刘分化课件高效液相色谱

7.1

液相色谱的种类7.2

色谱方法的建立液液色谱固定相保留机制流动相应用色谱柱填料担体(如硅胶)固定相与样品分子作用

球形颗粒承受压力承载固定液有机分子或功能团包覆或键合+液液色谱:固定相是通过物理吸附的方法将液相固定液涂在载体表面。为了防止固定液的流失，流动相需要预先用固定液饱和，这种方法除了较麻烦外，还不能用于梯度洗脱。键合相色谱的固定相是通过化学反应将有机分子键合到载体或硅胶表面上。这样不仅解决了固定相的流失问题，而且使固定相的功能得以改善，成为高效液相色谱中占压倒优势的一种方法。下图是硅胶基质的冠醚大分子固定相的结构示意图，功能层冠醚分子吸附或键合在硅胶基质的表面色谱柱填料色谱柱填料键合疏水基团?反相键合固定相色谱正相键合固定相色谱键合极性基团?反相：甲醇，乙腈，四氢呋喃和水乙醚，氯仿，三氯甲烷和n-己烷洗脱物的流出顺序在反相键合相色谱中，极性大的组分先流出，极性小的后流出。在正相键合相色谱中，极性弱的组分先流出色谱。甲苯苯酚常用溶剂：乙腈、甲醇、水等等度洗脱：流动相比例恒定

梯度洗脱：逐步提高有机溶剂比例实际使用：甲醇-水/乙腈-水混合体系甲醇-水的比例？？？流动相的流速？？？反相通过改变流动相，可分离混合组分水、甲醇作为流动相，便宜、易得色谱柱平衡快，适宜梯度洗脱用单柱和流动相就能分离非离子化合物，离子化合物和可电离化合物极性键合相对流动相组成的变化响应较快，特别有利于梯度洗脱正相液相色谱可以分离烷烃和类脂，以及糖类在水溶液中不稳定的化合物必须用正相键合相色谱法进行分离正相液固色谱固定相保留机制流动相应用常用的固定相是硅胶和氧化铝。固定相硅胶的表面终端为硅醇或硅氧烷键。它们对试样的保留时间顺序大致如下:

醛酮醇胺砜亚砜酰胺羧酸极性大的物质后流出Xm

+nMad=Xad+nMm吸附剂表面上发生了试样分子和流动相分子间的竞争吸附吸附剂吸附试样的能力，主要取决于吸附剂的比表面积和理化性质，试样分子的组成和结构以及洗脱液的性质等。保留机制流动相在吸附色谱中选择溶剂系统的方法与分配色谱中类似选择两个共存的溶剂，其中一个的强度很大，另一个强度则很小。然后通过改变这两种溶剂的体积，以获得适宜的分离度。液固色谱的分离对象与分配色谱可以相互替代，但主要还是互补。液固色谱最适宜分离那些溶解在非极性溶剂中，具有中等相对分子质量且为非离子型的试样。液固色谱也能分离那些具有相同极性基团但数量不同的试样。液固色谱特别适于分离异构体。应用离子色谱离子交换色谱离子排斥色谱离子对色谱离子交换色谱以离子间作用力不同为原理，主要用于有机和无机阴、阳离子的分离离子交换色谱仪器输液泵色谱柱检测器数据处理系统进样阀抑制柱细颗粒柱填料，高柱效；采用高压输液泵固定相：交换容量非常低低浓度淋洗液在分离柱后，用另外一支抑制柱来消除淋洗液的高本底电导采用电导检测器检测流出组分。快速分离分析微量无机离子混合物特点

优点是降低了流动相的总离子含量，提高检测试样离子的灵敏度。缺点在于抑制柱必须再生，并且由于抑制柱的存在而使色谱峰展宽，导致分辨率下降。离子交换树脂的分类阳离子交换树脂阴离子交换树脂螯合树脂两性交换树脂强酸型弱酸型交换基为酸性，H+与阳离子交换—SO3H—COOH—OHpH>2pH>6使用pH范围pH>10交换基为碱性，阴离子发生交换强碱型弱碱型—N+(CH3)3Cl-—N+H3OH-—N+H2ROH-—N+HR2OH-pH<12pH<4含有特殊螯合基团的树脂电子交换树脂，含有氧化还原功能基团强酸型阳离子交换树脂对一价阳离子

Li+<H+<Na+<NH4+<K+<Rb+<Cs+<Ag+<Tl+

对二价阳离子

Mg2+<Ca2+<Sr2+<Ba2+<Fe2+<Co2+<Ni2+<Cu2+<Zn2+

水合离子半径越小亲和力越大强碱型阴离子交换树脂

F-<OH-<Ac-<HCOO-<H2PO4-<Cl-<NO3-<HSO4-

<CrO42-<SO42-对不同价态离子

Na+<Ca2+<Fe3+<Th4+

电荷数越高亲和力越大树脂对离子亲和力顺序ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－Ｃｌ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋Ｃｌ－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＣＯ３２－ＳＯ４２－ＨＣＯ３－Ｃｌ－ＳＯ４２－Ｃｌ－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－TemporalcourseＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＣＯ３２－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ＨＣＯ３－ＳＯ４２－ＣＯ３２－ＣＯ３２－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－ＨＣＯ３－Ｃｌ－＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋阴离子交换树脂检测器与抑制柱电导检测器电压电流的测量溶液中离子的浓度流动相的导电性很高抑制柱分析速度快分离能力高，分离混合阴离子的最有效方法仪器流路采用全塑件，玻璃柱，耐腐蚀优点应用与发展食品和饮料中阴阳离子、有机酸、胺和糖类分析的较好方法。联用技术关于离子色谱--原子吸收（发射）光谱、离子色谱--电感耦合等离子体、离子色谱--质谱的联用已有不少报道。环境分析应用对象主要是环境样品中各种阴、阳离子的定性、定量分析。尺寸排斥色谱

size-exclusionchromatography原理色谱柱填料和流动相应用尺寸排斥色谱也称为凝胶色谱。它是基于试样分子的尺寸和形状不同来实现分离的。凝胶的孔穴大小与被分离的试样的大小相当。原理特点柱寿命长可用灵敏度较低的检测器分子量的差别需要10%以上时才能得到分离，主要用来获得分散性聚合物的相对分子质量分布情况固定相：化学惰性的多孔性材料，如聚苯乙烯凝胶、亲水凝胶、无机多孔材料。流动相：在凝胶色谱中，流动相的作用不是为了控制分