十一章胚胎移植课件

第十一章胚胎移植胚胎移植技术概述胚胎移植的意义国内外发展概况胚胎移植的基本原则牛胚胎移植操作步骤一、概述（一）概念胚胎移植是指将一头良种母畜配种后的早期胚胎取出（或通过体外受精及及其他方式得到体外生产的胚胎），移植到另一头同种且生理状态相同的母畜体内，使之继续发育成为新个体的过程。也称作借腹怀胎。提供胚胎的个体为供体(Donor)，接受胚胎的个体为受体(Recipient)。（二）发展概况1890年英国第一次兔获得胚胎移植成功1934年绵羊1949年山羊1951年猪、牛1970年马1975年1月美国丹佛召开第一届国际胚胎移植学会1980年代欧洲使用MOET奶牛育种1.充分发挥优良母畜的繁殖潜力以奶牛为例，按照目前的技术水平，供体母牛每隔60d可进行超排处理一次，每次能获得可用胚胎4-5枚，一头良种母牛每年能生产可用胚胎25-30枚，移植到受体内能获得12-15头犊牛，而在自然状态下，一头母牛平均每年只能获得一头犊牛。(三)胚胎移植的意义2.加速育种进程MOET技术能大幅度提高母畜繁殖力，扩大优秀母畜在群体中的影响，增加后代选择强度。如在奶牛育种中，MOET技术能获得更多具有高产性能的半同胞和全同胞，在较短的时间内达到后裔测定所要求后代的数量，提早完成后裔测定工作，增加选择强度和准确性，缩短育种进程。应用MOET核心群育种方案，公牛的遗传评定时间可缩短40％，生产性状的年遗传进展比常规的人工授精提高20％左右。如果在青年母牛或母羊中应用活体采卵和胚胎移植技术，年遗传进展可提高30％-70％。八戒飞抵岛城跨国娶妻加拿大846头猪运抵青岛，价值190万美元（2007-10-17）成本高，时间长，可用ET代替活体引种。4.保存品种资源结合胚胎冷冻技术为可保存国家或地区间特有的家畜品种资源，建立种质资源库提供新的技术手段，还可降低种质资源保存费用。活畜保种不仅成本很高、规模有限，而且还容易发生基因漂变。胚胎冷冻保种也优于精液冷冻保种，因为一个胚胎是一个完整的个体，这样，冷冻或冷藏一个胚胎不仅保存了一个个体的基因，也保存了基因组织。而且要从精子中重新构建一个已经灭迹了的群体，需要级进许多世代，而通过胚胎再构建一个群体，仅在一个世代内即可实现。胚胎冷冻保种不仅成本低廉、方法简单，而且能避免活畜保种因疾病、自然灾害或基因漂变造成种质消亡的风险。6.研究手段目前，胚胎工程技术中应用最多的是胚胎移植技术，无论是转基因胚胎还是克隆等获得的胚胎，最后都必须经胚胎移植才能获得后代，胚胎移植是胚胎工程的最后一道“工序”。因此，可以说它是胚胎工程技术的基础。胚胎移植技术与其他繁育技术的关系

胚胎移植技术在整个动物繁育新技术的体系中是一项基础性的、关键的技术人工授精核移植技术发情控制与超数排卵技术胚胎移植干细胞技术胚胎采集、鉴定与冷冻保存技术胚胎分割技术卵子体外成熟，体外受精嵌合体技术（四）生理学基础、基本原则和条件1、生理学基础（1）母畜发情后生殖器官的孕向发育（2）早期胚胎呈游离状态（3）不存在免疫问题（4）胚胎的遗传特性不受受体影响3、条件供体超排反应良好；胚胎回收顺利；胚胎质量好、保存可靠；受体黄体良好；受体饲养管理条件良好；技术人员操作熟练；胚胎操作及移植器械恰当。(五)胚胎移植的技术程序包括供体的超数排卵、供体和受体的同期发情处理、供体的发情鉴定与配种、胚胎采集、胚胎的检查与鉴定、胚胎的保存、胚胎的移植胚胎移植程序示意图二、胚胎移植的基本步骤(一)供体和受体的选择1.供体的选择遗传学价值高；身体健康（传染病、寄生虫病、生殖系统疾病）；年龄适中；体况适中；发情周期正常；避免应激2.受体的选择(三)供体的超数排卵1.超排方法（1）已知发情周期供体超排（2）未知发情周期供体超排（未知+安排工作+初期周期不稳定）孕激素+FSHPG一次注射法PG二次注射法同（1）3.影响超排效果的因素(1)个体差异与动物的种类、品种、年龄、胎次、体重及营养情况都有关系(2)激素所用激素的种类、用量和注射程序，都会对超排效果有一定的影响(3)用药时间发情周期、产后阶段及季节不同，超排结果均有差别（山羊一般可以在注射PGF2α后的48～96h内发情。可使超排处理安排在周期的第9～17d的任何一天。但15d以后处理排卵数较多）。(五)胚胎回收与鉴定

1.回收时间2.回收方法（离体生殖道、手术回收、非手术回收）

实验动物猪、羊牛、马

手术回收场所、器械和人员的准备供体准备输卵管回收子宫角回收输卵管+子宫角回收胚胎采集子宫回收胚胎输卵管回收胚胎

超排后的黄体

非正常的卵巢：大卵泡羊手术回收子宫角胚胎

移植胚胎

受体与产的羔羊PBS集卵杯子宫颈

子宫角卵巢3.检胚剔除异物检胚吸管1.吸管2.乳胶管3.玻璃珠胚胎净化4.胚胎鉴定-检查和评定质量(1)形态学法①卵子是否受精。②透明带形状、厚度，有无破损等。③卵裂球的大小、致密程度是否有差异，卵黄间隙是否有游离的细胞或细胞碎片。④胚胎发育阶段与回收时应达到的胚龄是否一致，胚胎的透明度，胚胎的可见结构(内细胞团、滋养层细胞、囊胚腔)是否清晰可见。A级;形态完整,轮廓清晰,呈球形,分裂球大小均匀,透明带适中；B级;轮廓清晰,色调和细胞密度良好；C级;轮廓不清楚,色调发暗,结构较松散,游离的细胞和液胞较多；D级;轮廓模糊,色调暗,结构松散,碎片细胞和液泡很多。胚胎的分级标准不同发育阶段的正常胚胎和不正常胚胎1细胞期2细胞期4细胞期8细胞期密集桑椹胚桑椹胚囊胚扩张囊胚未受精卵透明带破损透明带椭圆退化变性胚正常胚胎异常胚胎2-cell4-cell8-cell16-cellMorulaBlastocyst正常胚胎的形态(2)体外培养法(3)荧光(活体染色)法(4)代谢活性测定法将待鉴定胚胎放入含有葡萄糖的培养液中，培养1h后，测定培养液中葡萄糖的消耗量，每培养1h消耗葡萄糖2μg以上者为活胚胎。(六)胚胎保存

1.常温保存(15～25℃)通常采用含20%犊牛血清的PBS保存液，可保存胚胎4～8h2.低温保存。0～10℃3.冷冻保存(1)逐步降温法(2)一步细管法(3)玻璃化法

(七)胚胎移植1.移胚方法2.移胚部位非手术法手术法移植前胚胎装管手术法将胚胎移植到输卵管牛胚胎的移植方法直肠把握法山羊受体移植

3.影响胚胎移植妊娠率的因素(1)胚胎因素包括胚胎质量，日龄，移植胚胎的数量，提供胚胎的供体，胚胎在体外培养的时间，