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T-SPOT®.TB

——结核感染T细胞检测

（免疫斑点法）列入欧美等20多个国家结核诊疗指南内容结核病基础概念T-SPOT.TB产品知识T-SPOT.TB临床应用病例分享T-SPOT介绍内容结核病基础概念T-SPOT.TB产品知识T-SPOT.TB临床应用病例分享T-SPOT介绍2000-2008年我国肺结核报告发病情况结核分枝杆菌（MTB）是结核病的致病菌，通过呼吸道传播，可以侵入人体全身各种器官，主要感染肺部全世界约三分之一的人群感染了结核分枝杆菌，《2012年全球结核病报告》显示，在2011年有870万新发病例，140万人死于结核病T-SPOT介绍活动性结核与潜伏性结核新发TB病例来自潜伏性结核感染人群潜伏性结核感染（hiddenepidemic）人群数量巨大——“定时炸弹”若想控制活动性TB，必须先控制潜伏性结核感染鉴别高危人群预防性治疗免疫接种活动性TB

–全球每年900万新发病例仅为冰山一角LatentTB-“hiddenepidemic”-2billionpeopleinfectedT-SPOT介绍活动性结核与潜伏性结核接触活动性结核病患者暴露程度不足，结核杆菌被机体免疫力清除没有症状,结核杆菌仍旧存在而不能被侦测

X-光/CT扫描显示正常没有抗体应答诊断困难传统的结核感染检测只有PPD机体被感染受免疫抑制没有临床症状终身处于感染状态潜伏性结核有临床症状具有传染性结核杆菌可以通过涂片、培养检测出胸部的X-光或CT扫描显示异常

肺外结核难以诊断(特别是儿童)活动性结核-结核病5%5%再次激活？T-SPOT介绍LTBI活动的危险因素ErkensJERJ2010T-SPOT介绍结核病常规诊断技术耗时长涂阴PTB检出低肺外结核难结核诊断X射线分子诊断接触史涂片镜检细菌培养特异性差主观肺外结核难操作复杂技术要求高涂阴PTB检出低肺外结核难不能区分NTMPTB近半阴性肺外结核难试剂灵敏度低；不能区分既往感染和发病病人抗体检测WHO关于血清学检测声明2011年7月20日，世界卫生组织（WHO）发出正式声明，要求禁止将血清学检测方法（抗原，抗体，蛋白芯片等）用于肺结核和肺外结核的诊断。WHOwarnsagainsttheuseofinaccuratecommercialserologicaltestsforpulmonaryandextra-pulmonaryTB小结活动性结核病与潜伏性结核感染的区别LTBI危险因素结核中有20%左右的肺外结核，诊断困难传统结核诊断方法不能满足临床需要内容结核病基础概念T-SPOT.TB产品知识T-SPOT.TB临床应用病例分享T-SPOT®.TB原理T-SPOT®.TB原理：结核感染者体内存在特异的效应T淋巴细胞，效应T淋巴细胞再次受到结核抗原（ESAT-6，CFP10）刺激时会分泌多种细胞因子（IFN-γ）。因此，检测效应T淋巴细胞可用于结核病或结核潜伏感染者的诊断列入美国、英国等欧美20多个国家结核诊疗指南美国CDC推荐：BCG接种人群结核感染检测首选国内风湿科/消化科指南T-SPOT®.TB原理由于效应T细胞存活时间很短（6周左右），而且具有特异性，因此可以作为机体是否正处于被感染的指标，无论是否有临床症状结核杆菌特异抗原T-SPOT®.TB—准确、可信、快速特异性好只针对结核分枝杆菌复合群敏感，与绝大多数环境分枝杆菌和卡介苗（BCG）无交叉反应

美国FDA数据：特异性97.1%(297/306)国内临床数据：特异性94.1%(478/508)灵敏度高基本不受免疫力低下/受抑制影响，在肺外结核患者中有很高的检出率美国FDA数据：灵敏度95.6%(175/183)国内临床数据：灵敏度95.3%(624/655)快速简便简单的血液检测，隔天报告结果阴性预测值：93.9%（478/509）阳性预测值：95.4%（624/654）16ReferenceSensitivityKobashietal.JInfect.2009;58(3):197-20490.0%(36/40)Domínguezetal.DiagnMicrobiolInfectDis.

2009;63(1):43-5184.2%(32/38)Bosshardetal.RespirMed.2009;103(1):30-4.98.4%(62/63)HiguchiMedMicrobiolImmunol.2009;198(1):33-795.9%(47/49)Kimetal.AmJMed2009;122(2):189-9594.6%(53/56)Nicoletal.Pediatrics.2009;123:38-4350.0%(5/10)Markovaetal.Biotechnol.&Biotechnol.2009;23(1):1103-110861.5%(8/13)SoysaletalIJTLD200812(1):50-56*80.8%(80/99)DominguezetalClinVaccImmunol200815(1);168-71*85.7%(36/42)CheeetalJClinMicrobiol.2008;46(6):1935-4094.1%(254/270)ConnelletalPLoSONE2008.3;7:e2624*100.0%(9/9)Kobashietal.ScandJInfectDis2008.40;8:629-34*87.5%(42/48)Golettietal.PLoSONE.2008.3;10:e3417.*89.9%(62/69)KangetalChest.2007Sep;132(3):959-65*92.2%(59/64)JanssensetalERJ200730(4):722-898.3%(57/58)ClarkeetalClinExpImmunol2007150(2):238-44.90.0%(27/30)DetjenetalCID20071;45(3):322-8*92.9%(26/28)OzekincietalJIntMedRes2007;35:696-70392.9%(26/28)VincentietalClinExpImmunol.2007Oct;150(1):91-8*84.6%(11/13)WangetalEmergingInfectDis200713;4:553-887.2%(34/39)LosietalEurRespirJ.2007Dec;30(6):1173-9100.0%(10/10)KimetalArchInternMed167;20:2255-2259100.0%(22/22)Jafarietal2006AJRCCM174;9:1048-53100.0%(12/12)FerraraetalLancet2006376;1328-34*83.3%(20/24)LeeetalEurRespirJ200628;24-30*96.6%(84/87)GolettietalClinMicrobiolInfect200612;6:544-50*91.3%(21/23)MeieretalEJCMID200524;529-53695.9%(70/73)TOTAL91.5%(1205/1317)国外文献汇总——灵敏度国外文献汇总——特异性实验效果图阴性结果阳性结果空白对照抗原AESAT-6抗原BCFP10阳性对照（PHA）报告单根据抗原A或/和抗原B孔的反应判断结果:检测结果为“有反应性”，参照以下标准：空白对照孔斑点数为0-5个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数）-（空白对照孔斑点数）≥6空白对照孔斑点数大于6个时且（抗原A或抗原B孔的斑点数）≥2×（空白对照孔斑点数）如果上述标准不符合且阳性质控对照孔正常时检测结果为“无反应性”实验结果判断斑点数的意义—活动性or潜伏性多少个斑点是活动性结核？结果阳性说明患者结核感染，是潜伏性还是活动性需要结合临床症状。因个体差异，没有具体的斑点数字可以依据。但斑点数越多越倾向于活动性结核CheeetalEurJClinMicrobiolInfectDis(2008)（IF=3.02）活动性与潜伏性结核感染患者中，T-SPOT.TB斑点数比较JanssensetalERJ(2007)（IF=6.35）活动性与潜伏性患者中T-SPOT.TB斑点数的比较(TST+和TST-)斑点数的意义—现症感染之前得过结核治愈了，T-SPOT结果如何？T-SPOT检测的是现症感染。如果彻底治愈，体内无结核分枝杆菌，则结果阴性；如果结果是阳性，则说明患者体内还存在结核分枝杆菌，还在结核感染中陈旧性结核体内会存在记忆T细胞，但记忆T细胞在全血中的数量非常少，而且抗原再次激活孵育时间远远超过24h，不会因为记忆细胞的存在而产生斑点文献显示，大概只有38%左右的活动性结核患者经过治疗，T-SPOT结果会转阴Cheeetal.,AJRCCM(2006)（IF=11.04）——RibeiroS,DooleyK,etal.BMCInfectDis,2009（IF=3.02）方法：在肺结核治疗中，用T-SPOT.TB方法评估治疗效果。在治疗开始前，治疗16周和24周后，分别计数ESAT-6和CFP-10刺激产生的斑点数图1.所有研究对象ESAT-6,CFP-10和总RD1在治疗前，16周后和24周后的平均斑点数（n=58）在24周完整疗程后，ESAT-6,CFP-10和总RD1产生的平均SFCs分别从42.7,41.2和83.8降到23.3,23.2和46.5，有显著性差异结论：T-SPOT.TB试验中检测的由RD1特异T细胞产生的γ-干扰素与肺结核患者在治疗中的结核杆菌量直接相关斑点数的意义—治疗前后变化注意事项采血量：6-10ml采血管：肝素抗凝样本保存：当天送样，常温运输注意：PET-CT与输血方法学优点特异性95%左右，不受卡介苗（BCG）接种与环境分枝杆菌影响灵敏度95%左右，几乎不受个体免疫功能低下影响快速，24小时报告结果国内外指南推荐，多篇文献数据支持斑点数意义：斑点越多越倾向活动性结核、现症感染、能反应疗效送样的注意事项方法学缺点不能够提示临床患者的病变部位，需要结合临床的判断目前还不能够根据斑点数量的多少来判断患者是活动性结核病或是潜伏感染者内容结核病基础概念T-SPOT.TB产品知识T-SPOT.TB临床应用病例分享肺外结核结核分枝杆菌能侵染全身大部分器官，其中有20%发生在肺外临床应用科室应用呼吸科/结核科呼吸系统疾病和结核的鉴别诊断；胸水/心包积液鉴别诊断；2周以上的不明原因发热病人的结核感染排筛；菌阴肺结核的辅助诊断；特殊人群（矽肺等）的结核排筛传染/感染科2周以上的不明原因发热病人的肺结核排筛血液科血液病治疗前后的结核筛查内分泌科糖尿病患者结核的排筛神经内科结核性脑膜炎的辅助诊断临床应用科室应用风湿免疫科生物制剂/免疫抑制剂治疗前后的筛查；剂量激素治疗前后的结核筛查；自身免疫性疾病与结核病的鉴别诊断；发热待查患者的结核排筛儿科儿童肺结核的辅助诊断；儿童肺外结核的辅助诊断消化科腹水（结核性腹膜炎）待查；CD（克罗恩病）与肠结核的鉴别诊断；生物制剂治疗患者的结核筛查；发热待查国内外文献举例T-SPOT.TB的灵敏度为94.7%(71/75)，肺疾病组和肺外疾病组中分别为95.6%和93.3%，特异性为84.1%(90/107)，肺疾病组和肺外疾病组中分别为69.2%和88.9%。冯云,张文宏等.PLOSONE,2012（IF=3.73）北京协和医院感染内科2004年至2010年收治的997例不明原因发热患者的病因分析显示，感染性疾病一直是最主要的病因，占479例(48.0%)，其中结核病占45.3%(217/479)侍效春,刘晓清等.ChinMedJ,2013（IF=0.901）国内外文献举例在84例CD或ITB患者中，T-SPOT是诊断ITB一个很好的指标，其灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别是84.2%、75.4%、50.0%和94.2%。李玥,钱家鸣等.JCrohnsColitis,2012（IF=2.566）在60例CD以及34例ITB患者中，T-SPOT.TB和PCR方法的鉴别诊断效能：雷媛,夏冰.JournalofDigestiveDiseases,2013（IF=1.853）敏感性%特异性%PPV%NPV%T-SPOT88.293.388.293.3PCR52.990.075.077.1国内外文献举例293例怀疑结核病的非洲儿童，T-SPOT在年龄小于3岁、HIV感染和营养不良的儿童中灵敏度分别是85%、73%和78%。如果结合TST的结果，T-SPOT的灵敏度达到91%LiebeschuetzS,etal.Lancet,2004（IF=39.06）在77名结核病和51名健康儿童中，T-SPOT灵敏度为89.2%，特异性为94.1%，明显高于TST（灵敏度77.0%，特异性70.6%），卡介苗是否接种对结果没有显著影响。孙琳,申阿东等.ChinMedJ,2010（IF=0.901）消化科--国内外指南IBD诊断：在结核高流行区域要排除肠结核，方法包括PPD和γ-干扰素测定（T-SPOT.TB试验）CD排除肠