保健食品毒理和功能

保健食品毒理和功能保健食品毒理和功能第1页主要内容提要

中国保健食品介绍保健食品安全性毒理学检验与评价保健食品新原料安全性毒理学评价标准保健食品安全性毒理学评价中存在问题保健食品功效性检验与评价保健食品功效评价方法更改情况保健食品毒理和功能第2页第一个别中国保健食品介绍保健食品毒理和功能第3页第二个别保健食品安全性毒理学

检验及评价保健食品毒理和功能第4页主要内容

检验评价依据审评基础要求选择毒理学试验基础标准试验动物选择样品预处理标准毒理学试验项目关键点介绍毒理学安全性评价时应考虑问题审评结论判定保健食品毒理和功能第5页毒性及功效检验评价依据1996年3月卫生部《保健食品管理方法》

保健食品标准、功效评价、审批程序和监督管理方法1996年7月GB15193《食品安全性毒理学评价程序和方法》

卫生部《保健食品功效学评价程序和检验方法》

仅包含了12项功效检验及评价方法年7月卫生部《保健食品功效学评价程序和检验方法》

可受理和评价功效调整到31项年2月卫生部《保健食品检验与评价技术规范》

将功效学、毒理学、功效成份及卫生指标检验评价方法三者合一保健食品毒理和功能第6页审评基础要求1.配方原（辅）料、用量、理化性质2.剂量食用方法及用量3.工艺规格化产品符合配方、工艺、质量标准4.批号注意批号是否一致,益生菌、奶制品等保质期短除外保健食品毒理和功能第7页1.毒理学评价四个阶段第一阶段：急性毒性试验经口急性毒性试验：LD50，联合急性毒性，一次最大耐受量试验第二阶段：遗传毒性试验，30天喂养试验，传统致畸试验遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合Ames或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等第三阶段：亚慢性毒性试验

90天喂养试验、繁殖试验、代谢试验第四阶段：慢性毒性试验（包含致癌试验）选择毒理学试验基础标准保健食品毒理和功能第8页2.无需进行毒性试验保健食品以普通食品和卫生部要求药食同源物质为原料生产；

1）以传统工艺生产且食用方式与传统方式相同

2）以水提物配制生产、服用量为原料常规用量，且资料未提醒含有不安全性用已列入营养强化剂或营养素补充剂名单营养素化合物为原料，如其原料起源、生产工艺和产品质量均符合国家相关要求；选择毒理学试验基础标准保健食品毒理和功能第9页3.需进行一阶段和三项致突变毒性试验保健食品属于普通食品和卫生部要求药食同源物质且用水提以外其它常见工艺生产：（1）服用量与常规用量相同急性毒性、三项致突变试验（2）服用量大于常规用量还需加做30天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验选择毒理学试验基础标准保健食品毒理和功能第10页选择毒理学试验基础标准4.

需进行一、二阶段毒性试验保健食品

以普通食品和卫生部要求药食同源物质以及允许用作保健食品物质以外动植物或动植物提取物、微生物、化学合成物等为原料生产保健食品，标准上须进行第一、二阶段毒性试验，必要时进行下一阶段毒性试验。卫生部要求允许使用动植物及其提取物或微生物为原料。保健食品毒理和功能第11页5.需进行一至三阶段毒性试验情况：一、二阶段试验结果与国外产品不一致国外少数国家或地域食用原料或成份水提取物，大于常规服用量用水提以外其它常见工艺生产，大于常规用量选择毒理学试验基础标准保健食品毒理和功能第12页6.需进行一至四阶段毒性试验原料和成份

我国外均无食用先例7.敏感指标及敏感试验保健食品

不一样食用人群和（或）不一样功效保健食品选择毒理学试验基础标准保健食品毒理和功能第13页对受试保健食品要求

单一已知化学成份，应提供物理和化学性质各种原料配方产品，应提供配方配方产品，必要时还应提供各组分，功效成份物理和化学性质及其检测汇报提供原料起源、生产工艺、人可能摄入量。使用说明书等相关资料受试物应符合既定配方和生产工艺规格化产品保健食品毒理和功能第14页试验动物选择及给样量1.依据各项试验详细要求，合理选择试验动物

常见大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。2.动物应符合《试验动物管理条例》

清洁级或清洁级以上动物合格证号及动物试验室合格证号3.灌胃量

大鼠：10ml/kg•BW（若以水为溶剂，推荐20ml/kg•BW）小鼠：20ml/kg•BW保健食品毒理和功能第15页样品预处理标准1.介质选择

应选择适合于受试动物溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不发生反应、稳定性好。常见介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。2.液体类

受试物浓缩倍数应符合试验要求。浓缩方法不应破坏其有效成份，常见有60℃～70℃减压或常压蒸发、冷冻干燥。按工艺要求。保健食品毒理和功能第16页样品预处理标准3.袋泡茶类

处理方法与产品推荐饮用方法相同推荐用：80℃--90℃常压用水浸泡30min

水量为受试物10倍，提取2次，2次提取液合并浓缩至所需浓度标明该浓缩液与受试物百分比保健食品毒理和功能第17页样品预处理标准4.含乙醇类（1）不需浓缩受试物乙醇浓度<15％直接进行试验乙醇浓度>15％乙醇浓度应调至15％（2）需浓缩受试物乙醇浓度<15％浓缩后调至原乙醇浓度乙醇浓度>15％浓缩后调至15％乙醇浓度在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基保健食品毒理和功能第18页样品预处理标准5.膨胀系数较高受试物选择可溶性介质给受试物方法：灌胃其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量100倍，按采取实际到达倍数标明受试物膨胀系数保健食品毒理和功能第19页样品预处理标准6.益生菌等微生物类保健食品在进行Ames试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。需浓缩应采取低温干燥法或由企业提供所需浓度受试物（附方法、技术参数）。7.以食品为载体受试物

（1）有营养价值：按设计量进行饲料营养成份调整，提供详细说明。（2）大豆蛋白、乳清蛋白如质量、工艺等符合食品标准和安全要求，允许去除。如仅以该原料生产，可申请免做毒理学试验。保健食品毒理和功能第20页毒理学试验项目关键点介绍

急性经口毒性试验鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验骨髓细胞微核试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验小鼠精子畸形试验小鼠睾丸染色体畸变试验

30天喂养试验保健食品毒理和功能第21页急性经口毒性试验目标：测定LD50，毒性分级。了解毒性强度、性质和可能靶器官，为深入毒性试验提供剂量和观察指标选择依据。原理：急性毒性：经口一次性、24h内屡次给予，短时间内毒性反应。致死剂量通常见半数致死剂量LD50表示。急性联合毒性：两种或两种以上受试物，可能发生拮抗、相加或协同联合方式，能够依据一定公式计算和判定标准来确定这三种不一样作用。保健食品毒理和功能第22页急性经口毒性试验时间周期：普通为3周

3-5天，大、小鼠适应期

7-14天，染毒及试验观察期 发生动物死亡时，应进行大致解剖观察和评价指标：毒性反应症状：各器官系统异常表现（中枢、自主神经、呼吸、心血管、胃肠、生殖泌尿系统、皮毛、粘膜等）及体重改变死亡情况：死亡时间、数量、性别、表现等。大致尸检结果：假如发生死亡动物保健食品毒理和功能第23页急性毒性（LD50）剂量分级表级别大鼠口服LD50，mg/kg相当于人致死量mg/kgg/人极毒<1稍尝0.05剧毒1-50500-40000.5中等毒51-5004000-300005低毒501-500030000-25000050实际无毒5001500000500无毒>15000>5000002500保健食品毒理和功能第24页急性经口毒性试验试验结果判定：1.LD50＜人可能摄入量100倍，放弃；反之继续下一步试验。2.LD50≥10g/kgbw或按最大耐受量染毒而未出现动物死亡，可继续下一步试验。保健食品毒理和功能第25页鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验目标：检测受试物诱变性，预测其遗传危害和潜在致癌作用可能性。时间周期：普通为2周

第一周，鼠伤寒沙门氏菌种、试剂、培养基准备 第二周，染毒，培养48h，菌落计数剂量设计：决定受试物最高剂量原因是对细菌毒性及其溶解度。最低剂量为0.2ug/皿；最高剂量为5mg/皿，或最大溶解剂量，最大饱和剂量以及最小毒性剂量。可设五个剂量组，组间距不超出5倍。同时设：阳性对照组，溶剂对照组和未处理对照组。保健食品毒理和功能第26页鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验观察及评价指标：各受试物组及三个对照组四种菌株（TA97a，TA98，TA100和TA102）分别在加和不加S9情况下菌落计数。结果评价（掺入法）：受试物组回变菌落数增加一倍以上（即回变菌落数≥2×未处理对照组数），并有剂量反应关系或有可重复阳性反应，即可判试验阳性。保健食品毒理和功能第27页骨髓细胞微核试验目标：检测整体动物体内骨髓嗜多染红细胞微核发生率，以评价受试物致突变可能性。原理：微核是在细胞有丝分裂后期染色体有规律地进入子细胞形成细胞核时，依然留在细胞质中色单体或染色体无着丝点断片。末期之后，单独形成一个或几个规则次核，被包含在细胞胞质内，因比主核小，故称为微核。保健食品毒理和功能第28页骨髓细胞微核试验时间周期：普通为2周

3-5天适应期 小鼠经口染毒，30h给受试物法 取胸骨或股骨，搜集骨髓，涂片，染色，镜检剂量设计：最少设置3个剂量，最高剂量组为动物出现严重中毒表现和/或个别动物出现死亡剂量。低剂量组应不出现毒性反应。普通取LD501/2、1/4、1/8作为三个剂量。当受试物LD50≥10g/kg.bw时，最高剂量通常采取10g/kg.bw。同时设阳性对照组和溶剂对照组。保健食品毒理和功能第29页骨髓细胞微核试验观察及评价指标：每只动物计数1000个嗜多染红细胞，统计含有微核细胞数，并计算微核千分率。同时观察嗜多染红细胞与成熟红细胞百分比。结果评价：受试物组与对照组微核率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。保健食品毒理和功能第30页哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验目标：检测受试物对整体动物骨髓细胞染色体畸变致突变性，以评价其致突变可能性。原理：当受试物作用于细胞周期G1期和S期时，可诱发染色体型畸变，而作用于G2期时则诱发染色体单体型畸变。给动物腹腔注射秋水仙素，抑制细胞分裂时纺锤体形成，增加中期分裂相细胞百分比，并使染色体丝缩短、分散，轮廓清楚。在显微镜下便可观察染色体数目和形态。保健食品毒理和功能第31页哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验时间周期：普通为3周

3-5天适应期 小鼠或大鼠经口染毒2-4次，每次间隔24h，在末次染毒18-24h进行取材（取材前2-4h，腹腔注射秋水仙素）。 取股骨，搜集骨髓，制片，染色，镜检剂量设计：同骨髓细胞微核试验保健食品毒理和功能第32页哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验观察及评价指标：每只动物分析100个中期相细胞，每个剂量组不少于1000个。统计染色体数目及结构改变。结果评价：受试物组与对照组染色体畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。保健食品毒理和功能第33页小鼠精子畸形试验目标：检测整体动物体内精子畸形发生率，以评价受试物对体内生殖细胞致突变作用。原理：小鼠精子畸形受基因控制，含有高度遗传性，许多常染色体及X、Y性染色体基因决定精子形态。精子畸形主要是指形态异常，已知精子畸形是决定精子形成基因发生突变结果。所以形态改变提醒相关基因及其蛋白产物改变。保健食品毒理和功能第34页小鼠精子畸形试验时间周期：普通为7周

3-5天适应期 小鼠经口连续染毒5天，于首次给样后35天处死动物 取两侧附睾，搜集精子，滴片，染色，镜检剂量设计：同骨髓细胞微核试验保健食品毒理和功能第35页小鼠精子畸形试验观察及评价指标：每只动物检验1000个精子，统计精子畸形数目及类型。结果评价：受试物组与对照组精子畸变率相比，增高呈剂量反应关系并有统计学意义，试验结果为阳性。保健食品毒理和功能第36页小鼠睾丸染色体畸变试验目标：检测整体动物睾丸染色体畸变发生率，以评价受试物对整体哺乳动物睾丸生殖细胞致突变性。原理：不一样周期雄性生殖细胞对化学物质敏感性不一样，多数情况下化学诱变剂诱发染色体畸变必须经过DNA复制期，故在前细线期处理。第12～14d采样，以观察作用于前细线期引发精母细胞染色体畸变效应。保健食品毒理和功能第37页小鼠睾丸染色体畸变试验时间周期：普通为7周

3-5天适应期 小鼠经口连续染毒5天，与首次给样后12-14天处死动物取材，（取材前6h，腹腔注射秋水仙素）。取两侧睾丸，搜集生殖细胞，滴片，染色，镜检剂量设计：同骨髓细胞微核试验保健食品毒理和功能第38页小鼠睾丸染色体畸变试验观察及评价指标：每只动物分析100个中期相细胞，统计染色体数目及结构改变（包含断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等）。结果评价：受试物组与对照组断片、易位、畸变细胞率、常染色体单价体、性染色体单价体等差异有统计学意义，试验结果为阳性。保健食品毒理和功能第39页遗传毒性试验组合试验结果判定：如三项致突变试验（Ames试验，微核或骨髓细胞染色体畸变试验，精子畸形或睾丸染色体畸变试验）中，体外或体内有一项或以上阳性，普通应放弃该受试物用于保健食品。如三项试验均为阴性，则可继续进行下一步毒性试验。保健食品毒理和功能第40页30天喂养试验目标：急性毒性试验基础上，此试验可深入了解毒性作用，尤其是观察对生长发育影响，并可初步预计最大观察到无作用剂量，预计亚慢性摄入危害性。原理：以不一样剂量受试物每日经口给予各组试验动物，连续30天。染毒期间每日亲密观察动物毒性反应，染毒结束后进行大致解剖、血生化及病理检验，以此观察重复喂食不一样剂量受试物对动物引发有害作用。保健食品毒理和功能第41页30天喂养试验时间周期：在取得了急性毒性数据后，普通为2月

3-5天，大鼠适应期

30天，染毒及试验观察期 再进行大致解剖、血液、生化、器官病理检验。保健食品毒理和功能第42页30天喂养试验剂量设计：最少设三个剂量组和一个对照组。高剂量应能引发动物显著毒效应但不造成动物死亡。低剂量应不出现任何毒作用，同时在这二剂量之间设几个中间剂量组。

对于能取得LD50受试物：最高剂量为10％～25％LD50，最低剂量组最少为人可能摄入量3倍。

对于不能取得LD50受试物：最高剂量为人可能摄入量100倍，或按最大灌胃剂量或在饲料中最大掺入量。保健食品毒理和功能第43页30天喂养试验观察及评价指标：普通情况观察：每日表现、行为、中毒和死亡情况。每七天1次体重及2次食物摄入量，计算食物利用率。血液学指标：喂养结束后测定血红蛋白、红和白细胞总数及分类，必要时测定血小板或网织红细胞数等指标。生化学指标：喂养结束后测定谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌肝、血糖、白蛋白、总蛋白、胆固醇和甘油三酯。病理检验：大致解剖、脏器称重、组织病理学检验。保健食品毒理和功能第44页30天喂养试验试验结果判定：对于只要求进行一、二阶段试验者，最大未观察到有害作用剂量≥人可能摄入量100倍，综合其它试验结果可初步做出安全性评价。最小观察到有害作用剂量≤人可能摄入量100倍，或观察到毒性反应最小剂量组其受试物在饲料中百分比≤10％，放弃。在中低剂量组中个别指标与对照组相比有差异，应综合分析，决定取舍或进行下一步毒理试验。保健食品毒理和功能第45页其它试验结果判断

传统致畸试验：需大于或等于人摄入量100倍。在50倍至100倍之间需进行安全性评价，小于50倍需放弃。

90天喂养试验、繁殖试验：1.仅在国外少数国家或我国局部地域有食用历史原料或成份，需大于或等于人摄入量100倍。2.我国外均无食用历史原料或成份时，需大于或等于人摄入量300倍。在100倍至300倍之间需进行慢性毒性试验，小于100倍需放弃。保健食品毒理和功能第46页其它试验结果判断

慢性毒性试验：以LD50或30天喂养试验最大未观察到有害作用剂量设计受试物各剂量组，未见有毒性作用。

致癌试验阳性判定依据：肿瘤只发生在试验组动物，对照组中无肿瘤发生。试验组和对照组均发生肿瘤，但试验组发生率高。试验组和对照组肿瘤发生率无显著差异，但试验组发生时间较早。符合以上三项中情况之一，并经统计学处理有统计学意义，可认为致癌试验阳性。保健食品毒理和功能第47页安全性评价科学性和艺术性安全性评价艺术性：1.动物试验结果外推到人必须考虑动物与人种属差异；2.安全性标准与社会经济基础、技术能力相符性；3.安全性标准与社会和公众利益之间平衡性。结论：在对化学物质进行科学地安全性评价之后，应结合试验不足，社会经济情况，大家生活习惯等原因，对评价结果作出一个合理分析，为卫生标准制订提供含有实际指导意义依据。保健食品毒理和功能第48页应综合考虑问题1.试验指标统计学意义和生物学意义在分析试验组与对照组指标统计学显著性时，应依据其有没有剂量反应关系及与本试验室历史性对照值范围比较标准,来综合考虑指标差异有没有生物学意义。2.生理作用与毒性作用对试验中一些指标异常改变，在结果分析时要注意区分是生理学表现还是受试物毒性作用。保健食品毒理和功能第49页应综合考虑问题3.时间-毒性效应关系对由受试物引发毒性效应进行分析评价时，要考虑在同一剂量水平下毒性效应随时间改变情况。4.特殊人群和敏感人群对孕妇、乳母或儿童食用保健食品，应尤其注意其胚胎毒性或生殖发育毒性、神经毒性和免疫毒性。保健食品毒理和功能第50页应综合考虑问题5.人可能摄入量较大保健食品应考虑给予受试物量过大时，可能影响营养素摄入量及其生物利用率，从而造成一些毒理学表现，而非受试物本身毒性作用所致。6.含乙醇保健食品对试验中出现一些指标异常改变，在结果分析评价时应注意区分是乙醇本身还是其它成份作用。保健食品毒理和功能第51页应综合考虑问题7.动物年纪对试验结果影响

对试验中出现一些指标异常改变，要考虑是否因动物年纪选择不妥所致。8.安全系数

鉴于动物、人种属和个体之间生物学差异，安全系数通常为100。保健食品毒理和功能第52页应综合考虑问题9.人体资料

在评价保健食品安全性时，应尽可能搜集人群食用受试物后反应资料。10.综合评价

在对保健食品进行最终评价时，必须综合考虑受试物原料起源、理化性质、毒性大小、代谢特点、蓄积性、接触人群范围、食品中使用范围、人可能摄入量及保健功效等原因，确保其对人体健康安全性。保健食品毒理和功能第53页应综合考虑问题11.保健食品安全性重新评价：很早毒性评价可能因为当初科学水平和技术条件限制，现已不适用需重新评价。12.若受试物掺入饲料最大加入量（10％）或液体受试物经浓缩后仍达不到最大观察到有害作用剂量为人可能摄入量要求倍数时，怎样综合其它毒性试验结果进行安全性评价。保健食品毒理和功能第54页审评结论判定1.认可毒理学试验：试验设计合理，操作规范，试验结果能够证实受试物安全性。2.属以下几个情况之一，补充资料后提议同意：（1）检验汇报格式不规范，需要重新出具检验汇报毒理学试验汇报。（2）数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释。（3）未提供一些试验数据，需要补充提供。保健食品毒理和功能第55页审评结论判定3.重做试验，大会再审，属以下几个情况之一：（1）因为试验操作不规范，依据提供检验汇报无法评价产品安全性，需要做除30天/90天喂养试验以外毒理学试验；（2）已经有数据提醒可能存在安全性问题，但难以下结论，需要重复试验。保健食品毒理和功能第56页（1）毒理学评价结果表明产品在推荐剂量下对人体含有一定毒性，存在安全性问题。（2）产品原料、配方存在显著安全性问题，如配方含有“可用于保健食品原料”名单以外原料，且未进行新资源食品安全性毒理学评价。（3）选择安全性毒理学试验不符合程序要求，未完成对应阶段毒理学试验。4.对产品安全性不予认可情况以下（一）：保健食品毒理和功能第57页（4）毒理、功效、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品批号不一致。（5）未按要求提供安全性毒理学评价资料。（6）30天/90天喂养试验剂量设计不合理或一些指标异常，结果不可信。4.对产品安全性不予认可情况以下(二)：保健食品毒理和功能第58页第三个别保健食品新原料安全性

毒理学评价标准保健食品毒理和功能第59页

保健食品新原料（以下简称新原料）是指不在国家食品药品监督管理局公布可用于保健食品、卫生部公布或同意能够食用以及生产普通食品范围内，拟用于保健食品原料。国家食品药品监督管理局和国家相关部门要求不可用于保健食品以及禁止使用物品，不得作为新原料。保健食品新原料定义保健食品毒理和功能第60页

在已同意保健食品中使用过，或卫生部已同意为新资源食品原料，符合以下情况仍按新原料进行管理：未列入国家食品药品监督管理局公布可用于保健食品物品名单；还未列入卫生部公布或同意食品新资源或新资源食品名单内；卫生部已同意为食品新资源或新资源食品，但保健食品注册申请人与食品新资源或新资源食品生产批件中载明申报单位不一致。保健食品新原料定义保健食品毒理和功能第61页评价新原料安全性基础标准符合国家标准和卫生要求，无国家标准应该提供行业标准或自行制订并在相关部门立案质量标准；新原料名称、物种（基源）、生物学或生态学特征、起源及使用部位应确切；加工工艺安全合理，质量稳定、可控；主要成份（或组成）、化学结构明确，含量稳定；适宜人群范围和可能摄入量明确，确定依据充分；保健食品毒理和功能第62页评价新原料安全性基础标准我国外安全性毒理学文件资料、人体食用情况检索汇报及流行病学资料显示，该新原料无食用中毒或有害作用史；安全性毒理学试验结果显示，该原料在可能摄入量下对人体不产生急性、慢性或其它潜在健康危害；微生物类新原料必须有食用习惯和安全食用历史，培养基、菌种及其代谢产物必须无毒无害。保健食品毒理和功能第63页新原料安全性毒理学试验项目标选择①无食用史需做四阶段试验②局部地域有食用史需做三阶段试验

可只做一、二阶段试验包含

1）推荐食用量未超出人群常规用量新原料，若依据相关文件资料及成份分析，未发觉有毒或毒性甚微不至对健康组成损害，或者较大数量人群有长久食用历史且未发觉有害作用

2）已经有权威机构进行系统毒理学安全性评价，且有资料证实所用原料与其一致

如试验结果与权威机构进行评价不一致，需进入下阶段试验新原料安全性毒理学试验要求

保健食品毒理和功能第64页新原料安全性毒理学试验项目标选择③多个国家或我国多数地域广泛食用

1）推荐食用量未超出人群常规用量：先进行第一、二阶段毒性试验，依据试验结果决定是否进行下一阶段毒理学试验

2）推荐食用量超出人群常规用量：进行第一、二、三阶段毒性试验，依据试验结果决定是否进行第四阶段毒性试验。

新原料安全性毒理学试验要求保健食品毒理和功能第65页新原料安全性毒理学试验项目标选择④依据新原料特征、作用机制、已经有试验资料及产品适宜人群等信息，有针对性地选择敏感试验、敏感动物、敏感指标，以全方面了解新原料毒性。

新原料安全性毒理学试验要求保健食品毒理和功能第66页新原料安全性毒理学试验要求新原料安全性毒理学试验项目标选择⑤微生物类新原料除按上述要求进行安全性毒理学试验外，还应进行以下试验：

1）菌种毒力试验；

2）耐药性试验；

3）有可能产生抗菌素、真菌毒素或其它活性物质菌种，应进行相关抗菌素、真菌毒素或其它活性物质检测；

4）菌种代谢产物分析及其不产生有毒有害作用试验。

保健食品毒理和功能第67页新原料安全性毒理学试验要求毒性试验剂量设计1、高剂量组应出现毒性作用但不引发动物死亡，低剂量组应不出现毒性作用，并求出未观察到有害作用剂量（NOAEL）。2、若依据已掌握资料（包含第一、二阶段毒性试验及预试验结果等）判定新原料毒性较小，或人体推荐量较大，则试验最高剂量应为可给予最大剂量（即：饲料中最大掺入量或最大灌胃浓度下一次最大灌胃量）。保健食品毒理和功能第68页新原料安全性毒理学试验要求毒理学试验结果新原料未观察到有害作用剂量（NOAEL）应大于或等于人群可能摄入量100倍；假如人体推荐摄入量较大，试验中可给予最大剂量小于人群可能摄入量100倍，则在可给予最大剂量下不应观察到有害作用。保健食品毒理和功能第69页第四个别保健食品安全性毒理学

评价中存在问题保健食品毒理和功能第70页存在问题

鉴于制订此程序历史背景与当前情况有所不一样，所以，对保健食品安全性评价时，出现了选择毒理试验项目、剂量、样品前处理等问题，现就上述问题一并提出供讨论。保健食品毒理和功能第71页存在问题

充分了解受试物1.要求提供规格化产品，最少是中试产品。符合既定配方，生产工艺和质量标准。2.仔细阅读配方以了解受试物物理、化学性质（包含化学结构、纯度、稳定性等）。3.了解生产工艺。4.按产品说明书最大人体推荐量进行剂量设计。保健食品毒理和功能第72页存在问题

动物年纪主要指30天和90天喂养试验，“程序”中要求用离乳大鼠，而保健食品应视详细情况而异。最经典是人参、鹿茸、减肥产品，并非受试物本身有毒影响了动物生长发育，而是因为这类产品服用对象是成人，所用动物是离乳大鼠。保健食品毒理和功能第73页存在问题试验项目标选择配方中含有仅限局部地域人群食用而又不在“51号”名单上原料，只对产品进行了两阶段毒理试验，而未对原料本身按要求进行毒理学评价，有进行了评价但给予动物受试物方式与实际食用方式不一样，如袋泡茶掺在饲料中给予动物。含“51号”文附录二名单上原料产品只做了LD50和三项致空变试验。保健食品毒理和功能第74页存在问题试验项目标选择药食同源产品经有机溶剂提取未做毒理试验，或只做LD50和微核试验。从食品中提取某一成份粗提物只做了LD50和三项致突变试验，如大豆异黄酮。配方中仅有单一成份，如人参、西洋参、蜂王浆无须进行全部二阶段毒理试验。保健食品毒理和功能第75页存在问题样品前处理（一）液体类（二）酒类（三）固体类（四）菌类（五）以一些食品为载体保健食品：如富含微量元素鸡蛋、南瓜粉等保健食品毒理和功能第76页存在问题LD50中存在问题

1.经口LD50还用对照组。

2.不写禁食时间。

3.做到了21.5g/KgBW,结论是﹥10g/KgBW。

4.将受试物掺入饲料吃24小时。保健食品毒理和功能第77页存在问题Ames试验

1.以油为载体产品直接倒入平皿

2.工艺是低温提取或低温冷冻干燥产品用8磅15分钟高压灭菌。

3.有溶剂对照而无自发回变对照。

4.菌落回变数随剂量增加而增多已超出正常值而不是二倍而出具了合格汇报保健食品毒理和功能第78页存在问题Ames试验

5.有抑菌作用产品不进行预试验找出抑菌剂量而出具了5mg/皿菌落回变数正常汇报。

6.产品中显著含有组氨酸，而不进行除组氨酸前处理。

7.应该用XAD-2树脂对样品进行前处理

8.没有了解5mg/皿含义：系指有效成份，如一些产品含有80%糖，没进行样品前处理或向送样方提出要求，直接用产品做5mg/皿，实际上是1mg/皿。保健食品毒理和功能第79页存在问题

微核、精子畸形以及睾丸染色体畸变试验

1.微核试验：几份汇报中都有阳性对照数据，而这几份原始统计中皆无阳性对照。

2.精子畸形试验：阳性对照组精子畸形率﹤3.4%，即判断阴性对照组与阳性对照组相比差异有显著性P﹤0.05。（正常畸形率为0.8-3.4%）。

3.睾丸染色体畸变试验：阳性对照连续应用一年以上。保健食品毒理和功能第80页存在问题30天或90天喂养试验1.雌性鼠体重比雄性鼠还重或一样重

148.33±8.38172.28±10.93194.82±10.92215.46±14.68231.50±15.15189.83±14.66239.52±17.56288.33±16.92324.14±19.80357.24±22.7267891014.03±2.0330.68±3.2247.61±5.3579.52±6.70118.53±7.1214.44±2.0730.62±4.5649.02±6.1986.86±8.98137.72±11.6912345雄（n=30)雌（n=30)雄（n=30)雌（n=30)体重(g)周龄（周）体重(g)周龄（周）上表为SD大鼠正常体重保健食品毒理和功能第81页存在问题30天或90天喂养试验2.食物利用率雌雄分不开，或为将雌、雄性大鼠食物利用率拉开差距，雌性和雄性大鼠进食量基础一致。3.大鼠进食量越来越高，雌性大鼠700多克、4.雄性大鼠600多克，而体重与食物利用率和以前差不多。5.剂量设计：相当于推荐量（以g/KgBW计）6.56、26和105倍，这是先设计再做试验，还是先做试验再设计？6.受试物掺入饲料量高达18%，袋泡茶掺入饲料给予动物。

保健食品毒理和功能第82页存在问题30天或90天喂养试验7.动物摄入饲料量在30天喂养试验以体重10%计，90天喂养试验以体重8%计，这是经过大量资料统计得出，但将受试物以10-20%浓度饮水给予动物，又不计饮水量，与汇报剂量设计是否基础一致？有按每100gBw给10ml含有受试物水，饮毕再给饮用水？8.有试验动物体重增加迟缓，解释是受试物不好吃。9.生化指标：不做TG、AST；TC高达2.8mmol/L；BUN12.9mmol/L。保健食品毒理和功能第83页存在问题30天或90天喂养试验10.以大鼠为试验动物测尿酸，大鼠代谢与人不完全一样，可将尿酸转化为尿囊素排出。11.病理汇报：心肝脾无毒性损伤，两个产品，两份汇报来自同一检测单位；A4纸写了一大篇，详细描述了病理组织结构，没有一点异常，四个产品、四份汇报起源同一检验单位；写一小段也比较详细描述了病理组织结构，亦无任何异常三个产品、三份汇报亦起源于同一检验单位。保健食品毒理和功能第84页存在问题

传统致畸试验其剂量设计比30天喂养还高，程序已明确以亚急性试验最大无作用剂量为高剂量，目标是：找强致畸物，即含有致畸作用，但无母体毒性出现，这种受试物致畸作用往往较强保健食品毒理和功能第85页存在问题

其它经典问题推荐量较大产品，同一检测单位，30天喂养试验进行了样品前处理到达足够倍数，但LD50、三项致突变试验未进行样品前处理，相当于人推荐量倍数很低；样品进行了前处理但折合到样品量不一致；样品进行了前处理，但汇报中写取一定量样品用盘旋蒸发仪浓缩至所需浓度，剂量设计写是25、50、100ml/KgBw；有汇报要从字里行间为依据替检测单位计算出剂量设计是否正确；Ames试验剂量以每皿百分之多少计。保健食品毒理和功能第86页第五个别保健食品功效性检验及评价保健食品毒理和功能第87页主要内容

基础要求（普通程序）动物功效学试验基础要求人体功效学试验基础要求各功效学试验主要指标评审要求保健食品毒理和功能第88页保健食品功效评价基础要求1.对受试样品要求提供样品物理、化学性质相关资料必须是规格化定型产品提供卫生学和毒理学检验汇报，样品必须同一批次提供功效成份和特征成份或营养成份名称及含量2.对受试样品载体要求以乙醇和糖为载体样品必须提供乙醇和糖含量保健食品毒理和功能第89页1.受试物所提供受试物为组成成份、百分比及纯度与实际产品相同样品；必须在保质期内。2.受试物预处理（详细方法同安全性毒理学评价）处理方法需在试验汇报中详细描述必须说明受试物浓缩或稀释倍数、浓度，据此计算出给予剂量动物功效学试验基础要求保健食品毒理和功能第90页

3.试验动物、受试物给予方式及时间（1）试验动物：性别单一性别年纪依试验要求进行选择数量大鼠每组8-12只小鼠每组10-15只其余要求同安全性毒理学评价要求动物功效学试验基础要求保健食品毒理和功能第91页（2）受试物给予方式：必须经口给予，首选灌胃；若选择饮水或掺入饲料，最高剂量不超出10％；提供每日每剂量组平均饮水量、食物摄入量及周食物利用率（3）给样时间：依据详细功效主要指标而定，7天-120天，普通为30天。动物功效学试验基础要求保健食品毒理和功能第92页

4.剂量设计标准（1）依据产品说明书注明食用方法及用量，确定功效学试验剂量设计是否合理。（2）进行动物试验时最少设三个剂量组，一个阴性对照组，必要时设阳性对照组或空白对照组。以大鼠为试验动物必须有相当于人体推荐量（折算为每千克体重）5倍剂量组。以小鼠为试验动物必须有相当于人体推荐量（折算为每千克体重）10倍剂量组。最高剂量组不超出30倍，还必须在毒理学评价确定安全剂量范围内。当载体或辅料本身可能含有与受试物相同功效时，应设载体对照。动物功效学试验基础要求保健食品毒理和功能第93页人体功效学试验基础要求1.观察对象选择

（1）合理选择受试者按照《保健食品检验与评价技术规范（年）》要求试验对象纳入与排除标准，并同时考虑试食设计要求、受试样品性质等原因。（2）人数试食组和对照组有效例数不少于50人，且试验脱离率普通不得超出10%。试验汇报中必须注明脱离率，不然应给予补充说明。（3）均衡性试验组间年纪、性别、社会情况组成、身体情况以及试验开始时各项功效主要指标均衡可比。保健食品毒理和功能第94页人体功效学试验基础要求2.伦理学审查关键点（1）确保受试对象食用安全。必须在卫生学试验、动物毒理学安全性试验及兴奋剂检测（仅限改进生长发育、减肥功效)完成之后确定产品是安全，符合相关卫生标准要求情况下再进行。标准上还应在动物功效学试验证实其有效前提下进行。注意：汇报中应注明试验开始日期和汇报日期。开始时间应晚于其它试验汇报时间。假如试验在不一样单位进行，必须提供同批号受试样品。人体试验必须得到检验单位伦理学审查委员会同意方能进行，送审资料必须有审查委员签字。保健食品毒理和功能第95页人体功效学试验基础要求（2）受试者在试验开始前应进行常规体检主观感觉生理指标，症状和体征。常规血液学指标生化指标功效性指标，即与保健作用相关指标，如抗氧化、减肥等方面指标。儿童普通不要求测心电图、胸透、腹部B超及肝、肾功效项改进生长发育、缓解视疲劳、辅助改进记忆功效不要求便常规，其它人体试验便常规为必做项目。保健食品毒理和功能第96页人体功效学试验基础要求（3）汇报中需提供必要体检常规项目资料及详细数据。（4）对于选择受试人群需要长久服药试验，受试者必须在服药基础上进行试食试验。（5）如需与医院共同完成试验，必须选择三级甲等医院，汇报中应同时加盖两单位公章，同时需提供三级甲等医院等级证实。（6）改进生长发育和减肥功效产品在人体功效试验进行前需提供兴奋剂检测汇报。保健食品毒理和功能第97页各功效试验审评关键点（一）只要求动物试验项目有：1.增强免疫力功效检验方法主要指标：细胞免疫功效体液免疫功效单核－巨噬细胞功效

NK细胞活性测定判定：四项指标中任两项结果阳性。注意事项：不认可增强单项免疫力功效。保健食品毒理和功能第98页各功效试验审评关键点2.改进睡眠功效检验方法主要指标：戊巴比妥纳睡眠时间试验巴比妥钠睡眠潜伏期试验戊巴比妥钠（或巴比妥钠）阈下剂量催眠试验判定：3项试验中任2项阳性，且直接睡眠作用。注意事项：对动物进行直接睡眠试验时，也要一样注意进行30天灌胃。保健食品毒理和功能第99页各功效试验审评关键点3.缓解体力疲劳检验方法主要指标：血乳酸血清尿素肝糖原/肌糖原动物负重游泳试验判定：负重游泳试验结果阳性，血乳酸曲线下面积、血清尿素、肝糖/肌糖原3项生化指标中任2项指标阳性。注意事项：（1）对同批受试样品进行违禁药品检测。（2）在负重游泳试验时，酒类样品测试当日能够不灌胃。保健食品毒理和功能第100页各功效试验审评关键点4.提升缺氧耐受力功效检验方法主要指标：常压耐缺氧试验亚硝酸钠中毒存活试验急性脑缺血性缺氧试验判定：三项试验中任二项试验结果阳性。注意事项：每批试验动物体重尽可能保持一致。保健食品毒理和功能第101页各功效试验审评关键点5.对辐射危害有辅助保护功效检验方法主要指标：外周血白细胞计数骨髓细胞DNA含量或骨髓有核细胞数小鼠骨髓细胞微核试验血/组织中SOD活性试验血清溶血素含量试验判定：以上5项试验中任3选项进行试验，3项试验中任何2项试验结果阳性。注意事项：选取小鼠，受试样品于照射前给予14～30天，照射后依然给予受试物，必要时可延至45天。保健食品毒理和功能第102页各功效试验审评关键点6.增加骨密度功效检验方法依据受试样品作用原理不一样，分为方案一（补钙为主受试物）和方案二（不含钙或不以补钙为主受试物）两种。主要指标：体重骨钙含量骨密度判定：（方案一）骨钙含量/骨密度显著高于低钙对照组且不低于对应剂量碳酸钙对照组，钙吸收率不低于碳酸钙对照组。保健食品毒理和功能第103页各功效试验审评关键点

（方案二）①不含钙产品：骨钙含量/骨密度较模型对照组显著增加，其它指标（体重除外）不显著低于卵巢切除＋溶剂组。②不以补钙为主（可少许含钙）产品：骨钙含量/骨密度较模型对照组显著增加，差异有统计学意义，且不低于对应剂量碳酸钙对照组，其它指标（体重除外）不显著低于卵巢切除＋溶剂组。注意事项：（1）使用未同意用于食品钙化合物，除必做主要指标外，还必须进行钙吸收率测定；使用属营养强化剂范围内钙源及来自普通食品钙源能够不进行钙吸收率试验。（2）必须使用单光子骨矿密度仪或双能X线骨密度仪或其它相关仪器测量股骨中点及股骨远心端单位面积骨矿含量。保健食品毒理和功能第104页各功效试验审评关键点7.对化学性肝损伤有辅助保护作用检验方法依据样品用途进行选择，方案一（四氯化碳肝损伤模型）和方案二（酒精肝损伤模型）方案一主要指标：谷丙转氨酶+谷草转氨酶+肝组织病理学检验判定：模型成立前提下，ALT或AST任一项指标阳性，病理结果阳性。方案二主要指标：丙二醛+还原型谷胱甘肽+甘油三酯+肝组织病理学检验判定：满足以下任一条件，可判定该受试物含有对酒精性肝损伤有辅助性保护作用①肝脏MDA、GSH、TG三项指标结果阳性；②肝脏MDA、GSH、TG三指标中任2项指标阳性，且肝脏病理结果阳性。注意事项：汇报中需提供列表详细描述肝脏病理情况。保健食品毒理和功能第105页各功效试验审评关键点（二）只要求人体试验项目有：1.缓解视疲劳功效试验受试对象：为儿童、青少年或成人，长久用眼，视力易疲劳者。排除患有眼部疾病者、短期内服用与受试物功效相关物品者或长久服用其它相关治疗视力药品或使用其它治疗方法者。要求：考虑年纪、性别等原因，进行均衡性检验。保健食品毒理和功能第106页各功效试验审评关键点2.祛痤疮功效试验受试对象：选择临床痤疮I－III度自愿健康受试者，排除因病理性原因及妊娠及哺乳期妇女。要求：尽可能考虑年纪、性别、病程等原因，进行均衡性检验受试者在试验期间停顿使用其它口服及外用相关养颜祛痤疮用具。保健食品毒理和功能第107页各功效试验审评关键点3.祛黄褐斑功效试验受试对象：选择无显著自觉症状，无显著内分泌疾病，并排除其它疾病引发色素从容健康受试者。要求：尽可能考虑户外活动、年纪、性别等原因，进行均衡性检验。受试者在试验期间停顿使用其它口服及外用相关养颜祛斑用具。本身前后对照，不产生新黄褐斑。保健食品毒理和功能第108页各功效试验审评关键点4.改进皮肤水份功效试验受试对象：受试者年纪为30～50岁，皮肤水分≦12。要求：尽可能考虑年纪等原因，进行均衡性检验。在试验期间不得服用其它保持皮肤水分物品及影响结果判定化装品。测定前额眉间皮肤水份。保健食品毒理和功能第109页各功效试验审评关键点5.改进皮肤油份功效试验受试对象：受试者年纪为30～50岁，皮肤油份≦10或皮肤油份≥27。要求：考虑年纪等原因，进行均衡性检验。受试者在试验期间不得服用其它保持保持油份物品及影响结果判定化装品。测定前额眉间皮肤油份。保健食品毒理和功能第110页各功效试验审评关键点（三）动物试验和人体试验都要求项目有：1.辅助降血脂功效检验方法动物试验主要指标：血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇判定：任两项指标成立，辅助降血脂功效成立。注意事项：（1）保留降低甘油三酯和血清总胆固醇单项功效。（2）试验开始前，所选动物血清总胆固醇一定要均衡，喂饲高脂饲料后，总胆固醇与甘油三酯一定都要阳性。人体试验受试对象：单纯血脂异常人群，最好为非住院高血脂症患者。要求：（1）在试验分组时，尽可能考虑如年纪、性别、饮食等原因，进行均衡性检验（2）受试期间受试者保持平日生活和饮食习惯，空腹取血测定各项主要指标。保健食品毒理和功能第111页各功效试验审评关键点2.辅助降血糖功效检验方法动物试验主要指标：空腹血糖、糖耐量判定：在模型成立前提下，两项指标中一项阳性，且对正常动物空腹血糖无影响。注意事项：在糖耐量试验中，不但要计算血糖值，更要对血糖曲线下面积进行计算。人体试验受试对象：选择经饮食控制或口服降糖药治疗后病情较稳定，不需要更换药品品种及剂量，仅服用维持量成年Ⅱ型糖尿病病人。要求：（1）在试验分组时，尽可能考虑如病程、服药种类等原因，进行均衡性检验。（2）试食间坚持饮食控制。保健食品毒理和功能第112页各功效试验审评关键点3.抗氧化功效检验方法动物试验主要指标：过氧化脂质含量（MDA等）抗氧化酶活性（SOD、GSH-Px）判定：过氧化脂质含量中任一指标和抗氧化酶活性中任一指标同为阳性。注意事项：选取12月龄以上老龄大鼠或8～12月龄老龄小鼠，也可用成年小鼠造模。人体试验受试对象：选则年纪在45－65岁身体健康者要求：（1）尽可能考虑如年纪、性别、饮食等原因。（2）与动物试验不一样，过氧化质含量、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶三项试验中任一项试验结果阳性，可判定受试物含有抗氧化功效。保健食品毒理和功能第113页各功效试验审评关键点4.辅助改进记忆功效检验方法动物试验主要试验：跳台试验避暗试验穿梭箱试验水迷宫试验判定：4项动物试验中任2项阳性,重复试验结果一致（所重复同一项试验两次结果均为阳性）。注意事项：（1）用于改进儿童记忆产品须用断乳鼠；用于改进老年人记忆产品必须采取成年鼠。（2）试验动物不能够重复使用，重复试验时必须采取另外一批动物。保健食品毒理和功能第114页各功效试验审评关键点4.辅助改进记忆功效检验方法人体试验试验设计：对照、双盲、随机受试对象：从比较集中、各方面影响原因大致相同群体中挑选受试者，比如学校、部队。文化程度基础一致，且未接收过类似测试。要求：（1）分组时考虑如年纪、性别、文化水平、工作性质等原因，进行均衡性检验。（2）属同一年纪组，如不在同一年纪组，则应对量表分进行校正。（3）施测次序是先听觉测试后视觉测试。保健食品毒理和功能第115页各功效试验审评关键点5.促进排铅功效检验方法动物试验：预防性高铅动物模型和治疗性高铅动物模型选其一主要指标：血铅骨铅肝组织铅判定：骨铅或肝组织铅有一项阳性。注意事项：设阳性对照时，推荐使用二丁基巯二酸或Na2CaEDTA。人体试验受试对象：选择血铅含量较高自愿受试者，儿童血铅100μg/L以上，成人血铅200μg/L以上。要求：尽可能考虑如铅接触史、年纪、性别等原因，进行均衡检验。保健食品毒理和功能第116页各功效试验审评关键点6.清咽功效检验方法动物试验：大鼠棉球植入试验或大鼠足趾肿胀试验任选其一主要指标：肉芽肿净量（棉球植入试验）致炎剂刺激前后足跖厚度差异（足趾肿胀试验）判定：肉芽肿净量或致炎剂刺激前后足跖厚度差异阳性。注意事项：动物摄食量降低和体重减轻，亦可降低肉芽重量，故应以mg（肉芽肿）/100g（体重）表示。人体试验受试对象：慢性咽炎人群，咽炎急性发作期及病变转移至咽部人应排除。要求：尽可能考虑如病程、年纪、性别等原因，进行均衡性检验。保健食品毒理和功能第117页各功效试验审评关键点7.辅助降血压功效检验方法动物试验主要指标：血压、心率判定：试验动物血压显著低于模型对照组，差异含有显著性，且对试验组动物心率和正常动物血压及心率无影响。注意事项：首选自发高血压大鼠，雌雄能够兼用。其次为肾血管型高血压大鼠。人体试验受试对象：观察受试者为原发性高血压患者，继发性高血压患者应排除。要求：（1）受试者在试食观察期间不该变原有抗高血压药品治疗方案。（2）可能考虑如病程、病情、服用药类、年纪、性别等原因，进行均衡性检验。保健食品毒理和功能第118页各功效试验审评关键点8.促进泌乳功效检验方法动物试验：选超负荷哺乳或乳缺模型任一个主要指标：母鼠体重仔鼠体重判定：鼠体重显著增加，差异含有显著性。注意事项：（1）选取3日内产仔第二胎母鼠及其仔鼠，每窝仔鼠数目应相同。（2）推荐使用饮水或加入饲料方式给予受试样品。（3）试验结束期限为仔鼠断乳（出生21天左右）。人体试验受试对象：乳母年纪<35岁，乳量不足，婴儿吃不饱，母子身体均健康志愿受试者。因病理性原因造成缺乳受试者应该排除。要求：尽可能考虑如乳母年纪、婴儿出生天数、饮食情况、家庭经济情况等原因，进行均衡性检验。保健食品毒理和功能第119页各功效试验审评关键点9.减肥功效检验方法动物试验主要指标：体重、摄食量、体内脂肪重量、脂/体比判定：（体重和体内脂肪重量）或（体重和脂/体比）阳性，摄食量不显著低于模型对照组。注意事项：（1）选取雄性大鼠。（2）该试验经常存在着毒理学与功效学食物利用率不一致现象。毒理学上动物食物利用率在把握上能够适当放宽。动物起始体重也能够适当放宽。（3）必须对同批受试样品进行违禁药品检测，引发腹泻或抑制食欲受试样品不能作为减肥功效食品。（4）不替换主食减肥功效食品，动物试验和人体试验必做。替换主食减肥功效食品，能够不做动物试验，仅进行人体试食试验。保健食品毒理和功能第120页各功效试验审评关键点9.减肥功效检验方法人体试验试验设计：不替换主食减肥功效试验采取本身对照及组间对照。替换主食减肥功效试验只设单一试食组。受试对象：单纯性肥胖人群，排除病理性肥胖人群。要求：有违禁药品检测汇报、规范膳食、运动调查及评价方法。①在汇报中提供完整膳食分析（于试验开始前、结束前进行三天问询法膳食调查）。②汇报中应有对运动情况描述。运动耐力测试方法为功率自行车试验，不认可其它试验方法。③生化主要指标增做血尿酸、尿酮体主要指标，④体内脂肪总量和脂肪占体重百分率，用水下称重法或电阻抗法。皮下脂肪厚度用B超测定法或皮卡钳法。⑤同时汇报中还要求有对其它不良发应观察描述。保健食品毒理和功能第121页各功效试验审评关键点10.改进生长发育功效检验方法动物试验主要指标：体重、身长、食物利用率判定：（1）体重、身长增加显著高于对照组，差异含有显著性，（2）食物利用率不显著低于对照组。注意事项：（1）选取断乳大鼠。（2）假如食物利用率显著低于对照组，则该样品含有不利于动物生长发育成份，则不具备改进生长发育功效。保健食品毒理和功能第122页各功效试验审评关键点10.改进生长发育功效检验方法人体试验受试对象：选择无器质性疾病，身高或体重低于同年纪组平均水平1个标准差范围内6-10岁儿童。要求：（1）提供兴奋剂检测汇报（2）分组时考虑胸围、上臂围、体内脂肪含量以及年纪运动和家庭经济水平等，进行组间均衡性检验。（3）受试物给予时间：不少于3个月，必要时延长至6个月。保健食品毒理和功能第123页各功效试验审评关键点11.改进营养性贫血功效检验方法动物试验主要指标：体重血红蛋白红细胞内游离原卟啉判定：血红蛋白和红细胞内游离原卟啉2项主要指标阳性注意事项：（1）本项试验关键在于贫血模型建立。（2）低铁饲料含量最好控制在9mg/kg以下。（3）动物饮用水应为去离子水或双蒸水。保健食品毒理和功能第124页各功效试验审评关键点11.改进营养性贫血功效检验方法人体试验试验设计：采取本身和组间两种对照设计。受试对象：为小细胞低色素贫血，且有明确缺铁原因和临床表现成人和儿童。排除因病理性原因造成贫血及严重贫血患者。要求：（1）分组时考虑年纪、性别、经济情况等原因，进行均衡性检验。（2）于试验开始前、结束前进行三天问询法膳食调查，观察饮食原因对试验结果影响。（3）汇报中应表达筛除其类型贫血方法。保健食品毒理和功能第125页各功效试验审评关键点12.