光激化学发光技术介绍

Light

Initiated

ChemiluminescenceAssay光激化学发光〔LiCA〕1第一页，共44页。光激化学发光〔LiCA〕介绍以高分子微粒为根底两种微粒近距离离子氧能量传递主要特点：高灵敏度低本底稳定均相免洗广泛应用于生物分子间的相互作用2第二页，共44页。微粒的组成感光微粒内含感光化合物发光微粒内含发光化合物和镧系元素微粒直径188nm，外表覆盖水凝胶共价连接增大的外表积成百上千个生物分子，捕获目标分子3第三页，共44页。LiCA发光原理核心原理是能量的近距离转移转移的介质是高能态离子氧红色激光680nm照射，感光微粒释放离子氧〔4微秒〕，传播直径200nm，发光微粒〔520～618nm〕，高能级的光反响的根底有赖于两种微粒的相互接近反响体系中，微粒的浓度很低，碰撞机率很低，本底信号微弱4第四页，共44页。原理(1)发射光520-620nm发光微球1O2AB激发光680nm感光微球200nm5第五页，共44页。原理(2)激发光680nm感光微球A发光微球CO2-6第六页，共44页。LiCA的技术特点〔一〕高灵敏度信号产生逐级放大的结果每个感光微粒释放出近6万个离子氧离子氧作用于二甲基噻吩，产生大量紫外光紫外光激发镧系元素实际检测能力为10-15摩尔理论检测能力为10-18摩尔7第七页，共44页。LiCA的技术特点〔二〕低本底时间分辨模式采集光信号〔延迟150ms〕，天然荧光的寿命小于100ns采用680nm红光激发，生物样品中的荧光物质不敏感发射光的波长比激发光的波长短，能量更高，有别于荧光，有效防止荧光物质干扰8第八页，共44页。稳定均相环境使反响更充分免洗操作杜绝随机误差和交叉污染感光和发光的有机分子受到微粒的保护，环境稳定和平安溶液中的氧浓度是一个常数不易受到pH值、离子强度和温度的影响LiCA的技术特点〔三〕9第九页，共44页。临床免疫的各项检测生命科学的根底研究新药的筛选标记简便检测过程简单广泛应用10第十页，共44页。根本包被模式GG-Streptavidin〔SA〕FG-Antibody〔Ab〕11第十一页，共44页。根本反响模式biotin-antigenprimaryAbsecondaryAb(orproteinA,G,LA)12第十二页，共44页。应用类型配体－受体激酶蛋白－蛋白免疫蛋白酶蛋白－DNA13第十三页，共44页。配体－受体(1)TNFa-sTNFR1Biotinanti-TNFR1IgGFG-TNFaProteinA-sTNFR114第十四页，共44页。配体－受体(1)TNFa-sTNFR1GG-SABiotinanti-TNFR1IgGFG-TNFaProteinA-sTNFR115第十五页，共44页。配体－受体(1)TNFa-sTNFR1GG-SABiotinanti-TNFR1IgGFG-TNFaProteinA-sTNFR116第十六页，共44页。配体－受体(2)环磷酸腺苷

cAMPBiotinFG-cAMPanti-cAMP-17第十七页，共44页。配体－受体(2)环磷酸腺苷

cAMPGG-SABiotinFG-cAMPanti-cAMP-18第十八页，共44页。激酶AktBiotinanti-Gsk3IgGFG-Gsk3ProteinA-19第十九页，共44页。激酶AktBiotinanti-Gsk3IgGFG-Gsk3ProteinA-20第二十页，共44页。激酶AktGG-SABiotinanti-Gsk3IgGFG-Gsk3ProteinA-Akt磷酸化21第二十一页，共44页。激酶AktGG-SABiotinanti-Gsk3IgGFG-Gsk3ProteinA-Akt22第二十二页，共44页。蛋白－蛋白BiotinFG-p53Anti-GST-p53/HDM2HDM2-GST23第二十三页，共44页。蛋白－蛋白GG-SABiotinFG-p53Anti-GST-p53/HDM2HDM2-GST24第二十四页，共44页。免疫(1)肿瘤坏死因子TNFaBiotinFG-anti-TNFaanti-TNFa-TNFa25第二十五页，共44页。免疫(1)肿瘤坏死因子TNFaGG-SABiotinFG-anti-TNFaanti-TNFa-TNFa26第二十六页，共44页。免疫(2)Biotinanti-TNFaFG-anti-TNFaProteinA-TNFa肿瘤坏死因子TNFaGG-SA27第二十七页，共44页。免疫(2)GG-SABiotinanti-TNFaFG-anti-TNFaProteinA-TNFa肿瘤坏死因子TNFa28第二十八页，共44页。蛋白酶(1)GG-SABiotinFG-substrateanti-digoxigenin-组织蛋白酶CathepsinD-digoxigeninCathepsinD

水解29第二十九页，共44页。蛋白酶(2)ACEBiotinFG-angiotensinIanti-angiotensinII-ACE切割30第三十页，共44页。蛋白酶(2)ACEGG-SABiotinFG-angiotensinIIanti-angiotensinII-31第三十一页，共44页。蛋白－DNAERa-DNABiotinFG-ERaanti-digoxigenin--digoxigeninDNA32第三十二页，共44页。蛋白－DNAERa-EREGG-SABiotinFG-ERaanti-digoxigenin--digoxigeninDNA33第三十三页，共44页。当前成功应用实例34第三十四页，共44页。HBsAgGG-SABiotin-Anti-HBsAnti-HBs-FGHBsAg35第三十五页，共44页。Anti-HBsGG-SABiotin-HBsAgFGHBsAg-Anti-HBs36第三十六页，共44页。HBeAgGG-SABiotinFG-Anti-HBeAnti-HBe-HBeAg37第三十七页，共44页。Anti-HBeGG-SABiotinFG-Anti-HBeAnti-HBe-中和HBeAgSampleAnti-HBe38第三十八页，共44页。Anti-HBcGG-SABiotinFG-HBcAgAnti-HBc-Anti-HBc39第三十九页，共44页。检测平台40第四十页，共44页。LiCASP