组化抗原抗体

组化抗原抗体组化抗原抗体第1页

免疫组织化学是依据抗原与抗体特异性结合原理，以细胞中特异成份为抗原，用标识抗体在组织细胞原位经过抗原抗体反应和组织化学呈色反应，对对应抗原及其抗体进行定性、定位、定量测定一个免疫检测技术方法。组化抗原抗体第2页基础原理：

抗原抗体反应标识化学反应呈色化学反应概述组化抗原抗体第3页与IHCT相关免疫学基础：

抗原：能刺激机体引发抗体产生，并与对应抗体发生特异性结合物质—抗体原。抗体：针对某种抗原而产生，并能识别对应抗原，与其发生特异性结合组化抗原抗体第4页第一节抗原1.概念

凡能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答；并能与对应在体内或体外发生特异性结合物质称为抗原（Antigen，Ag

）。

组化抗原抗体第5页刺激机体免疫系统特异性反应特异性反应

抗原（图示）上页组化抗原抗体第6页

抗原主要含有两方面特征，抗原能引发机体产生抗体（和/或致敏淋巴细胞），称之为免疫原性；抗原还与对应抗体（及致敏淋巴细胞）发生特异性结合或反应，称为免疫反应性。组化抗原抗体第7页免疫原性抗原

免疫反应性FujianBloodCenter/组化抗原抗体第8页

2.抗原化学结构

一个天然抗原含有二种结构，一是高分子载体（免疫原性）二是抗原决定簇（特异性）组化抗原抗体第9页3.抗原性质

异物性、大分子、特异性为抗原共同性质，凡种系越远、分子量越大、构型越复杂、抗原决定簇暴露越多，则其抗原性越强，特异性越高。。

组化抗原抗体第10页抗原免疫原性（一）异物性（二）理化特征

1.分子量

2.化学组成和结构

3.物理性状下页组化抗原抗体第11页异物性返回概念：指该抗原与本身正常组织成份差异程度。异物性分类

①异种物质②同种异体物质③本身物质完组化抗原抗体第12页理化特征

1.抗原分子大小分子量越大，免疫原性越强：1.表面抗原决定簇多，对淋巴细胞活化作用强。2.大分子物质溶于水中呈胶体状，化学结构较稳定，不易被机体破坏或排除，体内存留时间长。组化抗原抗体第13页2.化学组成和结构

复杂

蛋白质：大分子，免疫原性强。多糖：细菌荚膜多糖有免疫原性。核酸：免疫原性弱核蛋白：有免疫原性。类脂：无免疫原性组化抗原抗体第14页

2.抗原分子化学组成和结构氨基酸残基位置和间距与免疫原性关系组化抗原抗体第15页

3.物理性状

*含芳香族氨基酸较多蛋白质，免疫原性强，反之则较弱*聚合体蛋白质分子：免疫原性强*单体可溶性蛋白质分子：免疫原性弱

说明：抗原物质化学成份和结构越复杂，其免疫原性就强。组化抗原抗体第16页

抗原特异性

1.即专一性能；

2.是免疫应答基础特点；

3.是免疫学诊疗与防治理论依据；组化抗原抗体第17页免疫反应特异性物质基础---抗原决定簇(antigenicdeterminant)或表位(epitope)：是指抗原分子中决定抗原特异性特殊化学基团。组化抗原抗体第18页

大多数蛋白质抗原可有多个抗原决定簇,但因为空间位阻作用,在同一时间内仅有个别抗原决定簇暴露和对应抗体结合。

抗原结合价：一个抗原分子上能与对应抗体分子结合抗原决定簇总数。组化抗原抗体第19页共同抗原表位与交叉反应*共同抗原（commonantigen):

两种不一样抗原含有相同或相同抗原决定簇，互称共同抗原。*交叉反应：由共同抗原决定簇刺激机体产生抗体能够和两种共同抗原结合发生反应。●天然抗原有多个抗原决定簇，故为多价抗原。●半抗原仅有一个抗原决定簇，故为单价抗原。组化抗原抗体第20页

抗原类型繁多，分类方法也很多，故抗原名称各种各样。

依据溶解性抗原有可溶和不溶性两类。组化抗原抗体第21页抗原种类返回组化抗原抗体第22页第二节抗体

1.抗体概念抗体（antibody）是机体受抗原刺激后经过体液免疫应答，由B淋巴细胞活化、增殖、分化浆细胞合成并分泌，能与对应抗原发生特异性结合反应免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。组化抗原抗体第23页相关概念免疫球蛋白:是浆细胞产生球蛋白。１、抗体（antibodies,Ab）：是机体免疫细胞受抗原物质刺激后产生，能与对应抗原特异性结合，并含有各种免疫学、生物学活性球蛋白。2、免疫球蛋白（immunoglobulins,Ig）：指含有抗体活性或化学结构与抗体相同球蛋白。

组化抗原抗体第24页

抗体是免疫球蛋白，而免疫球蛋白不都含有抗体活性。抗体是生物学和功效上命名，而Ig是结构和化学本质上概念。组化抗原抗体第25页免疫球蛋白基础结构

(一)重链（heavychain，H）

2条

轻链（lightchain，L）2条

(二)可变区（variableregion,V区）恒定区（constantregion,C区）

(三)铰链区（hingeregion）

(四)结构域组化抗原抗体第26页

①Ig单体基础结构是由二条相同轻链和二条相同重链组成，各自链间（轻–重或重–重链）由二硫键（–S–S–）相连接，呈Y字构型（图解）②Ig分子氨基酸构型可分为可变区（N-端）和恒定区（C-端）两部份。组化抗原抗体第27页组化抗原抗体第28页基础结构基础结构组化抗原抗体第29页可变区（variableregions,V区）

位于免疫球蛋白多肽链N端，占轻链1/2与重链1/4。该区氨基酸组成及排列次序随抗体特异性不一样而发生改变。它赋予抗体以特异性。组化抗原抗体第30页恒定区（constantregions,C区）

位于免疫球蛋白多肽链N端，占轻链1/2与重链3/4。其氨基酸组成及排列次序都比较恒定。

组化抗原抗体第31页抗体基础结构

③人类Ig有五类，即IgG、IgM、IgA、IgD、IgE，是由其分子结构中对应重链（H链）—

γ、μ、α、δ、ξ决定。

重链不一样，Ig类型就不一样。组化抗原抗体第32页

抗体特征

①Ig都是大分子蛋白质，既含有免疫原性，又含有能与对应抗原结合抗体活性。

组化抗原抗体第33页②免疫原性类属特异性是由Ig分子重链和轻链恒定区特定氨基酸序列所决定。抗体特异性结合抗原活性位点存在于Ig可变区。组化抗原抗体第34页③Ig由B淋巴细胞衍生浆细胞生成，主要以可溶性蛋白形式存在于体液中。④Ig主要生物学功效有：特异性结合抗原；活化补体；结合Fc受体等。⑤一个（IgG）抗体分子含有两个抗原结合位点（两价）。组化抗原抗体第35页

血清型同种异型

同一物种不一样个体间Ig分子所含有(allotype)特异性不一样抗原决定簇，遗传标志。

Ig含有与Ag特异性结合特征，又有免疫原性。

同种型

同一物种全部个体间Ig分子所共有(isotype)抗原特异性。独特型

不一样B细胞产生Ig分子V区所含有(idiotype)抗原特异性标志

组化抗原抗体第36页免疫球蛋白水解片段

1.木瓜蛋白酶（Papain）IgG

Fab段(fragmentofantigen-

binding,抗原结合

片段)

Fc段（fragmentcrystalizable,可结晶片段）

2.胃蛋白酶（Pepsin）IgG

F(ab′)2pFc′3.意义：说明Ig分子生物学作用；构建基因工程抗体。组化抗原抗体第37页酶水解免疫球蛋白示意图Fab段(fragmentantigenbinding)F(ab’)2段：大片段，功效同Fab段木瓜蛋白酶（papain)胃蛋白酶(pepsin)Fc段(fragmentcrystallizable)pFc’：小分子多肽碎片，无生物学活性组化抗原抗体第38页抗体种类⑴依起源分━①免疫抗体；②天然抗体；③本身抗体。⑵依反应分━①完全抗体；②不完全抗体。⑶依制备方法分—

①多克隆抗体；②单克隆抗体；③基因工程抗体。组化抗原抗体第39页

抗体是免疫组织化学技术最关键试剂与示踪工具。按制备方法分类：

1、多克隆抗体(polyclonalantibody,PcAb)2、单克隆抗体(monoclonalantibody,McAb)3、基因工程抗体(geneticengineeringantibody)。组化抗原抗体第40页

1、多克隆抗体：是多个B淋巴细胞克隆所产生抗体混合物。是将纯化后抗原直接免疫动物后，从动物血中所取得免疫血清。

特异性低，会产生抗体交叉反应。

2、单克隆抗体：是一个B淋巴细胞克隆分泌针对单一抗原决定簇抗体。

特异性强、抗体产量高。组化抗原抗体第41页McAbandPcAb组化抗原抗体第42页3、基因工程抗体又称重组抗体

是指应用NDA重组及蛋白工程技术对编码抗体基因按不一样需要进行改造和装配，经导入适当受体细胞后重新表示抗体。组化抗原抗体第43页抗体类型技术应用类型：

1、特异性抗体（一级抗体）

2、抗抗体（二级抗体）

3、标识抗体组化抗原抗体第44页

抗体购置及注意事项

1.抗体购置

当前商品化抗体已经有上千种，一个抗体能够有数家企业生产，其质量好坏也存在很大差异，首先应选择一家好生产企业，依据文件提供信息，选择所需试剂型号。组化抗原抗体第45页2.购置抗体注意事项

(1)种属：单克隆抗体，多克隆抗体

(2)能否用于石蜡切片

(3)稀释度

(4)特异性，交叉反应

(5)用何种组织前处理形式

(6)包装单位，价格组化抗原抗体第46页第三节抗原抗体反应

抗原与对应抗体之间特异性结合反应。组化抗原抗体第47页基础原理抗原抗体反应原理

Ag决定簇和Ab分子超变区相互作用(含有互补性与亲和性)分子表面特异可逆弱结协力在极短距离内才能发生基础条件：结协力亲和性亲水胶体转化为疏水胶体组化抗原抗体第48页抗原和抗体结合是互补性特异性结合不形成牢靠共价键，经过非共价键结合这种弱结协力包括几个分子间作用力

一、抗原抗体结协力一、抗原抗体结协力*1．静电引力*2．范德华引力*3．氢键结协力*4．疏水作用力组化抗原抗体第49页

抗原抗体结协力示意图抗原抗体氢键结协力

ONONHH静电引力--++范得华力-++-+--+疏水作用力排斥水组化抗原抗体第50页抗原抗体反应特点*1.特异性*2.百分比性*3.可逆性

组化抗原抗体第51页

特异性（specificity）*概念：某种抗原分子，只能与由它刺激所产生抗体结合而起反应专一性能。*决定原因：由抗原决定簇和抗体分子超变区之间空间结构互补性决定。*交叉反应(crossreaction)两种不一样抗原物质含有个别相同或类似结构抗原决定簇，则可与彼此对应抗体反应。组化抗原抗体第52页

特异性示意图组化抗原抗体第53页*最适比(optimalratio)或等价点(equivzlencepoint)

最快速出现沉淀时抗原抗体浓度比或量比。

百分比性（proportionality）

等价带(zoneofequivalence)抗原与抗体分子百分比适当范围。带现象：Ag与Ab百分比不适而不出现可见反应。*前带(prezone)抗体过量时。*后带(postzone)

抗原过量时。组化抗原抗体第54页

百分比性示意图抗体过量百分比适当抗原量抗原过量免疫复合物沉淀量前带等价带后带组化抗原抗体第55页组化抗原抗体第56页可逆性（reversibility)概念：是指抗原与抗体结合成复合物后，在一定条件下可解离为游离抗原与抗体特征。

后抗原抗体仍保持原有特征。解离条件：低pH、高浓度盐等。常见于解离抗原抗体复合物物质有：

3mol/L硫氰化钾、pH2.40.1mol/L甘氨酸、

7mol/L尿素等。组化抗原抗体第57页抗原抗体反应影响原因一、反应物本身原因

*抗原：1.理化特征

2.Ag决定簇数量