试验一分子生物学实验

试验一分子生物学实验第1页，共26页，2023年，2月20日，星期日第二节实验室规则与安全⒈实验室规则⑴保持肃静⑵保持整洁⑶严格操作⑷注意节约⑸保证安全⒉实验室常识⑴使用贵重仪器如分析天平、分光光度剂、离心机等倍加爱护，使用前熟知使用方法，使用时严格遵守操作规程，发生故障时，立即关机。⑵凡挥发性、有烟雾、有毒和有气味的实验，均应在通风柜内进行。第2页，共26页，2023年，2月20日，星期日⑶配制试剂时，应对试剂纯度、结构式、分子质量等特性熟悉，做到“有的放矢”。⑷量瓶是量器，不要用量瓶做容器。⑸洗净器皿应倒置架上，使其自然风干。⒊实验室安全⑴《实验室生物安全通用要求》查看⑵了解电闸、水阀煤气总阀门所在处，离开实验室检查是否关好。⑶使用电器设备时严防触电。⑷使用高温高压锅灭菌时不得离人。⑸使用可燃物，特别是易燃物，应特别小心。⑹凡使用腐蚀性试剂，必须谨慎操作，防止溅出。⑺废液特别是强酸强碱，应稀释后倒入水池。⑻有毒物品应按照实验室规定办理审批手续后方可领取，使用时严格操作，用后妥善处理。第3页，共26页，2023年，2月20日，星期日⒋实验室急救⑴触电①关闭电源；②用干木棍将导线与被害者分开；③将被害者移至木板上，与地面分离；④急救者必须做好触电安全措施，手脚必须绝缘。⑵火灾隔绝氧气①起火物与水相容：水、湿布、沙土、灭火器等②起火物与水不相容：不可用水⑶烫伤乙醇消毒，涂2%苦味酸或5%鞣酸，防感染⑷玻璃割伤或其他器械损伤

清理伤口，硼酸水洗净，涂碘酒，包扎⑸灼伤皮肤①强碱：大量清水稀释，涂5%硼酸或2%乙酸②强酸、溴：大量清水稀释，5%NaHCO3或5%氨水⑹煤气中毒呼吸新鲜空气第4页，共26页，2023年，2月20日，星期日

第三节常用器皿与仪器1、塑料制品Eppendrof管第5页，共26页，2023年，2月20日，星期日2、微量移液器（枪）第6页，共26页，2023年，2月20日，星期日移液器的工作原理移液器工作的基本原理是活塞通过弹簧的伸缩运动来实现吸液和放液的。在活塞推动下，排出部分空气，在大气压作用下吸入液体，再由活塞推动空气排出液体。由于弹簧具有伸缩性，在移液器的使用中要配合弹簧的这个特点来操作，就可以很好地控制移液的速度和力度。普通的微量移液器是采用内置式气体活塞（见图1），如EppendorfResearch?和Reference?系列移液器（见图2），活塞设计在移液器内部，依靠推动空气来进行吸液和放液，活塞不与液体直接接触。第7页，共26页，2023年，2月20日，星期日另一种移液器是采用外置式活塞，活塞设计在吸头内部，直接与液体接触，适用于粘度比较大或易产生气泡的液体的操作，如EppendorfMultipette?分液器，配合Combitips?分液头使用（见图3）。第8页，共26页，2023年，2月20日，星期日第一步设定移液体积●从大体积调节至小体积时，为正常调节方法，逆时针旋转刻度即可，从小体积调节至大体积时，可先顺时针调至超过设定体积的刻度，多调1/3圈，再回调至设定体积，可保证最佳的精确度。移液器规范操作步骤第9页，共26页，2023年，2月20日，星期日第二步装配移液器吸头●对于单道移液器，将移液器端垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可；特别提示用移液器反复撞击吸头来上紧的方法是非常不可取的，长期这样操作，会导致移液器中的零部件因强烈撞击而松散，严重的情况会导致调节刻度的旋钮卡住。（见图5）●多道移液器装配吸头时，将移液器的第一道对准第一个吸头，倾斜插入，前后稍许摇动上紧，吸头插入后略超过O型环即可。（见图6）图5图6第10页，共26页，2023年，2月20日，星期日第三步吸液和放液垂直吸液吸头尖端需浸入液面3mm以下慢吸慢放，控制好弹簧的伸缩速度放液时吸头尖端可靠容器内壁特别提示5mL和10mL的移液器要配合滤芯使用，吸液时，吸头需浸入液面以下5mm，慢吸液体，达到预定体积后，在液面下停顿3秒，再离开液面。第11页，共26页，2023年，2月20日，星期日移液小技巧●预润湿吸液粘稠液体可以通过吸头预润湿的方式来达到精确移液，先吸入样液，打出，这时吸头内壁已经吸附了一层液体，使表面吸附形成饱和，然后再吸入样液，最后打出的液体的体积就很精确了。第12页，共26页，2023年，2月20日，星期日正向吸液与反向吸液正向吸液是指正常的吸液方式（见图7），操作时吸液可将按钮按到第一档吸液，释放按钮。放液时先按下第一档，打出大部分液体，再按下第二档，将余液排出。第13页，共26页，2023年，2月20日，星期日反向吸液（见图8）是指吸液时将按钮直接按到第二档再释放，这样会多吸入一些液体，打出液体时只要按到第一档即可。多吸入的液体可以补偿吸头内部的表面吸附，反向吸液方法也可以适用于粘性液体。第14页，共26页，2023年，2月20日，星期日错误的操作方式第15页，共26页，2023年，2月20日，星期日第16页，共26页，2023年，2月20日，星期日第17页，共26页，2023年，2月20日，星期日移液器日常使用小贴士移液器长时间不用时建议将刻度调至最大，让弹簧恢复原形，延长移液器的使用寿命。移取的液体如果易产生气泡，如表面活性剂（内置式气体活塞式移液器在移取这类液体时容易产生气泡，属正常现象），请使用外置活塞式移液器移液。多道移液器与吸头衔接处的O型圈可定期用附赠的硅油轻拭保养。如果需要从长颈瓶中移液，可将移液器外层套筒取下，在内杆上直接装配吸头使用，或者使用特殊的长颈吸头（只适用于1-10ml移液器）来操作。第18页，共26页，2023年，2月20日，星期日3、恒温水浴锅

多用于酶促反应，将Eppendrof管插入浮漂中进行反应。第19页，共26页，2023年，2月20日，星期日4、小型离心机

离心甩干是指短时间（1~3s）的离心操作，目的是使附着于管壁的液体沉入管底。第20页，共26页，2023年，2月20日，星期日5、离心干燥机目的是使DNA样品快速干燥。第21页，共26页，2023年，2月20日，星期日6、旋涡混合器利用不对称的旋转将管内液体混匀。第22页，共26页，2023年，2月20日，星期日7、振荡器

搅拌离心管内液体，加速难容物溶解，清洗浸泡于溶液中的不洁器皿。第23页，共26页，2023年，2月20日，星期日10、一次性手套11、纸巾①防止危险试剂沾到手上。②防止试剂受到污染。

吸走残余液体，一般卫生纸就可以。擦拭实验用品（如玻璃板）时，要用专用、不带毛屑的面巾纸。第24页，共26页，2023年，2月20日，星期日第四节溶液1、实验用水单蒸水：多用于大肠杆菌培养基的制备、电泳缓冲液的配制、器皿的漂洗的实验。双蒸水：用于生物化学及组织培养实验。第25页，共26页，2023年，2月20日，星期日