含量为2.84μg/g），将其用15倍量热水浸泡30min后，用温火保持微沸30min，搅拌，过滤。茶渣再经两次如上处理，合并滤液，浓缩，配成一定浓度水煎液冷藏备用[1]。采用双道束原子荧光光谱法测定水煎液中硒的含量为0.321mg/L（型号：AFS-2201型，北京冶光仪器公司生产）。

1.1.2动物

动物为昆明种小鼠40只，体重（30±5）g，由华中科技大学同济医学院（原同济医科大学）实验动物中心提供，雌雄各半。

1.1.3主要试剂

D-半乳糖（D-Gal）由上海伯奥生物科技有限公司提供；ZnSO4.7H2O;超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒、丙二醛（MDA）测定试剂盒、总抗氧化能力（T-AOC）测定试剂盒、谷胱甘肽―过氧化物酶（GSH-PX）测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.2实验方法

1.2.1动物分组与实验方法

将上述小鼠随机分成4组，即正常对照组（NC）、衰老缺锌组（AZD）、衰老缺锌硒茶组（AZDSeT）、、衰老补锌硒茶组（AZSSeT）每组10只。按上述分组，各衰老组每天腹腔注射D-半乳糖（D-Gal）（150mg/・-・d-）,正常对照组给予等剂量生理盐水[2]，连续42d。按上述分组，各组给予设定的配方饲料，即正常对照组、衰老模型组、衰老硒茶组给予适锌饲料，衰老缺锌组、衰老缺锌硒茶组给予缺锌饲料，衰老补锌组、衰老补锌硒茶组给予补锌饲料各喂养42d。其中缺锌饲料中含锌1.61mg/kg，适锌饲料含锌50mg/kg，补锌饲料含锌100mg/kg，各饲料除锌外，其他成份同标准饲料，喂养中避免各组饲料锌的交叉污染。按上述分组，衰老缺锌硒茶组、衰老硒茶组及衰老补锌硒茶组用硒茶提取物以0.3g/kg-.d-的剂量灌胃，其余各组以0.3ml/d的蒸馏水灌胃。42d后，眼眶采血，制备全血（肝素钠抗凝）及血清，全血用于测定GSH-PX活性，血清测定MDA、T-AOC及SOD。处死小鼠，取脑及肝制成匀浆，低温3000r/min离心15min，取上清液测定相关指标，用Follin酚法测定蛋白质含量（样品低温保存，酶活性在48h内测定）。

1.2.2测定指标及方法

MDA、T-AOC、SOD、GSH-PX，测定均按试剂盒说明书操作。采用黄嘌呤氧化酶法检测SOD；硫代巴比妥酸比色法测定MDA；用氧化还原法检测T-AOC，即抗氧化物质能使Fe3+还原成Fe2+,以520nm吸光度即A520nm表示T-AOC；用二硫代二硝基苯甲酸法（即DTNB显色法）检测GSH-PX活性；用火焰原子吸收分光光度法测定血清及组织中锌含量。

1.3数据处理

实验数据以均数±标准差(x±S)表示，统计方法为方差分析，数据分析采用SPSS10.0统计软件包处理。

2结果

2.1缺锌和补锌对小鼠血清、肝脏、脑组织锌含量的影响

Table1EffectsofZincdeficiency(ZD)andZincsupplenment(ZS)onZinccontentsinserum、liverandcerebrumofmice(x±S,n=10)

NC=normalcontrolgroup;AZD=aging+zincdeficiencygroup;AZDSeT=aging+zincdeficiency+seleniumteagroup;AZSSeT=aging+zincsupplement+seleniumteagroup.:p

喂养缺锌饲料的实验组（衰老缺锌组、衰老缺锌硒茶组）血清、肝、脑组织中锌含量低于正常对照组（P

2.2硒茶、锌对血清中MDA、T-AOC、SOD及全血中GSH-PX的影响

Table2EffectsofSeleniumteaandZinconMDA、T-AOC、SODinSerumandGSH-PXinbloodofagingmice(x±S,n=10)

衰老模型组与正常对照组比较：可显著提高血清中MDA含量，同时降低T-AOC、SOD含量及全血GSH-PX活性。衰老缺锌组与衰老模型组比较，可显著提高血清MDA含量，同时降低T-AOC、GSH-PX及SOD活性。与衰老模型组比较，衰老硒茶组、衰老补锌组、衰老缺锌硒茶组均可降低血清MDA含量，同时提高T-AOC、SOD、GSH-PX活性。衰老补锌硒茶组分别与衰老模型组、衰老补锌组、衰老缺锌硒茶组、衰老硒茶组相比较，可降低血清中MDA的含量，同时升高T-AOC、SOD、GSH-PX活性。

衰老模型组与正常对照组比较，可提高脑组织中MDA含量，降低T-AOC及GSH-PX含量，差异有极显著性意义。与衰老模型组相比较，衰老缺锌组可提高MDA含量，降低T-AOC及GSH-PX含量，差异有极显著性意义。衰老补锌组与衰老缺锌组相比较，可降低MDA含量，提高T-AOC及GSH-PX含量，差异有极显著性意义。衰老缺锌硒茶组、衰老硒茶组分别与衰老模型组比较，可降低MDA含量，提高GSH-PX活性，差异有极显著性意义。衰老补锌硒茶组分别与衰老模型组、衰老补锌组、衰老缺锌硒茶组、衰老硒茶组比较，在降低脑组织MDA含量，提高T-AOC及GSH-PX活性方面差异有极显著性意义。

3讨论

在本实验中，衰老模型组与正常对照组比较，血清、肝、脑组织MDA含量均显著高于正常对照组；血清中T-AOC、SOD及全血中GSH-PX，肝组织中T-AOC、SOD；脑组织中T-AOC、GSH-PX均低于正常对照组，差异有显著性意义，表明衰老型建立是成功的。

自由基是一种强烈的氧化剂，它与多不饱和脂肪酸作用，生成脂质过氧化物，最终降解为丙二醛（MDA）代谢物。自由基及MDA通过多种途径造成细胞膜及亚细胞器膜结构破坏，导致损伤[3-5]。机体有一套完整的抗氧化防御体系，能防止自由基链式反应的氧化损伤。这种抗氧化物有酶类（如SOD、GSH-PX等）和非酶类（如维生素E、维生素C、金属硫蛋白等）。T-AOC代表体内酶性和非酶性抗氧化物的总体水平，各抗氧化物之间有相互联系，协同保护作用，所以T-AOC的测定尤为重要，目前关于T-AOC的报道还不多。

目前关于锌的抗氧化作用研究较多。本实验中，衰老缺锌组与衰老模型组比较，由于缺锌可使血清及脑中MDA含量升高，可降低血清、肝、脑组织中T-AOC、SOD及GSH-PX含量，差异有显著性意义，说明缺锌可使氧化损伤进一步加重。与衰老缺锌组比较，衰老补锌组血清、肝、脑组织中MDA含量降低；全血及脑组织中GSH-PX，血清、肝、脑组织中T-AOC及血清SOD含量升高，差异有显著性意义，说明补锌可增强机体抗氧化作用，这与前人报道相一致。

本实验中衰老硒茶组与衰老模型组相比较，衰老硒茶组可显著降低血清、肝、脑组织中MDA含量，提高血清中SOD、T-AOC，全血及脑中GSH-PX活性。与衰老缺锌组相比较可提高肝及脑组织中T-AOC活力，差异有显著性意义，说明硒茶具有较强的抗氧化作用。在本实验中，与衰老模型组比较，衰老补锌硒茶可显著降低血清、肝、脑组织中MDA含量，提高血清、肝、脑组织中T-AOC活性，提高全血及脑组织中GSH-PX含量及血清SOD活性，差异有显著性意义。衰老补锌硒茶组分别与衰老补锌组及衰老硒茶组比较，衰老补锌硒茶组可降低血清、肝、脑组织中MDA含量，提高血清、肝、脑组织中T-AOC活性，提高全血及脑组织中GSH-PX含量及血清SOD活性，差异有显著性意义。说明硒茶中的硒与较强的抗氧化作用，其抗氧能力强于单独的锌及单独的硒茶，这为饮硒茶同时可服用含锌口服液提供了实验依据。

衰老补锌组、衰老硒茶组、衰老补锌硒茶组分别与衰老模型组比较，肝脏SOD含量没有升高，反而进一步降低，差异有显著性意义。这可能是因为自由基产生过多，抗氧化酶如SOD活性降低所致。也有研究表明锌预处理CHO细胞后对SOD活性无显著影响。另外血清和肝中的SOD可能并非同源，这与体内抗氧化酶增龄变化十分复杂有关，因此锌、硒茶与抗氧化酶活性变化的关系仍然需要进一步研究。

参考文献

[1]杨建雄，刘静，李发荣，等.连翘叶茶抗氧化抗衰老作用的实验研究[J].营养学报，2004，26（1）：65-67.

[2]M,MaulikgchiD,etal.Myocardialprotectionbyprotykin,anovelextractoftrans-resveratrolandemodin[J].FreeRadicRRes,2000,32:135-144.

[3]IimuroM,KanekuM,MatsumotoY,etal.EffectsofanendothelinreceptorantagonistTAK-044onmyocardialenergymetabolisminischemia/repe