艾滋病及HIV的检测培训

艾滋病及HIV的检测培训第1页，共29页，2023年，2月20日，星期二一、HIV的基本生物学特性属于逆转录病毒科慢病毒属。HIV在病毒分类中的定位是慢病毒属中的人类免疫缺陷病毒组HIV分为HIV-1和HIV-2二个型别。HIV-1共有M组（主要亚型组）、O亚型组和N亚型组。M组又分为A、B、C、D、F1、F2、G、H、J、K共11个非重组亚型，另外近年来发现多个流行重组型（circulatingrecombinantform,CRFs），包括CRF01-CRF14。第2页，共29页，2023年，2月20日，星期二HIV的分群和亚型A（A1A2）BCDF1F2GHJKCRFCRF01-AECRF02-AGCRF03-ABCRF04-CPXCRF05-DFCRF06-CPXCRF07-BCCRF08-BCCRF09-CPXCRF10-CDCRF11-CPXCRF12-BFCRF13-CPXCRF14-BGABCDEFGHIV-1

M组N组O组（O1-O3）HIV-2

第3页，共29页，2023年，2月20日，星期二HIV病毒体呈球形，直径约100~120nm。电镜下成熟的HIV-1呈现一致密的圆柱状核心和一个病毒包膜。病毒核心由病毒RNA、核心结构蛋白和病毒复制所必须的酶类组成。HIV的RNA为两条相同拷贝（完全同源）的正股RNA链。第4页，共29页，2023年，2月20日，星期二HIV对环境中物理因素和化学因素抵抗力均较弱，比HBV的抵抗力低得多。对HBV有效的消毒和灭活方法均适用于HIV。HIV对热很敏感，对低温耐受性强于高温。因此，可以用高温灭活病毒，在低温条件下保存病毒。在室温（22~27℃）液体环境下HIV可存活15天以上；经56℃处理30min可使HIV在体外对人的T淋巴细胞失去感染性，但不能完全灭活血清中的HIV；经过60℃3小时或80℃30min作用后不能检出感染性病毒。第5页，共29页，2023年，2月20日，星期二HIV耐碱不耐酸HIV对化学因素很敏感室温中0.5%次氯酸钠或75%酒精只需1min即不能检出RT酶活性；0.2%次氯酸钠、0.1%家用漂白粉、0.1%戊二醛等5min即可灭活HIV；30%酒精溶液5min、20%酒精溶液10min可灭活HIV。对紫外线不敏感，离开人体可存活数小时至数天。第6页，共29页，2023年，2月20日，星期二二、艾滋病的传播途径艾滋病毒存在于艾滋病感染者和艾滋病人的血液、精液、阴道－宫颈分泌物、乳汁、唾液、泪液、尿液、脑脊液、汗液、粪便、耳分泌液、支气管分泌液等人体的分泌液中，其中以血液、精液、阴道－宫颈分泌液艾滋病毒的含量最高，筑成了艾滋病传染性很强的物质基础。艾滋病流行至今二十多年的科学研究证明，艾滋病在人群中的传播只有三条‘路’：性途径、血液途径和母婴传播。第7页，共29页，2023年，2月20日，星期二母亲是怎样将艾滋病病毒传给自己的孩子的？母婴传播一般指感染艾滋病毒的母亲传给其胎儿或婴儿的传播方式。这种传播可能发生在怀孕、分娩和哺乳期。研究报告指出，HIV感染母亲所产的新生儿有11％～60％可能发生感染。母婴传播有以下几个阶段：（1）宫内感染：是胎儿生前在母亲子宫中通过损伤胎盘进入胎儿体内，母亲的胎盘、羊水中存在大量的艾滋病病毒，可直接从胎儿娇嫩的、未发育完全的皮肤中进入胎儿体内。第8页，共29页，2023年，2月20日，星期二（2）生产过程中感染生产过程中由于胎儿通过产道受到反复撞击和挤压，血液和羊水等分泌物可被胎儿吸入体内，也可通过皮肤损伤进入体内。研究发现，可在刚出生胎儿胃引流物中查出艾滋病病毒。所有这些发现表明，母婴传播可能有高达50％的新生儿在出生时通过与母亲生殖器官分泌液或血液接触而发生感染。（3）哺乳期感染：科学家研究了100多例非洲感染HIV的哺乳女性，发现有58％的乳汁样品中可检测HIV，有时乳汁中感染性病毒数量很高，乳汁中病毒可通过婴儿免疫不健全或损伤的口腔粘膜、消化道进入体内。母婴传播中有30％是在哺乳期感染的。对感染HIV怀孕母亲用抗艾滋病毒预防服药治疗能降低母婴传播的感染率已得到肯定。第9页，共29页，2023年，2月20日，星期二三、HIV感染在体内的动态分期病毒进入体内在2天内到达局部淋巴结，5天内进入血液循环。其结果是导致全身性播散，到达脑部和淋巴组织。从暴露于HIV到出现症状的时间一般是2-4周在急性感染的数天内，出现高水平的病毒复制，血浆中可检出107/ml个病毒RNA分子。CD8+细胞数上升，伴有短暂的CD4+细胞计数下降。HIV抗体出现后，病毒血症减轻，血浆中HIVRNA的滴度下降，急性HIV感染的症状消失.1、原发HIV感染期第10页，共29页，2023年，2月20日，星期二通常4-12周发生HIV抗体阳转。从HIV感染到产生抗体（或血请抗体阳转）称为“窗口期”，>95%的HIV感染都发生在感染后的5.8个月内，故一般认为窗口期为3个月；高度怀疑者可追踪至6个月。“

HIV感染早期”定义：血清抗体阳转和HIV感染6个月之间的阶段。6个月时病毒载量达到一个“固定值”，早期抗病毒治疗可降至很低，如果不进行抗病毒治疗，几年内不会有很大变化。此固定值和预后有很大关系。早期治疗的目标之一是重新设定固定值，使固定值保持较低水平。第11页，共29页，2023年，2月20日，星期二病人无临床症状，体检时无异常，少数可查到“持续性全身性淋巴腺病”（PGL），肿大的淋巴结至少发生在两处,且不是腹股沟淋巴结。细胞内的病毒大部分处于潜伏状态，所以淋巴结中病毒浓度很高。淋巴组织是病毒的主要藏身处，外周血中的病毒载量相对不高。2、无症状感染期(潜伏期)第12页，共29页，2023年，2月20日，星期二3、艾滋病前期（“ARC”或“B期”）

艾滋病前期症状包括被HIV感染后更常见更严重的症状（包括鹅口疮、口腔毛状黏膜白斑病、发热、体重减轻等），但还不是艾滋病的典型症状。

4、艾滋病期

当患者出现典型症状时，CD4+细胞计数通常降至200/ul以下，血和淋巴结中的HIV又上升到相当高的水平，同时抗病毒CD8+细胞反应减弱。在艾滋病期病人血液中的HIV群体又一次变得相当均一，通常是细胞融合（S1）表型为主，与T细胞嗜性有关。第13页，共29页，2023年，2月20日，星期二四、HIV感染的三种临床结局和长期存活的相关因素：1.典型进展者在感染早期，其免疫功能未受损害，但在8~10年内免疫控制能力逐渐下降，最后发展成艾滋病。2.快速进展者病程快速进展，CD4+细胞计数在2-5年内迅速下降,抗HIV的抗体水平很低，而且该抗体中和HIV的能力也较差。快速进展者最显著的特征：HIV感染后一直维持较高的病毒载量，而且分离的HIV有均一性。第14页，共29页，2023年，2月20日，星期二3.长期存活者（又称长期不进展者）这些感染者能维持健康状态12年以上，并且CD4+细胞计数维持正常。长期存活者在感染者中的比例一般在8~10%，目前最长已达20多年。第15页，共29页，2023年，2月20日，星期二3、尿液HIV抗体检测标本：除血液外还可用唾液检测HIV（Orasure，如Salivacard），尿液检测HIV。1996年美国FDA首次批准HIV-1尿检EIA试剂，我国也正在研制。主要适用于静脉注射毒品（IDUs）人群和其它高危人群的大面积流行病学调查。阳性标本仍需采血做确认试验才能确定HIV抗体阳性。另外还有家庭用HIV检测（HomeAccessSystem）。

第16页，共29页，2023年，2月20日，星期二样品筛查检测选用筛查试剂阳性反应阴性反应复

测阴性报告原有试剂+另一种筛查试剂一阴一阳均阴性反应均阳性反应送确认阴性报告4、HIV抗体筛查的流程图第17页，共29页，2023年，2月20日，星期二1、免疫印迹式验（WB）：WB是将HIV病毒蛋白用SDS电泳，把分子量大小不等的蛋白带分离开来，然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条装，每一条硝酸纤维膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。待检血清样品1：100稀释，加到放置硝酸纤维膜的槽内，恒温震荡，充分接触反应。血清中抗-HIV抗体，与膜条上的抗原带相结合。加入抗人-IgG酶结合物和底物后，即可使抗原-抗体结合带呈现紫褐色。根据出现条带情况判定结果。（二）HIV抗体确认试验第18页，共29页，2023年，2月20日，星期二表3不同国际组织HIV抗体免疫印迹（WB）试验阳性结果判断标准国际组织对HIV-1对HIV-2美国CDCgp41、gp120或gp160和P24中的任何两条带无美国FDAP24和P31，再加gp41或gp120/gp160之中任意一条无世界卫生组织（WHO）要有两条Env带，无论有无Gag或Pol带（也可能存在）要有两条Env带，无论有无Gag带或Pol带逆转录病毒血清学标准委员会P24或P31中的一条，并有一条Env带无美国红十字会Gag、Pol和Env带各有一条无德国PaulEhrlich研究院有两条带，其中一条必须是Env带无

第19页，共29页，2023年，2月20日，星期二我国判定标准：（1）HIV-1抗体阳性（+） 有下列任何一项者，即可确认：①至少有二条env带（gp41和gp160或gp120）出现，gp41和gp160，或gp41和gp120，或gp41和gp160/gp120。②至少有一条env带和p24带同时出现。（2）HIV-2抗体血清学阳性反应（+）符合WHO标准（有二条env带，有或无gag带），符合试剂盒标准，方可判为血清学阳性反应。（3）HIV抗体阴性（-） 无HIV抗体特异带出现，或仅有p17。（4）HIV抗体不确定（±）：出现HIV特异性抗体带，但带型不足以确认阳性者。第20页，共29页，2023年，2月20日，星期二2、免疫荧光试验（IFA）

将HIV感染的淋巴细胞涂于玻片上，经固定后即为试验用抗原片。待检血清中的抗-HIV抗体与抗原结合后再与荧光素标记的抗人免疫球蛋白结合，在荧光显微镜下可见到含草绿色荧光的细胞和多核巨细胞（胞浆荧光）。目前国内尚无商品化产品，仅在少数有条件的实验室使用。第21页，共29页，2023年，2月20日，星期二（一）孕期孕期产前检查：应在知情同意的情况下常规做HIV抗体筛查试验。最好选择ELISA方法（无条件地区可用快速检测）筛查。二、HIV检测方法的选择第22页，共29页，2023年，2月20日，星期二图3孕产期保健服务流程（适用于有充分的时间进行复测和确认试验者）对产前检查的孕妇进行预防艾滋病母婴传播咨询，获得知情同意，采集样本HIV抗体筛查试验第1种筛查试剂（高敏感性）阳性阴性第2种筛查试剂（高特异性）阳性阴性第3种筛查试剂（高特异性）不确定阳性阴性提供疑似阳性咨询，建议做确认试验确认试验提供咨询随访，建议3个月后再次做确认试验出具“HIV抗体阳性”报告提供咨询、指导、随访出具“HIV抗体阴性”报告提供咨询、指导、常规孕期保健第23页，共29页，2023年，2月20日，星期二（二）产时

孕期未接受HIV抗体检测的产妇：

首先应进行咨询，取得知情同意以后，可同时用两种不同的快速检测试剂进行HIV抗体筛查试验。

根据检测结果给予不同的咨询和干预。若产妇已临产，且只能用一种快速检测试剂检测，结果阳性，即视为HIV抗体阳性处理。第24页，共29页，2023年，2月20日，星期二图4产时保健服务流程（适用于没有充分的时间进行复测和确认试验者）对产前未接受HIV抗体检测的即将/或临产产妇进行预防艾滋病母婴传播咨询，获得知情同意，采集样本同时用两种不同的快速检测试剂进行HIV抗体筛查试验若产妇已临产，且只能用一种快速试剂检测，结果阳性，即视为HIV抗体阳性处理检测后咨询，解释结果检测后咨询，知情同意选择干预措施正常分娩正常分娩产后进行HIV确认试验产后暂时无法进行确认试验时第25页，共29页，2023年，2月20日，星期二（三）产后

筛查试验阳性的产妇在产后要进行HIV确认试验。根据检测结果再进行咨询和干预。

（四）婴儿检测

婴儿应于12个月进行HIV抗体检测，结果阴性则排除感染，纳入正常儿童保健；阳性者继续追踪随访，至18个月再次进行HIV抗体检测，结果阴性排除感染，纳入正常儿童保健；阳性婴儿转入当地艾滋病综合防治系统。

为配合治疗，婴儿HIV感染的早期诊断也可以采用核酸检测。目前以2次核酸检测结果作为诊断的依据，2次不同时间的样本核酸检测均为阴性诊断未感染，2次不同时间的样本核酸检测均为阳性诊断为HIV感染。至18个月仍要进行HIV抗体检测加以确认。第26页，共29页，