单细胞悬液制备仪在皮肤单细胞悬液制备及测序过程中的应用

———单细胞悬液制备仪在皮肤单细胞悬液制备及测序过程中的应用

作为哺乳动物最大的器官，皮肤是动物与外界环境间最主要的物理屏障；由于生活习性和所处的外界环境不同，皮肤的功能和表面的微生物组成等都会发生变化。同时，皮肤又是独特的免疫器官，在维持稳态和抵抗各种病理条件时，发挥独特的免疫功能。皮肤组织内包含如朗格汉斯细胞、巨噬细胞、树突细胞等多种免疫细胞。在单细胞测序应用领域，研究者往往需要对皮肤组织内的不同细胞亚群进行分类，并在不同疾病模型下定位靶细胞，同时在进行肿瘤类研究时（如黑色素瘤和鳞状细胞癌等）也需要对肿瘤亚型及细胞的识别。

只有制备高质量的单细胞悬液才能保证下游实验的顺利进行，但是常规手工解离皮肤组织，不但费时，且获得的细胞悬液碎片高，产量低，同时还易结团，细胞活性差，严重影响下游研究的开展，如单细胞测序。因此在进行皮肤组织单细胞悬液制备时，需要更加简单快捷的方法，在提高实验效率同时，又能保证实验样本的质量。

瑞沃德单细胞悬液制备仪，通过组织处理管机械剪切，配合酶解试剂盒和内置的处理程序及温控系统，只需将样本放入，设好程序，即可轻松获得高质量皮肤单细胞悬液，获得的细胞可直接用于后续实验，如单细胞测序、原代细胞培养、细胞分选等。

有了高质量的单细胞悬液后，高效稳定且高性价比的单细胞测序平台将保障下游实验结果的质量与大规模应用的可能。达普生物Galaxy单细胞建库平台基于专利的微流控油包水单细胞包裹技术与微球编码配套技术，可快速实现1-4样本的单细胞测序文库构建。经过生信分析软件StarScope处理后，表达矩阵结果兼容几乎所有下游生信分析软件，轻松得到单细胞测序实验数据。

下面为大家展示一下，瑞沃德单细胞悬液制备仪和达普生物单细胞建库平台无缝对接的样本制备与单细胞建库测序结果。

单细胞悬液制备

样本：小鼠耳部皮肤、背部皮肤。

制备方法：

1.试剂准备

使用试剂盒中配套的Buffer将酶A、B、C分别充分溶解。

2.样本准备

将剪下的小鼠背部皮肤置于冷PBS缓冲液中，用手术剪或手术刀的闭合圆边尖端分离皮肤样本后清洗3遍；耳部皮肤去除无毛部分，用镊子将背腹侧分开，用镊子轻轻刮耳朵内侧，去除残留软骨，然后将皮肤切成约1cm2的组织块。

图1.小鼠背部皮肤处理

图2.小鼠耳部皮肤处理3.程序处理

将组织块和酶mix放入组织处理管，安装加热套，运行加热程序"M_Skin_Heater_1'。

4.单细胞悬液收集

程序运行结束后，用润湿后的40m细胞滤器过滤细胞悬液样本，50mL离心管收集细胞悬液，500g离心8min，彻底弃掉上清后，用适当缓冲液重悬后用于单细胞测序、流式细胞术或原代细胞培养等。

实验结果图3.耳部皮肤

图4.背部皮肤

单细胞测序结果

达普生物先对上述悬液进行成像质检，并选取背部皮肤组织单细胞悬液，用其自主研发的Galaxy单细胞建库平台及配套的转录组试剂盒进行单细胞建库测序。

测序结果

1）达普StarScope软件分析结果：

2）UMAP聚类分析：

与发表文献对比，所有细胞类群能够mapping，比例高度相似，并且线粒体基因百分较低，证实利用达普Galaxy对皮肤组织样本单细胞转录组测序的可行性及瑞沃德单细胞悬液制备仪解离的皮肤组织样本可直接对接达普Galaxy单细胞建库系统。图5.UMAP图

图6.Reference：ASingleCellTranscriptomicAtlasCharacterizesAgingTissuesintheMouse

以上单细胞转录测序结果显示：通过瑞沃德自动单细胞悬液制备系统制备的皮肤组织样本可以直接用于达普Galaxy单细胞建库平台，不但缩短样本悬液制备时间，同时高质量的悬液质量，减少了单细胞建库过程中样本优化及减少一些碎片对反转录的影响，保证了建库质量，整体上缩