生活饮用水微生物指标检验MicrosoftPowerPoint演示文稿

生活饮用水微生物指标检验MicrosoftPowerPoint演示文稿第1页/共38页生活饮用水中微生物指标项目单位限值说明总大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出一般性污染耐热大肠菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得检出指示粪便污染大肠埃希氏菌MPN/100mL或CFU/100mL不得检出指示粪便污染菌落总数CFU/mL100一般性污染贾第鞭毛虫个/10L<1肠道原虫隐孢子虫个/10L<1肠道原虫第2页/共38页微生物指标常规检验流程水样总大肠菌群菌落总数报告报告阴性耐热大肠菌群或大肠埃希氏菌阳性报告第3页/共38页实验前准备1、灭菌吸管

10mL、1mL刻度吸管分别包好，160℃干烤2h灭菌2、9mL灭菌生理盐水3、相应的灭菌培养基4、检验前，无菌室用紫外线灯照射30min第4页/共38页菌落总数定义：是指水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数。培养基：营养琼脂设备：放大镜/菌落计数器第5页/共38页菌落总数平板计数法第6页/共38页总大肠菌群检测方法多管发酵法滤膜法酶底物法第7页/共38页多管发酵法定义：总大肠菌群指一群在37℃培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。培养基：乳糖蛋白胨培养液二倍浓缩乳糖蛋白胨培养液伊红美蓝培养基设备：显微镜第8页/共38页15管法检测步骤在36℃下培养24h10ml水样1ml水样0.1ml水样10ml双料乳糖蛋白胨培养液10ml单料乳糖蛋白胨培养液10ml单料乳糖蛋白胨培养液都不产酸产气判阴性产酸产气管EMB染色镜检乳糖蛋白胨培养液革兰氏阴性无芽孢杆菌产酸产气判总大肠菌群存在典型特征菌落在36℃下培养24h10ml双料乳糖蛋白胨培养液10ml单料乳糖蛋白胨培养液10ml单料乳糖蛋白胨培养液都不产酸产气产酸产气管EMB染色镜检革兰氏阴性无芽孢杆菌产酸产气典型特征菌落第9页/共38页多管发酵法结果大肠菌群在伊红美蓝培养基上的典型菌落特征大肠菌群革兰氏染色显微镜下的形态第10页/共38页第11页/共38页滤膜法定义：是指用孔径为0.45μｍ的微孔滤膜过滤水样，将滤膜贴在选择性品红亚硫酸钠培养基上37℃培养24h，能形成紫红或红色有金属光泽的需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。培养基品红亚硫酸钠培养基乳糖蛋白胨培养液设备：显微镜，过滤设备第12页/共38页检测步骤过滤水样：过滤设备显色培养，染色镜检：24h复发酵：阳性接种，24h第13页/共38页第14页/共38页酶底物法

EnzymeSubstrateTest第15页/共38页常用的色原和荧光底物色原（荧光）糖苷结合物糖苷酶色原（荧光）氨基酸结合物氨基肽酶常用呈色的色原有：α、β萘酚，邻位或对位硝基酚，对硝基苯胺，酚酞，2-氨4-硝基苯等，如ONPG(邻硝基酚-B-D半乳糖苷)

常用的荧光物有：4-甲基伞形酮（4MU），7氨基4甲基伞形酮香豆素如MUG(四甲基伞形酮-B-D-葡萄糖苷)第16页/共38页总大肠菌群酶底物法定义：

在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培养基呈黄色的细菌群组。培养基：

MMO-MUG培养基

设备：压膜机第17页/共38页检测步骤加样：干粉培养基加入到100mL水样中压膜：专用压膜机分装培养：36±1℃的培养24h结果判读：24h培养后颜色变成黄色判断为阳性反应；培养24h后判读，为可疑阳性，可延长培养到28h判读，超过28h之后出现的颜色反应不作为阳性结果。第18页/共38页第19页/共38页总大肠菌群酶底物法检测示意图第20页/共38页耐热大肠菌群检测方法多管发酵法滤膜法第21页/共38页多管发酵法定义：用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分开，在44.5℃仍能生长的大肠菌群，称为耐热大肠菌群。培养基：

EC培养基伊红美蓝琼脂设备：无特殊设备第22页/共38页检测步骤初发酵（同总大肠菌群），24h耐热培养：阳性管接种，24h显色培养：阳性管接种，24h第23页/共38页第24页/共38页滤膜法定义：

用孔径为0.45μｍ的滤膜过滤水样，细菌被阻留在膜上，将滤膜贴在MFC培养基上，44.5℃培养24h能形成蓝色菌落的细菌为耐热大肠菌群。培养基：MFC培养基EC培养基设备：过滤设备第25页/共38页第26页/共38页第27页/共38页大肠埃希氏菌检测方法多管发酵法滤膜法酶底物法第28页/共38页多管发酵法定义：指多管发酵法总大肠菌群阳性，在EC-MUG培养基上44.5℃培养24±2h产生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase），分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）并产生荧光产物，使培养基在波长366nm紫外光下产生蓝色荧光的细菌。

培养基：EC-MUG培养基设备：紫外灯：波长366nm第29页/共38页检测步骤初发酵（同总大肠菌群），24h耐热显色培养：阳性管接种，24h荧光观测，报告第30页/共38页第31页/共38页大肠埃希氏菌酶底物法检测示意图第32页/共38页生活饮用水非常规检测项目贾第虫和隐孢子虫检测方法:水样过滤---洗涤离心---免疫磁珠分离---荧光标记和DAPI染色---显微镜检查记述---结果报告在2012年成为常规检验项目第33页/共38页微生物指标检验方法的总结第34页/共38页总大肠菌群三种方法比较多管发酵法滤膜法酶底物法时间24h-72h24h-48h24h-28h验证试验需要需要不需要步骤较繁锁较简便简便可操作性强特殊设备显微镜显微镜过滤设备压膜机价格

低低较高第35页/共38页大肠