实验六植物可溶性糖测定

实验六植物可溶性糖测定第1页，共11页，2023年，2月20日，星期六一、实验目的

学习可溶性糖测定的蒽酮比色法第2页，共11页，2023年，2月20日，星期六二、实验原理植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外，其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物。在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。第3页，共11页，2023年，2月20日，星期六三、仪器药品721型分光光度计分析天平

研钵恒温水浴锅

烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗

酒精（80%）

第4页，共11页，2023年，2月20日，星期六葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。第5页，共11页，2023年，2月20日，星期六四、操作步骤

1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min，定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。第6页，共11页，2023年，2月20日，星期六2.显色及比色吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。第7页，共11页，2023年，2月20日，星期六3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80μg。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。第8页，共11页，2023年，2月20日，星期六

试剂（ml)管号

123456

葡萄糖标准液

00.050.10.20.30.480%酒精1.00.950.90.80.70.6

蒽酮-硫酸试剂555555

葡萄糖浓度（ul/ml)01020406080第9页，共11页，2023年，2月20日，星期六4.计算样品中含糖量％设V为植物样品稀释后的体积（mL）

C为提取液的含糖量(μg/mL)W为植物组织鲜重(g)则得计算式如下：可溶性糖含量％＝(C×V)/(W×106)×100%第10页，共11页，2023年，2月20日，星期六～注意事项～蒽酮试剂含有浓硫酸，使用时应该小心离心时要平衡在蒽酮反应前稀释样品1