开题报告题目铁线莲曼二世组培技术研究

铁线莲属（ClematisL.）植物是一类药用价值高并且有较高观赏价值和抗逆性的植物，其花被誉为“藤本植物皇后。铁线莲属种类繁多，中国王文采先生于2005年根据花构造354444153048[1]。植物组织培养（nttissueculture）是指利用细胞全能性培养再生植株的技术，它以植物生。胞壁扩张，酸化，细胞有突出的影响[3]。等选用发育饱满、无病虫害的转子莲(C.patens.0.637mmol/LIAA2-3min2.548mmol/LIAA速蘸对其生根有明显促进作用[4]等以铁线莲半木质化的健壮枝条为插穗,用不同种类、不分别达100%和72.3%,但随着浓度的升高,生根率逐渐下降[5]。等认为扦插基质采用草。培中，国内只限于铁线莲属植物的药用价值或对其资源的,但对国外铁线莲的引种栽培及园林应用研究较少。林业大学的等人对从荷兰引进的一个铁线莲属栽培品种Clematis-Multi-Blue进行了研究,发现其虽有较高观赏价值,但有性繁殖且难以保持母本的优良性状。莲快速繁殖提供了较好的技术支持[7]。在此基础上，等以叶或茎尖作外植体在转子莲的组MS+2.0mg/L6-BA+1.0mg/L2,4-DMS+2.。/L6-BA+1.0mg/LIBAMS+6-BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L根培养基配方以1/2MS+IAA0.8mg/L比较适宜[8]。等以红花铁线莲(C.coc-cinea)的茎、叶分化苗,为铁线莲快速繁殖提供了较好的技术支持[9]等对铁线莲(C.tangutica)进行。等以栽培品种C.Multi-Blue铁线莲的幼叶、茎尖、嫩茎作为外植体,通过不同的基本培养以低盐的1/2MS为最佳,获得了高额不定芽和体细胞胚。等利用重瓣铁线莲(C.flori-培养基为MS+1.0mg/L6-BA+0.8mg/L2,4-D+0.2mg/LIAA,植物生长调节物质6-BA、2,4-D、IAA的适宜比例为5:4:1[11]。ShahrearAhmad等利用萝芙木的带芽茎段为外植体进行组织培养，发现MS+2.5mg/LBA+0.1mg/LNAA诱导愈伤组织效果最好[12]。等在以上基础上，三个1/2MS培养基。生根培养适宜基本培养基为MS培养基。其中增殖培养中，湖州铁线莲腋芽增殖适宜培养基为1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.3mg/LIBA+Sucrose30.0g/L，增殖系数为4.43；大花铁线莲腋芽增殖适宜培养基为1/2MS+0.5mg/L6-BA+0.3mg/LIBA+Sucrose40g/L，增殖系数为4.42；短柱IBA+Sucrose20g/L在生根培养中，湖州铁线莲适宜生根培养基为MS+NAA0.05mg/L，生根率为60%；大花铁线莲适宜生根培养基为MS+0.08mg/LNAA+0.1mg/LIBA，生根率为50%；短柱铁线莲适宜生根培养基为MS+0.1mg/LNAA+0.5mg/LIBA，生根率为43.3；另外还得出湖州铁线莲体细胞胚胎发生地研究结论：胚性愈伤组织适宜诱导培养基为1/2MS+0.2mg/LTDZ+0.2mg/LNAA+100mg/L肌醇+200mg/L水解酪蛋白+1g/L活性炭。附加蔗糖30g/L，琼脂5.8g/L，pH值为5.8，暗培养。胚性愈伤继代增殖适宜培养基为1/2MS+0.05mg/Z+0.05mg/LNAA+100mg/L肌醇+200mg/L水解酪蛋白+1g/L活性炭。胚性愈伤组织在继代增殖5次以后增殖系数趋于稳定。胚性愈伤组织诱导体细胞胚胎的形成在1/2MS+0.03mg/LABA+0.05mg/LNAA中效果较好，体细胞胚胎的诱导率可达10.526%[13]。以上 培养的具体技术做了详细的说明，并得出结论有铁线莲‘Multi-Blue’外植体灭菌时间以10min虽然织培养已有很长时间的历史技术也相对成熟但依然存在一些局限问题主要是:污染严重玻璃化现象褐化现象严重及生根等;研究时间长成本高技术不稳定等针对组织培养中玻璃苗的现象蔡祖国提到玻璃化是植物组织培养中常见的一种现象他从形态解剖和生理生化方面比较了玻璃化苗和正常植株的差异围绕水势平衡激素平衡和矿质元素平衡探讨了玻璃化发生的内在机制在此基础上总结了防止玻璃化发生的可能途径改善光照选用透气膜，降低细胞素的浓度等，并提出多学科的合作将是防止玻璃化发生的必由[5]。而针对铁线莲组培中的玻璃化现象在其博士 中说道随着养基中琼脂浓度的升高,幼苗的玻璃化率明显下降，细胞素6BA)的浓度对幼苗的玻璃化的产生也有较大的影响,细胞素(BA)浓度越高幼苗玻璃化率越高,-A的浓度过高会使细胞过快,影响了植物体内干物质的积累及组织的发育因此在铁线莲组织培养中应取适当的6A的度,以降低幼苗的玻璃化率,达到组快繁的目的培养环境的温度对瓶苗玻璃化的产生有影响,验发现适当的控制温度采取低温处理,避免过的环境温度在昼夜变温交替的情况下比恒温效果好。浸泡5min,之后用棉球蘸洗洁精溶液仔细地轻轻腋芽及茎段.30min。无菌三角瓶中放置10-20个芽段,加入75%的浸泡30-60s,用无菌水冲洗2-3次,之后用0.1%升灭菌5-12min,立即用无菌水冲洗6-8次。在药液灭菌过程中,轻轻晃动三角瓶,以使灭菌液培养基上,每瓶接种一个外植体,接种后4周统计外植体的污染率、褐化率及存活率。8min和10min。4周后统计其发芽率、污染率、率等，将试验结果对比。8-10h/d25℃。及时观察外植体的生长状况，并统计其萌芽率、污染率、褐化率、率和存活率。根据增长系数，选择出最适初代培养的培养基。实验设计如1处 基本培养 1/2MS（空白 MS（空白 1-2cm2殖培养基细胞素和生长素的筛选。待其接种后4周即可统计其增殖状况。26-1112222-3cm1.2cmMSIBANAA3.外植 、完成设计所必需具备的条（技术资料主要仪器设备等，过程中可能遇到的问题、以及解决的途径如葡萄，其实验方法可以作为借鉴。梁老师是专门用来做组培实验的，仪器先进，主要可能遇到的问题、以及解决途初代培养不成功，外植体在经过后生命力减弱，低。应该严格控制和升的消 Thomasgaspar, ntHormonesAnd ntGrowthRegulatorsIn ntTi