促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座

Gonadotropin-InhibitoryHormoneInhibitsGonadal

DevelopmentandMaintenancebyDecreasing

GonadotropinSynthesisandReleaseinMaleQuail雄性鹌鹑中促性腺激素抑制激素经过降低促性腺激素合成和释放来抑制性腺发育和维护夏佳豪促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第1页作者：TakayoshiUbuka,KazuyoshiUkena,PeterJ.Sharp,GeorgeE.Bentley,andKazuyoshiTsutsui通讯地址：KazuyoshiTsutsui，脑科学试验室，广岛大学综合艺术与科学学院，739-8521，东广岛，日本促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第2页1.研究背景 任何相关神经肽能够抑制促性腺激素分泌说法没有得到证实，他们最近证实了在鹌鹑中一个新型下丘脑十二肽能直接抑制促性县激素释放，并命名它为GnIH,抑制促性腺激素释放作用是以鹌鹑下丘脑中一个新型G蛋白偶联受体为媒介。这个新促性腺激素抑制系统被看作是鸟类普遍特征，以一个完全新奇观点，提供了一个前所未有机遇来研究鸟类繁殖调控。为了了解GnIH在家禽生殖方面作用，他们调查了GnIH在性腺发育和维护作用。经过渗透泵给成熟鸟类连续施加两周GnIH,降低了促性腺激素共同α，LHβ亚基mRNA表示。促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第3页 PlasmaLH和睾酮浓度也降低。另外，给成熟鸟类施加GnIH会诱发睾丸中睾丸细胞凋亡和降低生精活性。对不成熟鸟类两周天天施加GnIH会抑制正常睾丸细胞生长和血浆睾酮浓度升高。幼年时蛻毛抑制也在给予GnIH后发生，这些结果暗示GnIH经过降低促性腺激素合成和释放来抑制性腺发育和维护。GnIH可能能够解释在鹌鹑中下丘脑GnRH可观察到降低之前光照能够诱发性腺回归现象。据他们所知，GnIH是首种被证实能抑制任何脊椎动物生殖功效一个下丘脑神经肽。促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第4页2.目标及意义

●为了阐示GnIH作用模式。 ●GnIH功效性意义和它作为一个包括到家禽生殖关键神经肽潜在功效。 ●为了调查GnIH是否抑制睾丸细胞发育与维护。促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第5页3.材料和方法动物：成熟和未成熟雄性日本鹌鹑。新孵出鹌鹑被放置在一个温度控制室(35±2℃)日常16小时光照和8小时黑暗(开灯700小时)育雏第一周。温度以每七天下降3.5℃梯度到第四面，将鹌鹑分离到单独笼子。全部鸟类提供鹌鹑食物和自来水。促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第6页 试验计划:为了确定GnIH合成和分泌影响，利用小型渗透泵把GnIH施加给三个月大成熟个体，用三个不用剂量(0.03,0.3,3微克GnIH在0.5微升0.9%生理盐水中/h,每组七只），对照组用相同渗透泵摄入生理盐水。每个渗透泵在戊巴比妥钠（40mg/kg)下植入ip（趋化因子干扰素诱导蛋白），在连续两周施加GnIH后，全部鸟类在1400至1600小时之间经过去头终止生命活动，血液搜集在肝素化中并在4℃离心20min，血浆保留在20℃，马上搜集血液后去除垂体，将其速冻，保留在-80℃中。促性性腺激素commonα，LHβ和FSHβ亚基mRNA在垂体表示用竞争性PCR量化。PlasmaLH和睾酮浓度用RIA量化。促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第7页为了调查GnIH在睾丸发育方面影响，向不成熟鹌鹑（每组8只)注射三种不一样剂量GnIH，从8-20日龄开始在1400-1600小时之间天天一次，因为不成熟鹌鹑体型较小，注射用小型渗透泵。它们在试验过程中，平均体重由17.1g增至56.8g。将GnIH剂量由5.8ng天天降至1.8ng天天/g（体重）。对照组仅提供生理盐水。全部鹌鹑在1400-1600小时之间，在第二十一天时候经过去头搜集血液和睾丸，血液搜集后，移除睾丸，称重，浸泡在Bouin氏固定液里两天。随即脱水嵌入石蜡，切成6微米小段苏木-伊红染色用于组织学检验，血浆睾酮浓度用RIA量化。促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第8页为了调查GnIH睾丸细胞凋亡和生精活动影响，用渗透泵给成熟鸟类施加GnIH(0.3微克/h)两周。在1400-1600小时之间将其麻醉而且在用完4%多聚醛固定液后用PBS灌流。去除睾丸存于固定液两天，然后脱水嵌入石蜡。切成6微米小段，经过末端脱氧核苷酸转移酶介导缺口末端标识检测凋亡细胞，睾丸形态经过苏木-伊红染色调查。最终为了了解GnIH家禽生殖生理作用，我们分析了GnIH在幼年蛻毛到成熟时成年蛻毛影响，GnIH被注射入未成熟鸟类，以三种不一样剂量（0.01,0.1,1微克在100微升0.9%生理盐水中）天天一次，每组8只，8-20日龄，1400-1600小时之间，对照组仅提供生理盐水。促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第9页4.结果分析成年时GnIH对促性腺激素合成和释放作用图一促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第10页成年时GnIH对血浆睾酮浓度，睾丸凋亡细胞，生精活动作用。图二促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第11页图三促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第12页图四促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第13页发育时期GnIH对睾丸生长，生精活动以及血浆睾酮浓度作用图五图六图七促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第14页发育时期GnIH对幼年蛻毛进入成年影响促性腺激素抑制激素对性腺垂体的发育和维护专家讲座第15页5.讨论试验数据表明，GnIH直接作用于垂体GnIH受体，造成促性腺激素合成和释放降低，抑制睾丸发育和维护，但不能排除GnIH对睾丸直接作用，然而，体外促黄体激素直接抑制