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文档简介

利用16SrDNA鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属1.什么是16SrDNA？16SrRNA为原核生物核糖体RNA的一个亚基，16SrDNA就是编码该亚基的基因。原核生物的rRNA含有3种类型：23S、16S、5SrRNA，它们分别含有2900、1540和120个核苷酸。2.用16SrDNA进行细菌鉴定的原因16SrDNA在原核生物中普遍存在。16SrDNA的相对分子量大小适中，约1500bp，便于序列分析。在16SrRNA分子中，既含有高度保守的序列区域，又有中度保守和高度变化的序列区域，因而它适用于进化距离不同的各类生物亲缘关系的研究。bp=basepair16S鉴定细菌的种属图

16SrDNA基因组成（灰色为保守区，绿色为可变区）

16SrDNA基因全长1542bp，由9个可变区和10个保守区组成。其中保守区反映了生物物种间的亲缘关系，而可变区则表明物种间的差异，且变异程度与细菌的系统发育密切相关。16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属DNA的提取挑取单菌落,然后置于装有100μLPrepManUltra的离心管中,涡旋震荡混匀30s左右，然后100℃水浴10min后，以离心机最大转速离心3min，取10μL上清液与490μLddH2O（即稀释50倍），混匀作为下步PCR的模板DNA。提取的DNA于-20℃保存。检测：核酸蛋白仪/琼脂糖凝胶电泳16S鉴定细菌的种属1525R5'AAGGAGGTGWTCCARCC3'16S鉴定细菌的种属PCR反应条件试剂使用量（20μL体系）模板DNA（10ng~100ng）2μLTaq酶(5U/μL)0.2μL10×TaqBuffer(Mg2+)

2μLdNTPs(2.5mM)1μL引物F(10μM)0.5μL引物R(10μM)0.5μLddH2O13.8μL1min30s16S鉴定细菌的种属判断16SrDNA序列扩增是否成功:经琼脂糖凝胶电泳在1500bp附近出现条带，说明16srDNA已经扩增成功。16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细菌的种属16S鉴定细

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