DSS诱导的结肠炎是由NLRP3炎症小体介导的

DSS诱导的结肠炎是由NLRP3炎症小体介导的2白复合体的处理，这种多蛋白复合体就是炎症小体(NLRP3)，在此我们将会生型小鼠产生较弱的结肠炎症并在结肠组织中产生的前炎性因子的水平比3、单核苷酸多态性：NLRP3基因区和其他的炎性相关基因的单核苷酸多态性与克罗恩疾病的易感性相关。氧的侵入以及对其下组织的毒DSS诱导的小鼠结肠黏膜和腹腔巨噬细胞都有水平的升高，可以进一步代表肠3NLR(核苷酸结合区域和亮氨酸富集区域)家族，包括大量的细胞内模式识别NOD2识别细菌肽聚糖衍生分子胞壁酰二肽(MDP)并激活NF-κB信号通路产是核苷酸结合区域(nucleotide-bindingdomain,leucine-rich-repeat-containingfamily)}组成了炎症小体通过衔接蛋白ASC和Caspase-1将Pro-IL-1β和Pro-IL-人类单核细胞系(THP-1)培养在RPMI培养基中加入10%胎牛血清，1%丙酮酸巨噬细胞来源于正常人的附着的外周血单个核细胞(PBMCs)，用RPMI+2%AB血清、1%L型谷氨酸盐，100U/ml青霉素，0.1mg/ml链霉素的培养基培养，同时加入100U/ml重组人类粒细胞刺激因子(rhGM-CSF)；Caspase-1的抑制剂Z-霉素(bafilomycinA)购买于(**)，多聚(dA，dT)钠盐、N-乙酰半胱氨酸 Fsayometry巨噬细胞在24孔板中用DSS刺激培养24h用于溶酶体(lysosomal)的研究。FACSCantoⅡ在600-650nm发射光波长处用于荧光强度分析。所得数据用FlowJo件分析。小鼠(Mice)n4结肠炎的诱导和治疗(Inductionofcolitisandtreatment)临床评分和组织学评分(ClinicalScoreandhistologicalanalysis)表fcoloniccytokines系：M-MLV逆转录酶(**公司)，RNA水解酶抑制剂(**公司)，低聚脱氧胸苷(dT)用于cDNA合成(**公司)。光循环仪和DNA掺杂荧光染料(FastrtDNAMasterSYBRGreenIkitPCRdelydrogenase)和IP-10(CXCL-10)的引物作为光循环系列中的标准DNA，每噬细胞(Isolationofperitonealmacrophages)在异丙烷全身麻醉的条件下颈椎脱臼(cervicaldislocation)处死小鼠，腹腔内胞数据分析(Statisticalanalysis)P5视为具有统计学差异。5启动的巨噬细胞对加入的DSS以剂量依赖的方式产生强烈的应答。(Fig1A)。中的数据得到支持，此细胞系用DSS和尼日利亚菌素(nigericin，一种钾离子载的产生)刺激都不再产生IL-1β(Fig1B)。为了阐明Caspase-1在DSS介导的 (Fig1D)和初始人类巨噬细胞和THP-1细胞系中得到了支持(SupplementarySS的上清进行了相同的处理(Fig2E)。为了确定是否摄入DSS大分子为Caspase- SinducesNLRPinflammasomeacticationPCaspase-1募集炎症小体)在IL-1β的分泌中无缺陷。(Fig2C)IL-1β的分泌需NLRP3这一论点进一步由研究NLRP3-/-小鼠的腹腔巨噬细胞所支持(Fig可以在荧光显微镜下观察到。DSS以浓度依赖的方式诱导荧光流的形成。(Fig lysosomalturationandreactiveoxygenspeciesROS细胞自噬(phagocytosis)作为一种特殊的病原体相关分子模式通过溶酶体的产激活的机制，我们通过药理学阻断溶酶体形成和发挥功能的通路。为了研究吞6细胞松弛素(CytochalasinD，可以通过扰乱肌动蛋白纤丝抑制细胞自噬)，细产生的作用没有任何影响。(Fig3A)。另外，通过博来霉素(bafilomycinA1，引起相对低一些的IL-1β分泌的下降。(fig3B)。因此，溶酶体(半胱氨酸)起了溶酶体的损伤(如被提到的晶体结构)。我们运用吖啶的染色特性(一种染料，单体形态下呈现绿色荧光，酸性条件下二聚体形状呈现红的荧光，红色荧光的密度与细胞之中溶酶体的数量呈正相关)。实际上，DSS诱导产生的吖的红色荧光强度的下降与先前报道的结构学数据相一致，表NLRP3炎症小体的激活与在应对多种刺激时ROS(活性氧)的产生有关。先前们给予巨噬细胞ROS抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAc)和ADPC，两种抑制剂均能明显降低IL-1β的分泌(Fig3D)，这些数据表明ROS在DSS诱nDSSmodeldependonNLRPsignalingS程度都有减轻，表明对结肠组织炎症程度评分有明显改善(Fig4B)。在第9天，组织学表明WT和NLRP3-/-都相同严重程度的肠道炎症和上皮损伤，尽管P 制)。7IP-10的水平在WT小鼠中升高，而在NLRP3-/-小鼠中无变化(Fig5B)。有趣得β，我们使用westernblot分析剪切过的IL-1β(P17)，并发现在DSS诱导的WT小鼠结肠中激活的IL-1β升高，而NLRP3-/-小鼠无变化。(Fig5C)。Discussion论Caspase的IL-1β和IL-18的分泌)SS降，并且结肠组织中的前炎性细胞因子水平也下降。这些保护作用主要发生在NLRP3炎症小体激活的确切机制未被完全理解。在这项研究中得到的数据表明S述的其他NLRP