医学细胞与遗传学教学课件：细胞死亡

细胞衰老

Cellsenescence细胞衰老（cellaging，cellsenescence）细胞衰老－－随时间推移，细胞增殖能力和生理功能下降的变化过程。形态明显变化，膜通透性脆性增加，细胞器功能下降，遗传物质损伤增加等。个体衰老建立在细胞总体衰老的基础上，各种衰老表现均有其细胞生物学基础。正常细胞体外寿命有限

利用来自胚胎和成体的成纤维细胞进行体外培养后发现：胚胎的成纤维细胞分裂传代50次后开始衰退和死亡，成年组织的成纤维细胞培养15～30代就开始死亡。

组成人体组织的细胞寿命有显著差异，保持继续分裂能力的细胞不易衰老。常可用胚胎成纤维细胞体外培养的群体倍增次数估计个体的寿命。Werner综合症和早老症患者的细胞传代次数大大少于常人体内细胞增殖能力与分化相关高度分化，没有增殖能力（细胞寿命短/长）已分化，暂不增殖未分化，干细胞始终保持增殖能力。主要表现在对外界环境变化的适应能力降低和维持细胞内稳态的能力的降低，相应的也就出现了形态结构与生化功能上的改变。细胞衰老的表现由于水分丢失使得体积缩小，细胞“硬化”并失去正常形态。色素沉积（溶酶体清除功能下降）。膜系统脂成分改变，流动性降低，物质合成运输与信号转导发生障碍，机械抗性降低。线粒体数目减少，体积增大，骨架蛋白参与的物质运输与信号转导活动减少。核膜内陷，核/染色质固缩化

，总的复制转录活动受抑制，染色体端粒缩短；mtDNA突变增加。蛋白质合成下降，变异蛋白出现；酶活性丧失。细胞分裂增殖能力降低。氧化损伤（自由基）对细胞的伤害(破坏核酸、脂质、蛋白质结构）端粒影响细胞分裂的次数遗传物质的影响（损伤或片段缺失的积累）衰老的原因细胞死亡CellDeath内因:衰老所致的自然死亡外因:环境因子超过细胞承受阈值。根据细胞死亡模式的不同，可将其分为两种类型：坏死（necrosis）与凋亡（apoptosis）细胞死亡坏死指的是病理性死亡。当外界因素超过细胞所承受的强度阈值时，会导致细胞结构和功能的快速崩溃，细胞肿胀膨大，胞膜/核膜破裂，细胞器/核内物质散失，往往伴随炎症反应。是一种被动性死亡。

坏死（necrosis）左图：正常肝脏结构，肝小叶清晰，细胞完整。右图：丙型肝炎，肝细胞明显肿大坏死，图中空泡样结构是水肿的肝细胞，深色黑点是开始或已经坏死的肝细胞。

也称程序性细胞死亡（programmedcelldeath，PCD），是细胞在一定条件下遵循一定程序主动性死亡的过程，涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用。凋亡(apoptosis)细胞表面结构改变；内质网膨胀与细胞膜融合。细胞骨架逐渐断裂，胞膜塌陷，细胞体积缩小。染色质向核膜聚集，逐渐形成新月形致密斑（“核固缩”）。核膜向内塌陷，细胞核断裂并被分割包被。细胞凋亡的特点细胞膜的内陷把细胞质分隔包裹，形成凋亡小体（apoptoticbody

）。凋亡小体内细胞器结构完整，线粒体、溶酶体无变化，始终有膜封闭，内溶物无释放，故不会引起炎症。染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂,形成180200bp整数倍的寡核苷酸片段,在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNAladder)细胞膜表面的各种蛋白质－糖链结构的改变（膜内侧的磷脂酰丝氨酸暴露于外侧）会被周围细胞探测到，最后由巨噬细胞把凋亡细胞/小体吞入水解，最终完成细胞凋亡的全过程。细胞坏死与凋亡的形态区别细胞凋亡细胞坏死起因生理或病理性

病理性变化或剧烈损伤基因调节受相关基因调控与基因调节无关细胞体积固缩变小肿胀变大细胞膜保持完整，直至形成凋亡小体破损细胞器完整，内质网与细胞膜融合肿胀，甚至崩解细胞核染色质凝集，在核膜下呈半月状染色质弥散，核膜破裂，核内物质丢失基因组DNA核酸内切酶活化，DNA降解为特定长度，电泳图谱呈梯状随机降解为任意长度，电泳图谱呈弥散状凋亡小体有，被邻近细胞或巨噬细胞吞噬无蛋白质合成合成特定蛋白质无炎症反应无，不释放细胞内容物有，释放细胞质内容物范围单个散在细胞成群细胞，伴组织纤维化细胞凋亡的生物学意义参与影响胚胎发育清除衰老、受损细胞，维持体内环境稳定参与免疫应答过程参与某些年龄相关疾病的发病（阿尔茨海默病）细胞凋亡的形态学检测光学显微镜/荧光显微镜

电子显微镜观察：凋亡细胞体积变小，细胞质浓缩。凋亡Ⅰ期的细胞核内染色质高度盘绕，出现许多称为气穴现象的空泡结构。细胞凋亡的晚期，细胞核裂解为碎块，产生凋亡小体。DNA片段化分析：细胞凋亡时主要生物化学特征是其染色质发生浓缩,染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂,形成180200bp整数倍的寡核苷酸片段,在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNAladder)。细胞凋亡的机制SydneyBrennerH.RobertHorvitzJohnE.Sulston2002NobelPrize：fortheirdiscoveriesconcerning"geneticregulationoforgandevelopmentandprogrammedcelldeath"线虫(C.elegans)

凋亡相关基因细胞凋亡的调控涉及许多基因。其中研究较多的有ced、Bcl-2、p53、Fas/APO-1、c-myc、ICE等。线虫的细胞凋亡现已发现十几个基因在线虫细胞凋亡过程中起作用。与凋亡直接相关：Ced-3、Ced-4、Ced-9.以线虫为起点，包括caspase

、bcl、p53等在内的与人类细胞凋亡调控有密切关系的基因也陆续被发现。Caspase家族Caspase是Ced-3的同源物，是引起细胞凋亡的关键酶，C端同源区存在半胱氨酸激活位点，靶蛋白的切割位点均在天冬氨酸残基（底物蛋白或自身）。非活性的caspase均以酶原形式存在，被信号途径激活后，产生caspase级联反应，将细胞内的蛋白质降解。根据级联反应中所处的位置，caspase可分为位于上游的起始蛋白和位于下游的效应蛋白。启动凋亡：Caspase8，Caspase2，Caspase9，Caspase10

凋亡执行：Caspase3，Caspase6，Caspase7起始蛋白被激活后对效应蛋白进行切割并使之激活，随后级联反应递次激活下游的caspase。对靶蛋白的水解最终导致程序性细胞死亡。Bcl-2家族

Bcl-2家族蛋白可调节线粒体膜的通透性，促凋亡蛋白Bax增加通透性，而抗凋亡类蛋白如Bcl-2阻止Bax效应。p53自杀相关因子（factorassociatedsuicide,Fas)与FasL凋亡的信号传导各种内外因素可以启动细胞凋亡，它们可以通过不同的信号传递系统传递凋亡信号，引起细胞凋亡。

死亡受体介导的细胞凋亡线粒体介导的细胞凋亡死亡受体介导的细胞凋亡细胞表面的凋亡受体是属于肿瘤坏死因子受体（TNFR）家族的跨膜蛋白，它们包括Fas（Apo-1/CD95）、TNFR1、DR3/WSL、DR4/TRAIL-R1和DR5/TRAIL-R2。其配体属于TNF家族。均具有富含半胱氨酸的胞外区和含死亡结构域（Deathdomain，DD）的胞内区。自杀相关因子（factorassociatedsuicide,Fas)与FasLFas的配体FasL与Fas结合后诱导Fas胞内的DD区与结合蛋白FADD结合，然后FADD的N端DED区与Caspase-8（或-10）前体蛋白结合，形成DISC（deathinducingsignalingcomplex）活化的caspase-8、10启动caspase的级联反应，使caspase-3、-6、-7的前体蛋白激活，这几种Caspase可降解胞内结构蛋白和功能蛋白；此外活化后的caspase-8引起线粒体中死亡因子的释放，最终导致细胞凋亡。TNF-TNFR介导的细胞凋亡线粒体介导的细胞凋亡

在脊椎动物细胞的凋亡过程中，线粒体被认为是处于凋亡调控的中心位置。线粒体膜间腔中存在凋亡相关分子，在膜通透性改变情况下可被释放。细胞内的损伤等信号激活促凋亡蛋白Bad或Bax，使它们从胞质转移到线粒体外膜，使外膜的通透性发生改变，原本松散结合于线粒体内膜外表面的细胞色素c等凋亡相关蛋白从线粒体膜间隙释放到细胞质中，与Apaf-1、caspase-9的前体蛋白形成凋亡复合物。激活后的caspase-9激活下游的caspase-3，进而引发caspases级联反应，作用于靶蛋白导致细胞凋亡。P53能作用于Bak/Bax，增加线粒体膜的通透性。由线粒体逸出凋亡诱导因子AIF可进入细胞核中，诱使染色质凝集与DNA降解，还可促